公共文化服务平台

共 4 条记录，以下是 1-4

全选清除导出

排序方式：

问号钩端螺旋体ompA基因分析及其重组表达产物的免疫学鉴定: 2009年; 目的了解我国15群15株问号钩端螺旋体（简称问号钩体）参考标准株携带ompA基因情况，重组表达OmpA（rOmpA）并鉴定rOmpA的免疫原性和免疫保护性。方法采用酚．氯仿法提取问号钩体基因组DNA，PCR扩增全长ompA基因，T—A克隆后测序。构建问号钩体黄疸出血群赖型56601株ompA基因的原核表达系统，采用SDS—PAGE及Bio—Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量。rOmpA免疫家兔以获得抗血清，采用免疫扩散试验检测抗血清效价。采用Western blot检测rOmpA与其抗血清和问号钩体56601株全菌抗血清的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）检测rOmpA抗血清对15株问号钩体的交叉凝集情况。分别采用问号钩体黏附J774A．1细胞模型和豚鼠感染模型，了解rOmpA兔抗血清黏附阻断及rOmpA免疫保护作用。结果15株问号钩体均含有序列保守的ompA基因，双曲钩体Patoc Ⅰ株则否。rOmpA表达量约占细菌总蛋白的20％。rOmpA能诱导家兔产生抗体，其抗血清免疫扩散效价为1：4。兔抗血清及问号钩体56601株全菌抗血清均能与rOmpA产生阳性Western blot信号。rOmpA抗血清对15株问号钩体的MAT效价为1：20～1：320。1：10～1：160稀释的rOmpA抗血清均能阻断问号钩体黏附J774A．1细胞，100μg和200μgrOmpA对豚鼠的免疫保护率分别为50．0％和75．0％。结论ompA基因仅存在于不同血清群致病性问号钩体基因组中。rOmpA具有较好的抗原性，多种免疫学方法检测显示，有可能作为通用型问号钩体基因工程疫苗的候选抗原。; 丁威董海艳薛峰严杰楼永良; 关键词：问号钩端螺旋体免疫原性免疫保护性

基于问号钩端螺旋体rLipL32／1-LipL21-OmpL1／2融合抗原的ELISAs建立及应用: 2008年; 目的:建立基于问号钩端螺旋体(简称钩体)rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2融合抗原的ELISAs,并应用于检测钩体病患者血清特异性IgG和IgM。方法:采用显微镜凝集试验(MAT),检测钩体病患者血清及rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国问号钩体参考标准株的效价。分别以rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21和rOmpL1/2为包被抗原,建立检测血清特异性IgM和IgG的ELISAs,并用于检测107份MAT阳性钩体病患者血清标本。结果:MAT结果证实,66%(71/107)患者感染黄疸出血群问号钩体,rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国15株问号钩体参考标准株的凝集效价为1∶20～1∶160。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2抗原用于检测IgM的ELISA阳性率分别为89.7%、75.7%、85.1%和79.4%,用于检测IgG的ELISA阳性率分别为99.1%、99.1%、94.4%和86.0%。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-IgM-ELISA检测阳性率高于其它3种检测IgM的ELISAs(P<0.05),rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-IgG-ELISA检测阳性率高于rOmpL1/2-IgG-ELISA(P<0.05),但与rLipL21-IgG-ELISA及rLipL32/1-IgG-ELISA接近(P>0.05)。结论:rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-ELISAs可作为敏感、特异的通用型钩体病血清学早期诊断方法。; 邱晓枫徐韩飞郭宗琪王江严杰

问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位被引量：9: 2007年; 目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR／PatocI抗血清为一抗的Westernblot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL2ls的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果：改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8．5％和46．5％。两种rLipL21均能与TR／PatocI抗血清发生免疫结合反应，免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近，均为1：80～1：320。LipL21位于钩体外膜表面。结论：LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量，其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性，其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。; 罗冬娇胡野Dennin R H严杰; 关键词：钩端螺旋体钩端螺旋体

问号钩端螺旋体脂蛋白LipL32膜定位及其免疫应答: 2008年; 目的确定问号钩端螺旋体（简称钩体）属特异性脂蛋白抗原LipL32膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型。方法IPTG诱导目的重组蛋白rLipL32-1和rLipL32-2表达，Ni-NTA亲和层析法提纯rLipL32。采用显微镜凝集试验（MAT）检测四川地区钩体患者血清标本及rLipL32兔抗血清与我国问号钩体参考标准株的交叉凝集情况。采用胶体金免疫电镜技术对LipL32进行膜定位。建立基于rLipL32的ELISA，检测钩体患者血清中特异性抗体类型及其水平。结果黄疸出血群是四川地区最主要的优势钩体血清群。rLipL32兔抗血清均能与我国问号钩体参考标准株发生MAT效价为1：80～1：320的交叉凝集反应。LipL32是位于钩体外膜表面的蛋白质分子。156例MAT阳性钩体患者血清标本中，rLipL32-1和rLipL32-2特异性IgM阳性率分别为91．0％～92．9％和90．4％～92．3％，特异性IgG阳性率分别为99．4％和97．4％～98．1％。结论LipL32是问号钩体属特异性表面蛋白抗原。自然感染钩体时，LipL32-1和LipL32-2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体。rLipL32-1和rLipL32-2可作为研制检测试剂盒的候选抗原。; 罗冬娇郭宗琪胡野孙百莉潘建平严杰; 关键词：问号钩端螺旋体抗原定位免疫应答

全选清除导出

共1页<1>

浙江省科技厅国际合作项目(2006C24003)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

浙江省科技厅国际合作项目(2006C24003)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈