河南省医学科技创新人才工程项目(2000-04)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：段广才张荣光郗园林代丽萍更多>>
- 相关机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省医学科技创新人才工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌脂蛋白基因的重组表达和免疫活性鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的制备幽门螺杆菌(Hp)Lpp20重组蛋白(rLpp20),鉴定其免疫活性,为Hp疫苗和免疫诊断研究提供候选抗原。方法采用基因克隆技术将Hplpp20基因克隆到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化E.coliTB1。采用IPTG诱导lpp20基因与麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)基因融合表达,用多糖树脂亲和层析方法纯化表达的融合蛋白(MBP-rLpp20)。将MAP-rLpp20用蛋白因子FactorXa酶切,得到不带MBP的rLpp20。分别用MAP-rLpp20、rLpp20和Hp全菌抗原免疫小鼠,用Western blot检测MBP-rLpp20和rLpp20的抗原活性。结果表达的MBP-rLpp20的相对分子质量为60×103,表达量占菌体总蛋白的34.1%,占可溶性蛋白的14.2%。经酶切和纯化得到的rLpp20的相对分子质量为15×103。纯化制备的MBP-Lpp20和rLpp20的纯度分别为90.4%和91.2%,且与相应免疫小鼠血清及Hp全菌抗原免疫小鼠血清均能发生阳性反应。结论该研究成功制备了纯度较高的MAP-Lpp20和rLpp20蛋白;这两种重组蛋白均具有免疫活性,对Hp疫苗和免疫诊断研究具有应用价值。
- 张荣光段广才范清堂郗园林
- 关键词：幽门螺杆菌抗原疫苗蛋白
- 幽门螺杆菌Omp11重组蛋白的制备和应用
- 2006年
- 张荣光段广才郗园林范清堂
- 关键词：幽门螺杆菌重组蛋白保护性免疫反应疫苗抗原外膜蛋白抗原活性
- 幽门螺杆菌脂蛋白基因的克隆和生物信息学分析被引量：1
- 2006年
- 目的完成幽门螺杆菌（Hp）郑州分离株MEL-HP27脂蛋白（lipoprotein）基因lpp20的克隆和测序；分析该基因序列的变异性和表达蛋白的化学及免疫学特征，为Hp疫苗抗原的筛选奠定基础。方法用PCR方法从MEL-HP27的染色体DNA中扩增Ipp20基因片段，将其与载体pNEB193连接后，用于转化大肠杆菌JM109，通过酶切和测序鉴定重组质粒。应用生物信息学软件Omiga2．0、GeneDoc2．3和GenBank、Swiss-port数据库对7个Hp菌株（MEL-HP27、60190、Chongqing、CH-CTX1、J99、17874、26695）的lpp20基因序列进行同源性比较，并对该基因编码蛋白的主要化学特征和抗原结构域进行分析。结果Hplpp20基因的核苷酸序列长度为528bp，不同菌株间的同源性为96．0％～98．1％。lpp20基因编码的氨基酸序列长度为175aa，不同菌株间的同源性为98．3％～100％。MEL-HP27lpp20表达蛋白的分子量为19．122kDa，等电点为9．950，具有2个抗原性结构域。结论Hplpp20基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列均具有较高的保守性，但保守性低于100％，采用该基因表达蛋白作为疫苗和诊断抗原时，有必要考虑人群感染的优势菌株的遗传特征，以提高免疫保护的覆盖率和免疫诊断的敏感性。Hplpp20基因编码的蛋白具有典型抗原分子的结构特征，有望成为Hp疫苗候选抗原。
- 张荣光段广才范清堂
- 关键词：幽门螺杆菌脂蛋白疫苗同源性
- 幽门螺杆菌Omp11重组蛋白的表达、纯化和抗原活性鉴定
- 2006年
- 幽门螺杆菌（Hp）外膜（outer membrane）是革兰阴性细菌表面的一种连续性结构,其作为免疫攻击的潜在靶标在人体保护性免疫反应中具有重要的作用.
- 张荣光段广才郗园林代丽萍
- 关键词：幽门螺杆菌活性鉴定保护性免疫反应抗原纯化免疫攻击
