海南省自然科学基金(309036)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 重组金属蛋白酶蛋白的纯化及鉴定
- 2013年
- 目的构建创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)金属蛋白酶(vvp)基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用pET-32a质粒构建vvp基因原核表达载体,在E.coliBL21(DE3)宿主菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的重组金属蛋白酶蛋白rvvp表达,采用His-Ni亲和层析法提纯rVvp,SDS-PAGE检测表达和提纯效果。采用兔抗Vv全菌抗体的Western Blot鉴定其特异性和免疫原性。结果在1mmol/L IPTG诱导下,rvvp产量较高。提纯的rvvp经SDS-PAGE后仅显示分子量为86KD的单一蛋白条带。重组蛋白rvvp能与兔抗Vv全菌抗体发生特异性结合。结论本研究成功地构建了创伤弧菌vvp基因高效原核表达系统,所表达的rvvp具有良好的免疫反应性,可作为Vv免疫检测试剂盒及疫苗的抗原。
- 郑晶谢富生
- 关键词：金属蛋白酶克隆原核表达
- 正交试验设计优化重组蛋白溶细胞毒素的表达
- 2012年
- 目的:对创伤弧菌溶细胞毒素融合蛋白表达条件进行优化,从而获得高效稳定的溶细胞毒素(Vibrio vulnificus Hemolysin,VVH)原核表达系统。方法:质粒pGEX-4T-1-vvh转化E.coli BL21/DE3后,针对诱导过程中对工程菌表达蛋白产生影响的4个因素:诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度以及诱导时摇菌的转数,运用统计学软件进行正交实验设计,对结果进行直观分析及方差分析。并对实验得出的最佳搭配诱导条件进行验证。结果:直观分析表明诱导时间的R值最大,其次为摇菌转速和诱导剂IPTG浓度,诱导温度的R值最小;方差分析表明诱导时间的P<0.05,而转速、温度及IPTG浓度的P均>0.05。结论:诱导时间为主要因素(其为4h,表达水平最高),其次为摇菌转速、诱导剂IPTG浓度和诱导温度。本实验的最佳搭配诱导条件为摇菌转数为250r/min、诱导时间4h、诱导温度30℃、诱导剂IPTG浓度1mmol/L。在此诱导条件下,溶细胞毒素的表达量达到了55.31%。
- 郑晶王明华
- 关键词：正交设计方差分析
- 饲喂高浓度创伤弧菌对小鼠消化道的损伤研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨高浓度创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)经食道感染小鼠的致病特点。方法 22只昆明小鼠,实验组16只,均强制性喂食Vv菌液(4.2×1012cfu/ml)0.6ml/只;对照组6只,喂食灭菌液体培养基(Marine broth 2216)0.6ml/只。观察小鼠一般情况,分别于实验后12h及48h采血并处死8只实验组小鼠和3只对照组小鼠,进行血液的Vv分离培养并取其消化道及重要脏器组织进行病理学观察。结果 48h组8只小鼠,有4只血培养结果为阳性;Vv经食道感染小鼠后导致其出现腹泻等消化道症状,病理学结果显示实验组小鼠食道及胃黏膜上皮部分缺损,小肠绒毛明显水肿,结肠肠壁平滑肌溶解断裂,消化道黏膜、黏膜下、肌层均可见不同程度的中性粒细胞浸润;小鼠主要脏器也出现不同程度的损伤,以肺和肾脏的广泛出血性损伤为主。结论 (1)高浓度Vv经食道进入小鼠胃组织后能部分存活,并进入肠道繁殖,从而引起小鼠腹泻症状,损伤小鼠消化道组织,并可入血引发败血症,导致小鼠肺、肾等多脏器的和损伤,造成小鼠死亡。(2)Vv可经消化道感染,所致炎症性病变特点为蜂窝织性炎。
- 郑晶翁阳王明华
- 关键词：创伤弧菌胃肠道蜂窝织炎
