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淹水和旱作水稻土中细菌群落多样性的空间分布: 本文采用 ARDRA(amplified ribosomal DNA restriction analysis)的方法对不同耕作条件下的水稻土壤中的细菌多样性及其在0-5、5-10、10-15cm 土层的空间分布进行了研...; 王英滕齐辉曹慧胡锋崔中利; 关键词：水分 ARDRA 水稻土; 文献传递

不同有机肥施用量对红壤固氮基因(nifH)多样性的影响: 固氮酶基因 nifH 广泛存在于固氮微生物体中,是研究固氮微生物群落结构的良好标记。采用 PCR-RFLP 的未培养方法, 扩增固氮微生物中固氮酶的保守基因 nifH,以酶切分型与基因序列测定揭示不同有机肥施用量对固氮微...; 滕齐辉曹慧孙波李顺鹏崔中利; 关键词：生物固氮有机肥; 文献传递

甲基对硫磷水解酶参与催化相关结构的研究被引量：1: 2005年; 甲基对硫磷水解酶(MPH)是一种新的有机磷水解酶。将完整的甲基对硫磷水解酶基因(mpd)构建入pUC19载体,使得mpd基因以自身的启动子在EscherichiacoliDH5α中表达并得到了纯化。金属螯合实验发现MPH的活性不受金属螯合剂1,10菲啉的影响;但用电感耦合等离子发射光谱测定其金属含量显示MPH是金属酶,1mol酶中结合了2mol的Zn2+。为确定参与MPH催化活性的必需氨基酸,用化学修饰剂碳化二亚胺、二乙基焦磷酸酯、磷酸吡哆醛和丁二酮处理MPH,然后检测其残余酶活力,结果表明天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸和精氨酸残基与酶的催化活性无关;而二乙基焦磷酸酯对组氨酸侧链的化学修饰引起酶活性的大幅度的下降,其对酶活性的抑制率达到9.6h-1,说明组氨酸是酶活力所必需的基团。这些结果为进一步研究酶的结构及对酶进行分子改造提供了必要的基础数据。; 吴旭平刘卫东曹慧李顺鹏崔中利; 关键词：甲基对硫磷水解酶化学修饰必需氨基酸

高产水稻土细菌多样性的培养法与非培养法比较研究被引量：9: 2008年; 利用细菌的通用引物扩增江西余江县高产水稻土红壤细菌总DNA和平板培养细菌混合总DNA的16S rDNA基因片段,在此基础上分别建立两种16S rDNA文库(文库a和文库b)。从两个文库中各随机挑选100个克隆,扩增出阳性克隆中的插入片段后选用HhaⅠ和RsaⅠ两种四碱基酶进行ARDRA(amplified rDNA restriction analysis)分析。统计比较分析发现,文库a的Shannon-Wienner指数、Simpson指数、丰富度、均一度分别为4.432、0.987、18.885和0.973,均高于文库b中相应的多样性参数(分别为2.271、0.758、5.736和0.501),即平板培养方法所展现的细菌群落结构多样性低于土壤中原始的多样性。结果表明,传统培养方法存在着很大的局限性,必须结合新的分子生物学技术手段才能更全面完善地认识土壤微生物群落结构多样性,以期充分利用其中丰富的微生物资源。; 崔中利刘娟曹慧骆永明赵其国; 关键词：ARDRA

红壤荒草地氨氧化细菌富集液16S rDNA文库的RFLP分析被引量：13: 2006年; 分析红壤荒草地富集液中氨氧化细菌的种群组成,选取氨氧化细菌16S rDNA特异性引物序列,利用PCR技术对从富集液中抽提的细菌总DNA进行扩增,并建立了氨氧化细菌特异性的16S rDNA文库。用酶HhaⅠ和RsaⅠ对该文库特异性片段进行了限制性酶切片断长度多态性分析(Restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP),随机挑选的35个特异性克隆片段被分成3个不同的RFLP类型,其中优势型占了所有分析克隆子的94%,另两个型各占3%。从每个RFLP类型中挑取一定的转化子进行测序,测序结果经GenBank检索,发现在该富集液体系文库中存在大量亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)细菌序列,由此推测红壤荒草地中存在氨氧化细菌,Nitrosomonas属细菌能在富集条件下成为优势菌。; 张丽娜曹慧崔中利孙波李大力李顺鹏; 关键词：氨氧化细菌 RFLP 红壤

大肠杆菌单拷贝rRNA操纵元菌株的构建及其生长特性研究: 2008年; 以1株染色体上的5个rRNA操纵元(rrnA、rrnD、rrnE、rrnG和rrnH)被敲除的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株SQ88为出发菌,运用λRed同源重组系统和卡那霉素抗性基因筛选重组子,并利用抗性基因两端的FRT位点通过位点专一性重组将抗性基因去除,最终成功构建了1株仅具有单拷贝rRNA操纵元(rrnB)的E.coli菌株——SQ88C。试验结果发现,此菌株并未出现明显的生长障碍,其生长速率和rRNA/蛋白值与出发菌株SQ88相比有所下降,但并不显著。从而证明了单拷贝rRNA操纵元在一定条件下能够满足大肠杆菌正常生长的需要,也为在大肠杆菌及其他菌株中快速精确地构建多rRNA基因缺失菌株提供了有益的参考,并可望在16S rRNA基因突变研究等方面发挥一定的作用。; 杨瑾李晓丹曹慧管莉菠崔中利; 关键词：大肠杆菌 RED同源重组 RRNA基因

生物表面活性剂产生菌的分离培养及其产物特性研究被引量：18: 2004年; 从加油站受石油污染的土壤中分离到1株高效产生物表面活性剂的菌株,经鉴定为气生单孢菌(Aeromonas sp.)。并对其发酵液表面活性剂性能及稳定性进行分析,最佳条件下发酵液的表面张力可由70.2 mN/m 降至28.9 mN/m,对温度、pH、矿化度有较好的稳定性,维持85 %以上油水乳化液稳定时间达到350 h。对其发酵条件进行了优化,确定表面活性剂产生最适C源为2 %甘油,以硝酸盐和铵盐作为N源对表面活性剂产生无影响。对其产生物表面活性剂进行提纯,经TLC分析初步确定该表面活性剂为糖脂类化合物。; 崔中利刘卫东齐耀程孙亮亮陈兵; 关键词：生物表面活性剂稳定性发酵条件糖脂

一种土壤微生物总DNA的高效提取方法被引量：37: 2004年; 获得高浓度、大片段、多样性程度高的土壤微生物总DNA 是研究土壤微生物群落结构的分子生态学基础。本文采用间接法(菌体细胞回收法)提取红壤地区两种土壤类型的土壤微生物总DNA,定量计算其回收率,并与直接法(细胞原位裂解法)比较了提取效率和纯度。结果表明:红壤地区2种土壤每克干土的总DNA提取量,间接法约为0.34和0.53礸/g干土,直接法约为13.62和24.32礸/g干土;间接法的提取效率低于直接法,但所得DNA片段较大,且Sau 3AⅠ 酶切和16 S rDNA通用引物PCR扩增结果显示,间接法比直接法更能有效地去除土壤中的某些抑制剂,所得总DNA的纯度更高,有利于后续操作。; 黄婷婷曹慧王兴祥崔中利; 关键词：土壤微生物总DNA提取

江西典型红壤区土壤细菌基因组文库构建及功能初步分析被引量：4: 2006年; 黄婷婷崔中利张璐曹慧李顺鹏; 关键词：红壤 DNA提取基因组文库

太湖地区典型菜地土壤微生物16S rDNA的PCR-RFLP分析被引量：63: 2006年; 土壤微生物多样性是土壤生态功能的基础,但长期以来缺乏对高强度土地利用条件下的土壤微生物多样性的认识。作者采用间接法提取了江苏省太湖地区典型菜地土壤微生物的总DNA,以细菌的通用引物27F和1492R扩增16SrDNA片段,将扩增产物与T-载体酶连,转化大肠杆菌,建立土壤微生物16SrDNA克隆文库。PCR扩增基因文库中插入的16SrDNA外源片段,用两种限制性内切酶HhaI和RsaI分别酶切,获得该土壤173个克隆的酶切指纹图谱。结果表明,HhaI和RsaI联合酶切产生了63个基因分型,文库的覆盖度达76.30%,单一酶切产生的基因分型少,但文库的覆盖度高;克隆文库中存在两种优势类群,分别占总克隆的16%和12%。16SrDNA测序结果表明,太湖地区菜地土壤细菌在分类方面主要属于-和-变形杆菌亚门。以上结果为进一步研究太湖地区菜地土壤微生物生态功能提供了基础资料。; 滕齐辉曹慧崔中利王英孙波郝红涛李顺鹏; 关键词：土壤细菌多样性 RFLP分析

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