河南省科技攻关计划(JB02)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 相关作者：王留兴王瑞樊青霞张伟杰李林蔚更多>>
- 相关机构：郑州大学第一附属医院中国医学科学院北京协和医学院郑州大学第五附属医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳腺癌细胞雌激素受体基因的去甲基化及其表达被引量：6
- 2006年
- 目的探讨人乳腺癌雌激素受体(ER)基因启动子的去甲基化和ER蛋白表达功能恢复的关系。方法用甲基化特异性PCR(MSP)和亚硫酸氢盐基因组测序方法检测乳腺癌细胞ER基因启动子的甲基化状态;用RT-PCR方法从mRNA水平检测ER和孕激素受体(PR)基因的表达;用Western blot方法从蛋白水平探测ER基因的表达;MTT方法检测重新表达ER蛋白的功能。结果在ER阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,ER基因启动子甲基化的水平较高,而ER mRNA和ER蛋白均不表达。MDA-MB-231细胞用去甲基化剂5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(5-AZA-2’-deoxyC)处理,可以恢复该细胞系ER mRNA和ER蛋白的表达,同时伴有ER基因启动子甲基化水平的降低以及PR基因的表达。MDA-MB-231细胞经去甲基化逆转ER表达后,应用三苯氧胺治疗,乳腺癌细胞增殖受到明显抑制(P<0．05)。结论人乳腺癌ER基因的失活与其基因启动子高甲基化关系密切。去甲基化剂5-AZA-2’-deoxyC能较好地降低MDA-MB-231细胞DNA甲基化,并有效激活功能性ER基因的再表达,为ER基因阴性的乳腺癌患者接受内分泌治疗提供了新的途径和理论基础。
- 王瑞李林蔚王瑞林樊青霞赵培荣王留兴陆士新
- 关键词：雌激素受体基因基因表达甲基化乳腺肿瘤
- 三氧化二砷对乳癌细胞系MDA-MB-468雌激素受体表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人雌激素受体α(ERα)阴性的乳癌细胞株MDA-MB-468进行药物诱导后ERα启动子CPG岛的甲基化状态及蛋白的变化。方法:常规培养MDA-MB-468细胞,采用MTT法检测0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0mmol/LAs2O3分别处理24、48和72h后细胞的生长抑制率,甲基化特异性PCR检测1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3处理72h后MDA-MB-468细胞ERα启动子CpG岛的甲基化状态,Westernblot检测1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3处理72h后MDA-MB-468细胞ERα蛋白的表达情况。结果:As2O3可抑制MDA-MB-468细胞增殖,其作用呈时间和剂量依赖性(F浓度=375.603,F时间=474.827,P<0.001)。经1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3处理后的MDA-MB-468细胞启动子CpG岛甲基化水平降低,ERα蛋白重新表达。结论:As2O3明显抑制MDA-MB-468增殖,适当浓度As2O3能诱导ERα去甲基化,使ERα阴性的MDA-MB-468细胞恢复表达ERα。
- 孙晓娟岳冬丽倪渐凤张伟杰王留兴
- 关键词：乳癌三氧化二砷甲基化雌激素受体Α
- 三氧化二砷诱导人乳腺癌MDA—MB-435s细胞雌激素受体α重新表达及联合内分泌治疗裸鼠移植瘤的效果被引量：1
- 2012年
- 目的研究三氧化二砷（As2O3）对雌激素受体α（ERα）阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-435s的去甲基化作用及可能机制，观察As2O3联合他莫昔芬（TAM）对MDA—MB-435s细胞裸鼠移植瘤的疗效。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法，检测不同浓度As2O3单用或与TAM联用对MDA—MB-435s细胞的增殖抑制作用。以不同浓度As2O3处理MDA—MB-435s细胞，同时建立MDA—MB-435s细胞裸鼠移植瘤模型，以不同剂量的As2O3单用或与TAM联用治疗裸鼠移植瘤。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP），检测不同处理组MDA—MB-435s细胞和裸鼠移植瘤组织中ERa基因的甲基化状态。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），检测DNA甲基转移酶1（DNMT1）和ERαmRNA的表达变化。采用Westernblot法，检测DNMTl和ERa蛋白的表达变化。治疗过程中，每周测量裸鼠移植瘤的大小，绘制肿瘤生长曲线。结果不同浓度As203单用或与TAM联合处理组MDA—MB-435s细胞的增殖均受到明显抑制，其中4μmol／LAs2O3＋TAM组处理72h时的抑制率最高，达62．6％。1、2和4μmol／LAs2O3对MDA—MB-435s细胞有去甲基化作用，并可使DNMTlmRNA和蛋白的表达受到抑制，ERamRNA和蛋白恢复表达。不同剂量的As2O3单用或与TAM联合处理后，裸鼠移植瘤组织中ERa基因出现不同程度的去甲基化条带，DNMTlmRNA和蛋白的表达受到抑制，而ERamRNA和蛋白则逐渐恢复表达。不同剂量的As2O3单用或与TAM联用均能明显抑制裸鼠移植瘤的生长，以4mg／kgAs2O3＋5mg／kgTAM组的抑制作用最强，肿瘤重量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为79．5％和76．4％。结论As2O3可以通过抑制DNMTl的活性使ERa阴性人乳腺癌MDA—MB-435s细胞的ERa基因去甲基化，并恢复其表达；恢复的ERμ可以使MDA—MB-435s细胞对内分泌治疗敏感。As2O3与TAM联用可能成为治疗ERa阴性乳腺癌患者的新途径。
- 张伟杰徐登飞樊青霞吴欣爱王峰王瑞王留兴
- 关键词：三氧化二砷雌激素受体ΑDNA甲基转移酶1裸鼠
