国家自然科学基金(39371057)
- 作品数：2 被引量：20H指数：2
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- 金属硫蛋白及其结构域突变体的紫外和圆二色光谱学研究被引量：11
- 2000年
- 采用 p GEX- 4T- 1融合表达载体高效表达所得的金属硫蛋白及其结构域突变体 ,包括 α结构域 ,β结构域 ,α- KKS- α和 β- KKS- β( KKS为金属硫蛋白结构域之间的天然连接区氨基酸 ) ,经纯化和纯度鉴定后 ,利用紫外和圆二色光谱进行结构研究 .在脱金属的上述蛋白中 ,固定 p H为中性 ,改变加入 Cd2 + 的比例 ,或固定 Cd2 + 浓度 ,逐渐调节 p H至中性 ,观察紫外和圆二色光谱中镉硫金属簇吸收峰的形成 .研究结果表明 :镉硫金属簇的形成依赖于加入金属的比例和 p H值 ,所有蛋白均于p H3.1 5以上开始形成明显的吸收峰 .紫外图谱中的吸收峰位于 2 54nm附近 ,但在圆二色图谱中不同蛋白形成的峰的位置不同 ,MT,α结构域和 α- KKS- α在 2 2 5nm和 2 58nm处有吸收 ,β结构域在 2 60 nm处有吸收 ,而 β- KKS- β在 2 4 5nm处有吸收 ;向 α结构域 ,β结构域 ,MT,α- KKS- α和 β-KKS- β中分别加入 4eq,3eq,7eq,8eq和 6eq( eq:equivalent,当量 )的 Cd2 +时 ,吸收峰可达到最大值 .同时发现 α结构域的吸收峰强于 β结构域 ,而且双结构域突变体的镉硫金属簇则明显强于相应的单结构域突变体 ,这表明吸收峰的强弱与金属结合力的大小相关 ,而且结构域之间存在相互作用 ,从而影响与金属的结合 .
- 周妍娇李令媛茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白结构域
- 金属硫蛋白α和 β结构域的结构功能比较研究被引量：10
- 1999年
- 金属硫蛋白具有α和β两个独立的结构域,它们结构不同,并能独立的行使功能。为了进一步研究这两个结构域之间的区别,分别采用镉和铜重组金属硫蛋白并继以枯草杆菌蛋白酶水解的方法制备α和β结构域,以及利用pGEX-4T-1这种融合表达载体表达α和β结构域。所得产物经凝胶过滤层析分离纯化后,进行了氨基酸组成,巯基和金属含量以及分子量测定,以上性质均与天然的金属硫蛋白α和β结构域相同。然后利用紫外吸收光谱和圆二色吸收光谱来研究它们的巯基金属簇结构,从UV和CD图谱可以看出,通过蛋白水解和基因表达制备的α和β结构域都具有独立的镉硫金属簇结构,但β结构域的镉硫金属簇不如α结构域紧密,其在254nm的吸收峰不象α结构域那么明显。利用DTNB的竞争反应测定了α和β结构域对镉和锌的结合力,实验结果表明,α结构域倾向于结合Cd2+,β结构域倾向于结合Zn2+。以上研究对于进一步了解α和β结构域的生理功能和分子进化提供了有利的证据。
- 周妍娇熊燚李令媛茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白Β结构域
