国家自然科学基金(81172871)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 相关作者：焦志军王文红刘强陈艳王旭辉更多>>
- 相关机构：江苏大学附属医院江苏大学苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅医学科技发展基金江苏省“333工程”培养资金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 无需抽提RNA直接定量血浆microRNAs的实时荧光定量PCR方法的建立与评价被引量：1
- 2014年
- 目的建立无需抽提RNA直接以血浆中的microRNAs（miRNAs）作为模板进行实时荧光定量PCR检测的新方法。方法方法学建立。采集健康人EDTA—K，抗凝静脉血并分离血浆，取7．5μl血浆用等量含2．5％（体积比）Tween20的缓冲液处理后进行逆转录及PCR，建立血浆miRNAs直接检测法。用该方法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR--4634表达水平，评估其扩增的特异性和扩增效率。同时与传统的抽提RNA定量PCR检测法的阈值循环数（cq）值进行比较并作相关性分析。另外，应用建立的血浆直接检测法，比较了混合引物和单个引物逆转录法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR-4634结果的一致性。结果血浆直接检测法融解曲线显示健康人血浆标本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634扩增产物分别在8l、83、84．2℃时出现单一峰，无引物二聚体峰和其他非特异峰出现。血浆直接检测法检测miR．24—1—5p扩增效率为1．1，同一份样本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634这3种基因的扩增曲线平行，说明扩增斜率一致。直接检测法检测miR-4634的cq值为30．98±0．17，高于RNA抽提法的29．22±0．21，差异有统计学意义（t=8．475，P〈0．01），而2种方法检测u6（直接检测法32．43±0．08，RNA抽提法32．57±0．06；t=1．354，P〉0．05）、miR-24—1-5p（直接检测法20．73±0．14，RNA抽提法21．064-0．21；t=1．749，P〉0．05）结果差异均无统计学意义。2种方法检测U6（r=0．8605，P〈0．01）、miR．24—1—5p（r=0．7289，P〈0．05）和miR-4634（r=0．7485，P〈0．01）结果具有较好的相关性。混合引物和单个引物逆转录后PCR的cq值之间无明显差异。结论建立的血浆直接检测法只需对血浆标本进行简单的预处理，并可使用混合引物进行逆转录定量PCR，具有操作简便、检测成本低等优点，值得进一步推广应用。（中华
- 张莹莹焦志军段唐海刘美红王文红陈艳刘强熊御云
- 关键词：微RNAS实时聚合酶链反应血浆
- 液相芯片技术在临床检验中的应用进展被引量：6
- 2014年
- 液相芯片技术平台为临床诊断中的多重指标分析及批量标本检测提供了自动化的检测手段,可以从少量样本中快速得到大量的辅助诊断信息,正逐步从科学研究实验室进入临床实验室,在多种肿瘤标志物联合检测、自身抗体筛查、人类白细胞抗原（HLA）分型及感染性病原体基因检测等方面具有重要的临床应用价值.但目前仍存在较多制约该技术广泛应用于临床诊断的因素,应进一步做好组合项目的开发及检测的规范化工作,充分利用这一高通量、高灵敏度和高重复性的检测平台,为临床疾病的诊断、治疗及预防提供科学、准确的实验室依据.
- 王文红熊御云焦志军
- 关键词：微球体流式细胞术微阵列分析
- 小鼠Th17细胞体外诱导扩增的实验研究被引量：2
- 2012年
- 近年来的研究发现Th17细胞在多种自身免疫性疾病、炎症及肿瘤的发生与发展中发挥重要的作用。由于此类细胞以分泌的胞内细胞因子为标记，所以目前尚没有较好的分离纯化方法。本实验探讨了体外扩增Th17细胞的实验方法及影响因素，以期为进一步研究其表型与功能奠定基础。
- 王文红邵世和焦志军陈艳尤海燕陈蕾汪毅
- 关键词：TH17细胞体外诱导扩增自身免疫性疾病小鼠分离纯化方法影响因素
- 短发夹RNA下调Notch2表达对食管鳞癌Eca109细胞增殖的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 :探讨通过转染短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调Notch2表达的方法阻滞Notch2信号通路对食管鳞癌Eca109细胞增殖的影响。方法 :首先应用实时荧光定量-PCR法检测包括食管鳞癌Eca109细胞在内的多种肿瘤细胞中Notch受体的表达水平。然后将无效shRNA(Control-shRNA)和针对Notch2基因的shRNA(Notch2-shRNA)分别转染高表达Notch2的Eca109细胞。实时荧光定量-PCR法检测转染后Notch2及其下游靶基因Hes1的mRNA表达,蛋白质印迹法检测转染后Notch2蛋白的表达,CCK-8(cell counting kit-8)法检测Eca109细胞增殖情况,FCM法检测细胞周期变化。结果:食管鳞癌Eca109细胞中Notch2 mRNA高表达。与Control-shRNA转染组相比,Notch2-shRNA转染后Eca109细胞中Notch2 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.01),下游靶基因Hes1的mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Notch2-shRNA转染72 h后,Eca109细胞增殖率明显降低(P<0.05);G0/G1期细胞所占百分率为(70.66±6.25)%,明显高于Control-shRNA组的(45.34±1.88)%和未转染对照组的(47.10±1.70)%(P<0.01)。结论 :Notch2在体外培养的食管鳞癌Eca109细胞中高表达,下调Notch2表达可以通过诱导G0/G1期细胞阻滞而减缓Eca109细胞的体外增殖。
- 王旭辉花盛浩邓敏肖力红周星周荣胡娟曹志勤刘强焦志军
- 关键词：食管肿瘤NOTCH2细胞增殖
- DAPT对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响机制探讨被引量：3
- 2013年
- 目的:观察γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路对食管鳞状细胞癌细胞株增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用γ-分泌酶抑制剂DAPT处理培养的食管鳞癌Eca109和TE-1细胞株以阻断Notch信号,分别应用CCK-8试剂和流式细胞术检测两种食管鳞癌细胞株的增殖与凋亡情况;同时采用定量PCR检测细胞Notch受体及靶基因Hes-1mRNA的表达,蛋白质印迹法检测与细胞增殖、凋亡相关蛋白Cyclin D1和Bcl-2的表达。结果:DAPT处理明显抑制了食管鳞癌Eca109和TE-1细胞株增殖,5μmol/L DAPT处理Eca109细胞株72h、TE-1细胞株96h后增殖抑制率分别为(61.8±5.3)%和(59.8±2.9)%,与DMSO对照组(17.2±2.6)%和(7.0±2.1)%相比差异有统计学意义,P=0.000 2和P<0.000 1,且抑制作用呈时间和浓度依赖关系。DAPT可诱导Eca09和TE-1细胞株凋亡,5μmol/L DAPT处理组Eca109细胞凋亡率在24和48h分别为(18.24±2.60)%和(21.77±5.82)%,与相应对照组(10.49±2.27)%和(9.74±3.38)%相比凋亡率增加,差异有统计学意义,P值分别为0.017 8和0.036 4;处理组TE-1细胞凋亡率在24和48h分别为(20.21±5.90)%和(32.14±5.92)%,与相应对照组(8.00±2.84)%和(12.59±3.72)%相比凋亡率增加,差异有统计学意义,P值分别为0.032 1和0.008 4。DAPT处理下调两种细胞株Notch2受体、Notch信号靶基因Hes-1及Cyclin D1的表达水平。DAPT处理可上调Eca109细胞Bcl-2水平,但下调了TE-1细胞中Bcl-2水平。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制食管鳞癌细胞株增殖并促进其凋亡,其机制可能与DAPT阻断Notch信号活化、调控Cyclin D1和Bcl-2的表达有关,阻断Notch信号通路有望成为食管鳞状细胞癌治疗的新靶点。
- 王旭辉花盛浩王慧王文红刘强陈艳尤海燕焦志军
- 关键词：食管肿瘤DAPTNOTCH信号传导
- Notch信号通路与消化系统肿瘤相关性的研究进展被引量：12
- 2012年
- Notch信号是一种遗传进化上高度保守,反映相邻细胞间通信作用的一种信号通路,其不仅在细胞正常发育、分化增殖和凋亡中起着重要的作用,而且与多种肿瘤的发生和发展具有相关性。食管鳞状细胞癌的发生常伴随Notch-1的低表达,但食管腺癌的发生却与Notch信号的高表达相关,且高表达的Notch信号对胃癌形成具有促进作用,其表达量提高的程度预示胃癌形成风险的高低。结肠癌中Notch-1表达的升高与病理分级、淋巴转移和病程相关,而Notch配体Dll-4可促进结肠癌中新生血管的生成有助于癌细胞的转移和远端浸润,与之相反的是Notch-2却可能起到抑制结肠癌生长的作用。总之,目前Notch信号多被视为致癌因素,可促进肿瘤的生长,但在某些肿瘤中也能够诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞的增殖,表现为致癌与抑癌两种截然相反的作用。应用γ-分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitor,GSI)、小RNA干扰技术和单克隆抗体等方法阻断Notch信号通路,将成为肿瘤治疗的一个新方向。
- 王旭辉焦志军
- 关键词：消化系统肿瘤配体肿瘤治疗方案
