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照射后NK-92细胞对人卵巢癌细胞杀伤活性的研究被引量：6: 2004年; 目的研究放射线照射后NK92细胞对人卵巢癌细胞杀伤活性及其成瘤性的影响。方法应用医用电子直线加速器对NK92细胞进行照射处理(800cGy),以体外培养的人卵巢癌细胞株HO8910为靶细胞,以细胞株K562作为对照,应用4h51Cr释放法检测不同效靶比情况下体外培养NK92细胞的杀伤活性。建立人卵巢癌SCID鼠肿瘤模型,观察输注经照射后的NK92细胞对荷瘤鼠的治疗效果。结果(1)体外实验NK92细胞未照射组,效靶比较低时(11、51)对HO8910细胞的杀伤率为39%～45%,随效靶比升高,杀伤率上升,101时杀伤率升为59%,201时杀伤率仅上升了6%;对于K562细胞,杀伤率在58%～71%之间。照射后2d,800cGy组NK92细胞对HO8910细胞不同效靶比的杀伤率比0cGy组略有降低,总体杀伤率在33%～58%之间;对于K562细胞,杀伤率在39%～49%之间。照射后NK92细胞数量进行性下降,第5天细胞死亡;(2)动物实验分别在接种后30、40、50d观察治疗组与对照组肿瘤体积,结果显示,分别减小了78%、56%、20%(P<0.01)。结论NK92细胞对人卵巢癌细胞具有较高的杀伤活性,经放射线照射后仍保留一定的杀伤活性,作为一种生物治疗手段治疗卵巢癌行之有效。; 凌斌陈纲祝怀平赵卫东王群华张红雁吴爱东魏海明田志刚; 关键词：SCID鼠肿瘤移植

人腹水型卵巢癌SCID鼠腹腔移植瘤的建立被引量：1: 2006年; 目的为研究人腹水型卵巢癌的实验研究提供合适的动物模型。方法将2例伴有大量腹水的卵巢癌患者手术切除标本移植于SCID鼠腹腔,原代移植瘤形成后进行鼠间传代,观察移植瘤的生长、转移及腹水形成情况,腹水细胞学涂片、计数,检测荷瘤鼠血和腹水中卵巢癌相关抗原CA125的浓度,肿瘤组织及器官作病理学检查。结果成功建立3只原代人卵巢癌SCID鼠腹水型移植瘤模型,原代移植成功率为37.5%,自第4代后,移植瘤的传代成功率为100%,随着传代次数的增加,移植瘤的成瘤潜伏期及荷瘤鼠的生存期均明显缩短(P<0.05),荷瘤鼠血和腹水中CA125的浓度升高,移植瘤仍保持原癌的病理形态特点。结论成功建立了人卵巢癌SCID鼠腹水型移植瘤模型,为研究人腹水型卵巢癌提供较理想的动物模型。; 姚凤球凌斌赵卫东王群华周颖陈柯胡文; 关键词：卵巢肿瘤腹水肿瘤移植

人SCF基因转染NK细胞系的生物学特性研究被引量：2: 2003年; 目的 :研究人SCF基因转染NK细胞系的生物学特性。方法 :利用LipofecTAMINE将SCF真核表达载体 pcD NA3 hSCF转染NK 92细胞系 ,RT PCR鉴定表达SCF的细胞克隆并以SCF依赖细胞株TF 1测活 ,MTT法检测增殖和杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面分子CD3,CD16和CD5 6。结果 :建立表达hSCF基因的NK 92 hSCF细胞株 ,在IL 15培养条件下 ,其增殖能力显著高于NK 92 ,并且低剂量的IL 15可以维持其较高的杀伤活性流式细胞术检测细胞表面分子CD3、CD16和CD5 6。结论 :可以通过SCF基因修饰NK 92 ,改变其生物学特性 ,提高其增殖能力。; 张建张建华许晓群冯进波孙汭田志刚; 关键词：转染 NK细胞系生物学特性

放射线照射后NK-92细胞对人宫颈癌细胞体外杀伤活性的研究被引量：2: 2005年; 目的研究放射线照射后NK-92细胞对人宫颈癌细胞的体外杀伤活性.方法应用医用电子直线加速器对NK-92细胞进行照射处理(0、400cGy)后,以体外培养人宫颈癌细胞系Hela为靶细胞,以NK-92的敏感细胞株K562作为对照,应用4h51Cr释放法检测不同效靶比情况下NK-92细胞的杀伤活性.结果 NK-92细胞0 cGy照射组,效靶比较低时(1∶1 、5∶1) 对Hela细胞杀伤率为15%～33% ,随效靶比升高,杀伤率随之上升,10∶1 时杀伤率显著上升为47%, 20∶1时杀伤率仅上升了3%;对于K562细胞,杀伤率为33%～69%.400cGy 组照射后2d , NK-92细胞对Hela细胞不同效靶比的杀伤率与0cGy 组相比稍有降低,其总体杀伤率为14%～47%,对K562 细胞杀伤范围在30%～60%之间.结论放射线照射后的NK-92 细胞对人宫颈癌Hela细胞系具有一定的杀伤活性.; 许恬怡凌斌陈纲周颖王群华姚凤球陈峥峥赵卫东田志刚; 关键词：杀伤细胞

γ干扰素对人NK细胞识别功能的负调节作用被引量：9: 2004年; 目的　探讨γ干扰素 (IFN γ)对人NK细胞识别功能的负调节作用。方法　用MTT法测定人NK细胞系 (NK92 ,NKL)的细胞毒活性及细胞增殖能力 ;用RT PCR检测NK细胞受体 (NKG2D、NKG2A/B、KIR2DL1、KIR2DS1)及NKG2D的识别配体主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关分子A(MICA)的表达。结果　NK细胞系 (NK92、NKL)对MICA表达阳性的肿瘤细胞杀伤活性明显高于对MICA表达阴性者 ;IFN γ 10 0 0U/ml以上可明显抑制NK细胞对MICA表达阳性肿瘤细胞的细胞毒活性 ,并轻度抑制NK细胞的增殖 ,而对MICA表达阴性肿瘤细胞的杀伤活性无明显抑制作用 ;IFN γ可抑制NK细胞系活化受体NKG2D的表达 ,增强抑制性受体NKG2A/B和KIR2DL1的表达。结论　IFN γ可能通过下调NK细胞活化受体的表达 ,上调抑制性受体的表达 ,使NK识别的信号平衡向抑制性方向倾斜 ,从而对NK细胞功能发挥负调节作用。; 张彩田志刚张建冯进波张建华许晓群; 关键词：Γ干扰素 NK细胞负调节作用 IFN-Γ 肿瘤细胞

照射后NK-92细胞对人鼻咽癌细胞体外杀伤活性的研究被引量：4: 2006年; 目的研究NK-92细胞对人鼻咽癌细胞的体外杀伤活性，以及放射线照射后对其杀伤活性的影响。方法应用4h^51Cr释放法检测不同效靶比情况下体外培养的NK-92细胞对人鼻咽癌细胞CNE的杀伤活性，以K562细胞株作为对照。应用医用电子直线加速器对NK-92细胞进行照射处理（0、400cGy）后，检测其杀伤活性的变化。结果NK-92细胞0cGy照射组，效靶比较低时（1：1、5：1）对CNE细胞杀伤率为11％～24％，随效靶比升高，杀伤率随之上升，10：1时杀伤率为36％，20：1时杀伤率为42％；对于K562细胞，杀伤率为35％～70％。400cGy组照射后2d，NK-92细胞对CNE细胞不同效靶比的杀伤率与0cGy组相比稍有降低，其杀伤率为8％～38％，对K562细胞杀伤范围在31％～62％。结论在合适的效靶比情况下，NK-92细胞对人鼻咽癌细胞CNE具有杀伤作用。经放射线照射后对CNE细胞仍具有一定的杀伤活性。; 吕秋萍凌斌许恬怡姚凤球周颖魏海明田志刚; 关键词：鼻咽肿瘤

人SCF和IL-15基因共转染NK细胞系生物学特性研究被引量：1: 2005年; 目的:研究人SCF和人IL-15基因共转染NK细胞系的生物学特性。方法:利用LipofectAMINETM将IL-15真核表达载体pcDNA3-hIL15和SCF真核表达载体pcDNA3hSCF共转染NK92细胞,RTPCR鉴定表达SCF和IL-15的细胞克隆并以SCF依赖细胞株TF1和IL-15依赖细胞株CTLL2测定上清活性,MTT法检测增殖和杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面分子CD3、CD16、CD56、CD25、CD48、CD54、CD69和CD95。结果:建立共表达hSCF和hIL15基因的NK92S15细胞株,在IL2培养条件下,其增殖能力表现出更强的聚集趋势,且生长要求有一定的细胞浓度,杀伤活性有不同程度下降。细胞表面分子CD16和CD56没有显著变化,而NK细胞活化相关分子CD25、CD48、CD54和CD95明显降低。结论:可以通过SCF和IL15基因共修饰NK92,改变其生物学特性,观察NK细胞活化、杀伤相关分子的特征,使NK细胞系有更深入的研究价值。; 宗金宝张建张建华孙汭田志刚; 关键词：白细胞介素15 转染 NK细胞系生物学特性

膜型分泌型MICA对NK细胞受体NKG2D的相反调节效应及其对NK细胞受体谱的影响被引量：47: 2004年; 目的　观察膜型和分泌型MICA对NK细胞受体表达的影响 ,以探讨NK细胞抗肿瘤活化机制及肿瘤细胞表达MICA分子的意义。方法　用MTT法测定人NK细胞系 (NK92 )的细胞毒活性 ;用RT PCR或FACS检测NK细胞受体 (NKG2D ,NKG2A B ,KIR2DL1,KIR2DS1)及NKG2D的识别配体MICA的表达。结果　肿瘤细胞表面的MICA分子可上调NKG2D的表达 ,下调抑制性受体NKG2A B和KIR2DL1的表达 ;而分泌型MICA (sMICA)分子对NKG2D及抑制性受体的表达均有抑制作用。结论　膜型MICA分子可上调NKG2D的表达 ,激发NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒效应 ;分泌型MICA分子则通过降低NKG2D的表达下调机体的抗肿瘤免疫效应 ,肿瘤细胞分泌sMICA分子为肿瘤发生免疫逃逸的机制之一。; 张彩冯进波王郡甫许晓群张建田志刚; 关键词：天然杀伤细胞 MICA NK细胞受体

自然杀伤细胞系NK-92治疗卵巢癌的体外及动物实验研究被引量：11: 2005年; 目的研究放射线照射后的自然杀伤细胞系NK92对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性及对卵巢癌动物模型的治疗效果。方法医用电子直线加速器照射NK92细胞,照射剂量分别为0、1、2、4、8、16Gy,将NK92细胞按照上述不同照射剂量分为6组。台盼蓝拒染法进行细胞计数,氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖活性,51Cr释放法检测NK92细胞对靶细胞HO8910的杀伤活性。观察照射后的NK92细胞对NOD/SCID鼠卵巢癌皮下移植瘤的治疗效果,NOD/SCID鼠分肿瘤组(仅注射人卵巢癌细胞系HO8910细胞)和治疗组(同时注射HO8910和8Gy组NK92细胞)。结果(1)体外实验:4、8Gy组NK92细胞数量在照射后的第5天分别减少到10%、0%;照射后48h,与0Gy组NK92细胞相比,4、8Gy组增殖活性分别降至29%、6%。对HO8910细胞杀伤结果显示,4、8Gy组杀伤率分别在42%～62%、33%～58%之间。(2)动物实验:接种后30、40、50d,肿瘤组NOD/SCID鼠瘤结节体积分别为(0.214±0.061)cm3、(0.382±0.051)cm3、(0.428±0.021)cm3,治疗组分别为(0.047±0.019)cm3、(0.167±0.021)cm3、(0.343±0.022)cm3,治疗组与肿瘤组相比均有减小,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组NOD/SCID鼠全部存活到120d,肿瘤组于接种后74～82d全部死亡,中位生存时间为76d,与治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论放射线照射后的NK92细胞治疗卵巢癌是有效的。; 陈纲凌斌祝怀平赵卫东王群华张红雁吴爱东魏海明田志刚; 关键词：自然杀伤动物实验研究 NK-92细胞 HO-8910细胞体外杀伤活性

Expression of prolactin receptor and response to prolactin stimulation of human NK cell lines被引量：5: 2004年; We have previously shown a critical role of prolactin (PRL) during maturation and anti-tumor effects of murine natural killer (NK) cells in vitro and in vivo. We extended that study by exploring the ability of human NK cell lines (NK-92 and YT cell) to express PRL receptor (PRL-R) and to respond to PRL stimulation in vitro. Both human NK cell lines constitutively expressed PRL-R on membrane and mRNA transcripts,NK-92 cells contained higher level of PRL-R than YT cells,which correlated to the enhanced capacity of the cells to proliferate and to lyse target cells in response to PRL stimulation in the presence of trace amount of IL-2 or IL-15 in vitro. Two differences between IL-2 and IL-15 in functioning on human NK cells were for the first time observed. PRL synergized with IL-15 to improve proliferation of NK cells in a dose-dependent manner without double peak manifesting like IL-2. Although PRL enhanced the cytotoxicity of IL-2 or IL- 15 activated NK cells,it exerted the function through up-regulating gene expression of perforin without influence of FasL in IL-2-stimulated NK cells,while in IL-15-stimulated NK cells,PRL did the function through up-regulating gene expression of both perforin and FasL but not IFNγ. PRL increased expressions of IL-2Rα on membrane and of IL-2 mRNA in cells,indicating that PRL up-regulated NK cell function by improving positive feedback between IL-2 and IL-2R. The similar results were also observed in network between IL-15 and IL-15R. These data indicate a potential role of PRL in human NK cell modulation.; RuiSUNAiLingLIHaiMingWEIZhiGangTIAN; 关键词：促乳素自然杀伤细胞

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国家高技术研究发展计划(2002AA216151)

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