安徽省自然科学基金(03043801) 作品数:8 被引量:40 H指数:4 相关作者: 沈彤 朱启星 丁锐 涂登云 周承藩 更多>> 相关机构: 安徽医科大学 更多>> 发文基金: 安徽省自然科学基金 安徽省高校省级自然科学研究项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
三氯乙烯诱导皮肤角质形成细胞凋亡的体外研究 被引量:3 2005年 目的检测三氯乙烯(TCE)对人表皮角质形成细胞(NHEK)的凋亡诱导作用,探讨TCE皮肤毒性的作用靶。方法采用中性红吸附试验测定TCE对体外无血清培养的NHEK的中性红吸附减少50%的浓度(NR50值),确定TCE染毒剂量;测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力反映细胞脂质过氧化作用和氧化状态;用透射电子显微镜(TEM)和流式细胞仪(FCM)观察细胞凋亡形态学改变和测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数(PI)。结果TCE对NHEK的NR50值为4.53(3.92~5.13)mmol/L;TCE处理NHEK4h后,MDA含量的增加和SOD活力的抑制均具有剂量-效应关系(r=0.98,r=0.93,P<0.01);TEM观察显示,与对照相比,TCE处理组细胞可见明显凋亡改变;FCM测定显示,DNA含量直方图中G1期前可见明显的凋亡峰,与对照组相比,TCE处理组细胞凋亡率明显增高(空白对照及TCE0.125、0.500、2.000mmol/L组分别为18.42%、31.83%、38.63%、44.35%),而PI则明显降低(空白对照及TCE0.125、0.500、2.000mmol/L组分别为4.99%、3.26%、2.48%、2.07%)。结论在体外培养条件下,TCE可通过脂质过氧化和氧化应激作用诱导NHEK凋亡,抑制其增殖。 沈彤 马泰 丁锐 涂登云 朱启星关键词:三氯乙烯 细胞凋亡 三氯乙烯 体外研究 细胞DNA含量 人表皮角质形成细胞 四氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒性作用 被引量:2 2006年 [目的]研究体外培养条件下有机溶剂四氯乙烯(perchloroethylene,PERC)对正常人表皮角质形成细胞(normal human epidermis keratinocyte,NHEK)的细胞毒性作用。[方法]用0.25%的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤,分离得到NHEK,进行体外无血清培养;用中性红吸附试验(NRU)测定PERC对NHEK的中性红吸附减少50%的浓度(NR50值),并据此确定PERC细胞毒性试验的染毒剂量;测定乳酸脱氢酶(LDH)活力反映其对细胞膜的损害,测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力反映细胞脂质过氧化作用。[结果]PERC可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低,PERC对NHEK的NR50值为2.16mmol/L(95%可信区间为1.27,3.07);0.05、0.10、0.20、0.40、0.80mmol/LPERC处理NHEK1、2、3、4h后,LDH的释放呈明显剂量-反应和时间-反应关系;以上浓度的PERC处理NHEK4h,可引起MDA含量增加和SOD活力抑制,且均显示剂量-反应关系,与空白对照组、溶剂对照组相比,引起差异有显著性的最低浓度分别为0。20mmol/L(MDA升高)和0.10mmol/L(SOD降低),均为P,〈0.05。[结论]在体外培养条件下,PERC可能通过氧化应激和脂质过氧化作用对人角质形成细胞产生细胞毒性作用。 沈彤 丁锐 涂登云 马泰 周承藩 于均峰 朱启星关键词:四氯乙烯 角质形成细胞 细胞毒性作用 维生素E和银杏叶提取物对3种氯代烯烃细胞毒性的拮抗作用 被引量:4 2005年 目的 探讨维生素E和银杏叶提取物(ginkgobilobaextract,GbE)对三氯乙烯(trichloroethylene ,TCE)、四氯乙烯(perchloroethylene ,PCE)和二氯乙烯(dichloroethylene ,DCE)所致人角质形成细胞(keratinocyte ,KC)细胞毒性的拮抗作用。方法 利用中性红吸附(neutralreduptake ,NRU)试验和乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase ,LDH)释放试验分别测定细胞活力和细胞毒性,分析维生素E和GbE对3种氯代烯烃的细胞毒性拮抗作用。结果 维生素E和GbE对3种氯代烯烃的细胞毒性具有明显的拮抗作用,在10~10 0mmol L(mg L)范围内呈明显的剂量 效应关系,当维生素E浓度达到5 0mmol L ,GbE浓度达到15 0mg L时,细胞基本恢复为正常的状态。结论 vE和GbE对3种氯代烯烃所致KC细胞毒性的拮抗作用可能与它们稳定细胞膜结构,减少细胞膜损伤有关。 周承藩 沈彤 丁锐 涂登云 于均峰 马泰 朱启星关键词:银杏叶提取物 维生素E 细胞毒性 人角质形成细胞 细胞膜损伤 GBE 银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞凋亡的影响 被引量:5 2006年 目的 研究体外培养条件下银杏叶提取物(ginkgo biloba leaf extracts.EGb)对三氯乙烯(trichioroethvlene,TCE)诱导的正常人表皮角质形成细胞(normal human epidernis keratinocyte,NHEK)凋亡的影响。方法体外培养条件下,用中性红吸附试验(NRU)测定TCE对NHEK的中性红吸附减少50%的质量浓度(NR50值)和EGb的最低有效保护质量浓度。用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞仪(flow cytometer,FCM)测定细胞DNA含量并计算凋亡发生率。结果 TCE对NHEK的NR50值为4.53(3.92~5.13)mmol/L;用10、50、100、150和200mg/LEGb预孵育NHEK2h时,由2.0mmol/L TCE引起的细胞活力的下降随EGb剂量的增加逐渐恢复,且150mg/L为最低有效保护剂量。TCE可引起NHEK的超微结构呈凋亡改变,凋亡发生率呈剂量依赖式增加。与0.125、0.5和2.0mmol/L TCE暴露组相比,150mg/L EGb预孵育组,细胞超微结构恢复到正常对照组水平,凋亡发生率明显减少。结论 体外培养条件下,EGb可以抑制TCE诱导的NHEK的细胞凋亡。 沈彤 丁锐 涂登云 马泰 周承藩 于均峰 朱启星关键词:银杏叶提取物 三氯乙烯 角质形成细胞 三氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒作用 被引量:1 2006年 目的研究体外培养条件下有机溶剂三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)对正常人表皮角质形成细胞(normal humanepidermal keratinocyte,NHEK)的毒性作用。方法用0.25%的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤,分离得到NHEK.进行体外无血清培养;根据中性红吸附试验测定的NR50结果,确定TCE染毒剂量。测定乳酸脱氢酶(LDH)活力,反映其对细胞膜的损害,测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力.反映细胞脂质过氧化作用。结果TCE可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低,TCE对NHEK的NR50值为4.525mmol/L(3.922~5.128mmol/L);NHEK细胞用0.125,0.250,0.500,1.000,2.000mmol/L的TCE处理1,2,3,4h后,LDH的释放显示明显的时间-剂量-反应关系;同样剂量的TCE处理NHEK,4h后可引起MDA含量呈浓度依赖性增加(最低浓度为0.500mmol/L).SOD活力呈浓度依赖性抑制(最低浓度为0.250mmol/L),与空白对照和溶剂对照组相比较,两者差异均有显著性(P〈0.05)。结论在体外培养条件下,有机溶剂三氯乙烯可通过脂质过氧化和氧化应激作用对人角质形成细胞产生明显的细胞毒作用。 沈彤 丁锐 涂登云 马泰 周承藩 于均峰 朱启星关键词:三氯乙烯 角质形成细胞 细胞毒作用 一氧化氮与角质形成细胞凋亡的研究进展 被引量:2 2005年 一氧化氮(NO)是一种自由基,也是一种具有重要生理和病理功能的信使分子。广泛分布于生物体内各种组织之中,在皮肤、心、脑、肝和免疫调节等病理和生理过程中有着十分重要的生物学作用。近年来的研究显示NO能双向调节角质形成细胞(KC)的凋亡,对许多皮肤疾病的发生发展产生重要影响,然而该调节机制目前尚未完全阐明,本文将综述NO对KC凋亡的双向调节机制研究进展以及一些与NO调节失调相关的皮肤疾病。 周承藩 沈彤 朱启星关键词:一氧化氮 人皮肤角质形成细胞的胰蛋白酶消化分离及无血清培养 被引量:20 2003年 目的 探索用DMEM SF培养基对经胰蛋白酶两步消化分离的人角质形成细胞进行培养的方法和条件。方法 取临床整形外科手术后剩余皮肤 ,用 0 2 5 %的胰蛋白酶经冷和温两步消化分离后 ,用DMEM SF完全培养基于 5 %CO2 、37℃培养 ,绘制生长曲线 ,并用单克隆抗角蛋白抗体和鼠 IgG免疫组化试剂盒进行细胞鉴定。结果 用胰蛋白酶两步消化分离的角质形成细胞在DMEM SF培养基中可正常生长 2周以上 ,生长曲线显示细胞在第 4天进入对数生长期 ,第 10天进入停滞期。鉴定显示角质形成细胞占 95 %以上。来源于 3个不同个体的皮肤角质形成细胞经等量混合后培养与单独培养相比 ,细胞生长无统计学差异。结论 用胰蛋白酶对人皮肤进行冷和温两步消化分离的角质形成细胞 ,在DMEM SF完全培养基中生长状况良好 ,其他细胞污染少 ,实验成本低廉 ,操作简单。 丁锐 沈彤 涂登云 魏凌珍 孙美芳 朱启星关键词:人皮肤角质形成细胞 胰蛋白酶 无血清培养 细胞培养 细胞鉴定 三种氯代烯烃对人角质形成细胞的细胞毒性作用 被引量:10 2005年 目的 探讨三氯乙烯(trichloroethylene ,TCE )、四氯乙烯(perchloroethylene ,PCE )和二氯乙烯(dichloroethylene ,DCE)对人角质形成细胞(keratinocyte ,KC)的细胞毒性作用以及其时间 剂量 效应关系。方法 利用中性红吸收(neutralreduptake ,NRU)试验测定TCE、PCE和DCE对人KC的中性红半数吸收浓度(5 0 %neutralreduptake ,NR50 ) ,用乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase ,LDH)释放试验研究三者对人KC细胞毒作用,并探讨其时间 剂量 效应关系。结果 TCE、PCE和DCE对人KC的NR50 分别4 .5 3mmol/L、2 . 16mmol/L和5 . 5 7mmol/L ,LDH释放试验表明三者对人角质形成细胞具有明显的细胞毒作用,且具有时间 剂量 效应关系。结论 TCE、PCE和DCE都对人KC具有细胞毒性,且PCE >TCE >DCE。这可能与三者对人KC的细胞膜损伤有关。 周承藩 丁锐 沈彤 涂登云 朱启星关键词:三氯乙烯 四氯乙烯 二氯乙烯 角质形成细胞 细胞毒性