国家自然科学基金(39870653)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：山东大学山西医科大学泰安市中心医院更多>>
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- 表达HPV6b L1-E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠免疫应答
- 2003年
- 目的 探讨表达人乳头状瘤病毒 6b型 (HPV6b)L1 E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠粘膜及系统免疫反应的可行性。方法 对重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7体外厌氧诱导其表达 ,Westernblot方法鉴定表达的L1 E7蛋白。此重组沙门菌经滴鼻和口服联合粘膜免疫BALB c小鼠 ,采用ELISA方法及足垫肿胀试验分别检测免疫小鼠血清及阴道冲洗液中特异性抗体和DTH反应。结果 Westernblot分析显示 ,重组沙门菌在预计相对分子质量 (Mr) 5 6× 10 3 处有特异染色带 ,提示此重组沙门菌能表达特异的HPV6bL1 E7蛋白。ELISA检测结果表明实验组小鼠阴道冲洗液中HPV6bL1特异性sIgA显著升高 ,和对照组比较两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ,但小鼠血清中HPV6bL1IgG抗体无明显变化 ,实验组和对照组两者差异无显著性。DTH结果显示 :与对照组比较 ,实验组小鼠接受HPV6bL1 E7抗原刺激后产生明显阳性反应 ,提示重组沙门菌免疫小鼠产生了针对HPV6bL1 E7抗原的特异性细胞免疫反应。结论 构建的重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7可激发有效的粘膜免疫及细胞免疫反应 ,为进一步研制新型HPV粘膜疫苗奠定了实验基础。
- 孙新六赵蔚明卞继峰于修平贾继辉周亚滨栾怡齐眉王红
- 关键词：HPV6B嵌合蛋白减毒沙门菌小鼠免疫应答尖锐湿疣
- 人tRNA^(ser)基因真核表达质粒的构建及对FRL-19肝癌细胞的高效转染被引量：1
- 2003年
- 目的:构建人tRNAser(CGA)基因与真核表达载体pSV2neo的重组体,探讨细胞高效转染新方法,研究tRNA种类及丰度对转录后翻译水平的影响;为探索基因治疗新思路打下基础。方法:EcoRI酶切pGEM-TeasytRNAser(CGA)质粒释放目的基因tRNAser(CGA)片断,与pSV2neo载体构成重组体,双酶消化鉴定重组载体插入方向。扩增纯化构建的pSV2neotRNAser(CGA)质粒,经脂质体和Plus试剂混合包装,转染FRL-19肝癌细胞株。用Hirt方法提取胞浆DNA,做Southernblot。结果:用Nsil和BamHI双酶切鉴定获得正确方向的重组质粒pSV2neotRNAser(CGA),DNA测序显示其序列正确。Southernblot结果显示:在400bp处可见一条特异DNA条带,说明pSV2neotRNAser(CGA)已转入FRL-19细胞。结论:成功构建人pSV2neotRNAser(CGA)真核表达质粒。Plus试剂可明显提高脂质体转染FRL-19细胞的效率。
- 卜淑蕊赵蔚明王红
- 关键词：基因细胞转染
- 人乳头瘤病毒6b型重组减毒沙门菌的构建及表达被引量：2
- 2002年
- 目的：构建ＨＰＶ６ｂ Ｌ１Ｅ７嵌合基因重组减毒沙门菌，为进一步粘膜免疫奠定基础。方法：用ＰＣＲ方法扩增获得ＨＰＶ６ｂ 的 Ｌ１Ｅ７ 嵌合基因片段，ＴＡ 克隆后，再将Ｌ１－Ｅ７ 基因克隆入ｐＴＥＴｎｉｒ１５ 沙门菌表达质粒。用电转化法将重组表达质粒导入鼠伤寒减毒沙门菌Ｓ．ＢＲＤ５０９（△ａｒｏＡ，△ａｒｏＣ）中，厌氧诱导其表达，蛋白样品做ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 凝胶电泳 和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果：用ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ双酶切重组表达质粒ｐＴＥＴｎｉｒ１５６ｂＬ１Ｅ７可释放２３８９ｂｐ和１５５４ｂｐ两片段，结果与预计相符。ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示，重组沙门菌在约５６ＫＤ处有明显特异蛋白条带，而对照菌则无。结论：该重组沙门菌能特异地表达ＨＰＶ６ｂ Ｌ１－Ｅ７ 融合蛋白，人乳头瘤病毒ＨＰＶ６ｂ Ｌ１－Ｅ７重组减毒沙门菌构建成功。
- 孙新六赵蔚明于修平卞继峰周亚滨贾继辉栾怡齐眉
- 关键词：乳头状瘤病毒减毒沙门菌电转化法
- 重组减毒沙门菌粘膜免疫的研究进展被引量：2
- 2002年
- 文章介绍以减毒沙门菌为载体进行粘膜免疫的机制 ,讨论沙门菌的不同减毒类型 ,所用的启动子 ,可呈递的抗原 。
- 孙新六
- 关键词：粘膜免疫
- 密码修饰可增强沙眼衣原体MOMP DNA疫苗的免疫反应
- 目的沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)主要外膜蛋白(major outer membrane protein, MOMP)是沙眼衣原体疫苗研究的首要靶抗原。本研究在分析沙眼衣原体全基因组编码序...
- 郑燕赵蔚明王红栾怡周亚滨齐眉贾继挥程轶喆于修平
- 关键词：沙眼衣原体MOMP密码子DNA免疫
- 文献传递
- 优化密码促进HPV 6b E7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应被引量：6
- 2002年
- 目的 探讨优化密码对人乳头瘤病毒 6b型 (HPV 6b)基因表达及免疫原性的影响 ,为治疗性DNA疫苗的研究奠定基础。方法 设计合成含优化密码及pRB结合位点突变的HPV 6bE7(hu mE7)全长基因。测序验证无误后 ,定向克隆于pcDNA3的KpnⅠ和EcoRⅠ位点 ,成功构建真核表达质粒pcDNA3 hu mE7。体外转染COS 1细胞 ,免疫荧光检测其E7蛋白表达。C57BL 6小鼠胫前肌内接种裸DNA ,观察其诱导的细胞免疫反应。结果 pcDNA3 hu mE7在COS 1细胞获得明显表达 ,表达产物主要位于细胞核中。DNA免疫结果显示 ,与含有野生型E7基因的表达质粒pcDNA3 wtE7比较 ,pcDNA3 hu mE7免疫小鼠脾细胞培养上清中IFN γ产生明显升高 ,CD8+ 和CD4 + 淋巴细胞活性增强。结论 优化密码能促进HPV 6bE7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应。
- 赵蔚明于修平周亚滨卞继峰贾继辉栾怡齐眉孙新六王红
- 关键词：细胞免疫反应E7基因密码子DNA疫苗人乳头瘤病毒感染
- 人乳头瘤病毒HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫的效果测定
- 2003年
- 为观察人乳头瘤病毒 6b型 (HPV6b )的重组减毒沙门菌载体疫苗粘膜免疫小鼠的免疫效果及探讨研制治疗尖锐湿疣的治疗性粘膜疫苗的机制 ,我们用构建的HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫BALB/c小鼠 ,检测了阴道冲洗液中特异的SIgA、血清中IgG、T淋巴细胞增殖以及载体疫苗在机体内的稳定性。结果表明 ,粘膜免疫后 ,实验组与对照组相比较 ,阴道冲洗液中抗HPV6bL1的SIgA差异显著 ,实验组血清中抗HPV6bL1IgG水平低 ,T淋巴细胞增殖明显 ,疫苗在小鼠体内持续存在4 0d以上。研究结果提示我们所构建的重组减毒沙门菌粘膜免疫小鼠后 ,阴道粘膜局部能分泌特异的抗人乳头瘤病毒HPV6bSIgA ,也能激发细胞免疫 ,且此疫苗在小鼠体内能稳定存在。
- 孙新六赵蔚明
- 关键词：粘膜免疫
