四川省科技厅科技支撑计划项目(2008SZ0025)
- 作品数：3 被引量：12H指数：3
- 相关作者：李明远王保宁杨靖李婉宜石新丽更多>>
- 相关机构：四川大学湖北医药学院河北中医学院更多>>
- 发文基金：四川省科技厅科技支撑计划项目成都市科技攻关计划项目湖北省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌BIB原核表达工程菌的构建及微生物学特性分析被引量：4
- 2013年
- 目的构建融合了幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure I)、尿素酶B亚单位(Ure B)的表位基因及霍乱毒素B亚单位(CTB)的原核表达质粒pET28a(+)/ct B/ure I-B(简称BIB)及其原核表达工程菌,并研究其生物学特性。方法参考基因库中ure I、ure B、ct B的基因序列,合成不含信号肽的ct B基因及ure I、ure B优势表位基因,串联融合,形成多靶点重组ct B/ure I-B基因(简称BIB基因),并构建pET28a(+)/BIB原核表达质粒,经限制性内切酶Nco I、Xho I酶切以及DNA测序鉴定正确后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建含BIB基因的原核表达工程菌。经乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白(rBIB),Western blot及肌注BALB/c小鼠实验检测rBIB的免疫反应性和免疫原型。结果构建的原核表达质粒pET28a(+)/BIB,经双酶切和测序分析显示,构建的BIB基因与设计序列100%一致。乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳显示在33kD左右出现一条明显蛋白条带,Western blot检测在33kD左右出现特异反应条带,肌注免疫BALB/c小鼠产生了较高的抗体水平。结论成功构建了pET28a(+)/BIB原核表达质粒及BIB原核表达工程菌,该工程菌可表达重组蛋白rBIB,且该重组蛋白具有良好的免疫反应性及免疫原性。
- 潘兴肖继红杨靖王保宁李健春周法庭祝捷周永君李婉宜李明远
- 关键词：幽门螺杆菌URECTB
- ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析被引量：3
- 2010年
- 目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确定质粒的转染率；用人抗幽门螺旋杆菌抗体和马抗CtB抗体，采用免疫荧光和免疫酶组织化学等方法研究该两种真核表达质粒在细胞中目的蛋白表达情况。结果：成功构建了ureI和ctB—ureI的真核表达质粒pIRES—RD2-ureI和pIRES-RD2-ctB—ureI，用此质粒转染HEK293T细胞48～72h后，荧光显微镜显示该两种质粒的转染率约为80％；用免疫荧光和免疫酶组织化学方法表明了该两种基因均能在HEK293T细胞表达并有免疫反应性，表达的ureI主要分布在胞质内或细胞膜附近，ctB—ureI在CtB信号肽引导下分布于HEK293T细胞质、细胞膜附近以及细胞外。结论：成功构建了真核载体pIRES2-DsRed2-ureI和pIRES2-DsRed2-ctB—ureI，目的蛋白表达于HEK293T细胞胞质内并有一定免疫反应性。
- 王保宁杨远邝玉曹康李明远李婉宜
- 关键词：真核表达
