上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划(05XD14014)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 相关作者：陈义汉杨奕清林小平刘兴元杨颖更多>>
- 相关机构：同济大学附属同济医院同济大学更多>>
- 发文基金：上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hKCNE5基因克隆及其重组腺病毒表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的本研究旨在克隆人KCNE5(hKCNE5)基因,构建其重组腺病毒表达载体,以便研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用。方法首先利用PCR技术克隆hKCNE5基因,并将hKCNE5基因亚克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV;然后将该重组质粒线性化后电转化含有复制缺陷型腺病毒pAdEasy-1(Ad)的BJ5183-AD-1细胞,经过同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒hKCNE5-Ad,并经酶切鉴定、序列分析证实无误;接着将其转染超级感受态细胞XL10-Gold扩增、纯化、线性化,再感染AD-293细胞进行包装便可获得大量复制的重组腺病毒hKCNE5-Ad。结果hKCNE5基因被成功克隆后正确插入腺病毒载体Ad,其序列与GenBank公布的一致;hKCNE5-Ad可感染AD-293细胞并能在AD-293细胞内进行高效复制;收集含有hKCNE5-Ad的AD-293细胞悬液,-80℃保存备用。结论本研究成功地克隆了hKCNE5基因,构建了hKCNE5基因重组腺病毒表达载体,为进一步研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用奠定了基础。
- 杨奕清刘懿夏敏董雄剑林捷陈义汉
- 关键词：克隆转基因腺病毒
- NKX2-5基因与先天性心脏病的关系被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨NKX2-5基因与先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)的关系。方法:收集130例无血缘关系的CHD患者的临床资料和血标本,以100名无血缘关系的健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增CHD候选基因NKX2-5的全部外显子和外显子两侧的部分内含子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序。将所测的序列与GenBank数据库中公布的NKX2-5基因序列进行比对以识别出NKX2-5基因变异。比较识别出的NKX2-5基因多态在CHD患者和健康对照者间的频率分布差异。结果:在CHD患者的NKX2-5基因识别出2个单核苷酸多态,一个是NKX2-5基因编码序列第63位的腺嘌呤(A)变为鸟嘌呤(G),即c.63A>G多态;另一个是NKX2-5基因编码序列第606位的G变为胞嘧啶(C),即c.606G>C多态。在NKX2-5基因第606位点的等位基因G、C及其构成的3种基因型GG、GC、CC在CHD患者和健康对照者间的频率分布有显著性差异(等位基因频率比较:χ2=4.125,P=0.042;基因型频率比较:χ2=4.279,P=0.039)。但在NKX2-5基因第63位点的等位基因A、G及其构成的3种基因型AA、AG、GG在CHD患者和健康对照者间的频率分布无显著性差异(等位基因频率比较:χ2=0.704,P=0.402;基因型频率比较:χ2=0.626,P=0.429)。结论:NKX2-5基因c.606G>C多态可能与CHD有关,等位基因606C携带者可能对CHD的易感性增加。
- 刘兴元杨奕清杨颖林小平陈义汉
- 关键词：先天性心脏病遗传学转录调节
- 心肌细胞内向整流钾通道研究进展被引量：1
- 2006年
- 心肌细胞内向整流钾通道维持心肌细胞的静息电位,调控心肌细胞的兴奋性,其运输、组装、离子选择性和门控特性受到大分子复合体和外源因素的精细调节,内向整流钾通道结构和功能的异常与多种心脏病的发生相关。
- 张志敏陈义汉
- 关键词：内向整流钾通道电生理学分子生物学
- 房间隔缺损患儿NKX2-5基因突变的研究被引量：9
- 2009年
- 目的本研究旨在识别先天性房间隔缺损（atrialseptaldefect，ASD）患者的分子遗传缺陷，为其早期防治奠定基础。方法收集180例特发性ASD患者（其中12例有阳性ASD家族史）的临床资料和血标本，以200名健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增NKX2-5基因的全部外显子和外显子两侧的部分内含子，采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序。借助BLAST程序将所测序列与GenBank中的已知序列进行比对以识别基因突变，并用clustalw软件分析突变氨基酸的保守性。结果在1例家族史阳性的ASD患者的NKX2-5基因识别出一个新的杂合突变，即编码核苷酸序列第536位的胞嘧啶变为胸腺嘧啶，导致第179位的丝氨酸变为苯丙氨酸。该突变也存在于这个家系中的另外3位患病成员，但不存在于这一家系中的健康成员和200名正常对照者，多物种NKX2-5基因编码氨基酸序列比对显示突变氨基酸在进化上高度保守。此外，还发现了一个常见的单核苷酸多态，即编码核苷酸序列第63位的腺嘌呤变为鸟嘌呤，但这种多态在ASD患者和健康对照者间的频率分布差异无统计学意义（X2=2．8641，P=0．0906）。结论NKX2-5基因突变能够导致家族性ASD。
- 刘兴元杨奕清杨颖林小平陈义汉
- 关键词：先天性心脏病房间隔缺损遗传学NKX2-5转录调节
- 心肌特异性表达人KCNE4转基因小鼠模型的建立
- 2006年
- 目的本研究旨在建立心肌特异性表达人KCNE4(hKCNE4)基因小鼠模型,为探索hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用奠定基础。方法通过RT-PCR克隆hKCNE4基因,使用核酸内切酶和连接酶构建hKC- NE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone26,经过酶切鉴定、序列分析证实无误后用BamHI酶切获得转基因表达元件hKCNE4-α-MHC-hGH pA。将hKCNE4-α-MHC-hGH pA显微注入小鼠受精卵雄性原核,并将有活力的受精卵移植到代孕小鼠的输卵管。PCR鉴定出代孕鼠所生小鼠中转基因阳性原代(G0)小鼠,运用RT-PCR-测序技术对阳性G0小鼠与野生型小鼠交配所生的一代(G1)小鼠进行检测以识别出表达转基因的阳性小鼠。结果成功克隆了hKCNE4基因,正确构建了hKCNE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone 26。代孕鼠共生产86只仔鼠,9只转基因阳性,2只(分别称其为Line A和Line B)转基因在心脏中高表达。对Line A和Line B的阳性后代进行初步表型分析发现其生长发育良好,繁殖力正常,体表心电图无明显异常。结论成功建立心肌特异性表达hKCNE4转基因小鼠模型,为进一步研究hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用提供了一种工具。
- 杨奕清刘懿董雄剑林捷陈义汉
- 关键词：转基因心律失常小鼠
