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一株产紫杉醇内生真菌YN6的分离及鉴定被引量：20: 2011年; 从云南红豆杉(Taxus yunnanensis)树皮内表皮中分离得到75株内生真菌,采用基于紫杉醇合成关键酶10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶(10-deacetylbaccatinⅢ-10-O-acetyl transferase,DBAT)和C-13苯丙氨基侧链CoA乙酰基转移酶(C-13 phenylpropanoid side chain-CoAacyltransferase,BAPT)基因为标志分子的快速筛选方法获得一株可产紫杉醇的内生真菌YN6,并通过高效液相色谱法和质谱法对其紫杉醇进行分析.同时,通过对内生真菌YN6的形态特征分析以及18S rDNA序列分析将其初步鉴定为拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.)真菌.拟盘多毛孢YN6的紫杉醇产量约为120～140μg/L,是目前已报道的紫杉醇产量较高的野生菌株之一.拟盘多毛孢YN6的发现为微生物发酵生产紫杉醇提供了潜在的优良种质资源.; 张鹏张鹏周蓬蓬刘博周蓬蓬王春兰; 关键词：云南红豆杉内生真菌紫杉醇

产紫杉醇内生真菌O60B1的分离及鉴定被引量：2: 2012年; 从曼地亚红豆杉(Taxus x media)树皮内表皮中分离得到1株产紫杉醇的内生真菌O60B1,并通过高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)分析其发酵产物,其紫杉醇产量为2.5～3.0μg/g(紫杉醇/菌丝干重),并通过形态学特征和18 S rDNA序列分析,将其初步鉴定为毛霉属(Mucor sp.)真菌。; 张鹏张鹏刘博徐曼敖明章付春华余龙江; 关键词：紫杉醇内生真菌 RDNA

紫杉醇合成关键酶基因dbtnbt的克隆及原核表达被引量：3: 2012年; 从曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞中提取总RNA,通过RT-PCR克隆了dbtnbt基因,测序结果表明dbtnbt基因全长为1 317 bp;将dbtnbt基因与原核表达载体pET32a(+)连接,成功构建了重组质粒pET32a(+)-dbtnbt,并将其转入E.coli BL21 plysS中进行表达,dbtnbt基因的表达产物分子量约为48.4 ku,与预测大小一致。; 苗莉云张鹏张鹏付春华; 关键词：原核表达

盐湖土壤微生物总DNA提取方法的比较被引量：6: 2012年; 为了构建运城盐湖土壤微生物宏基因组文库,文章对盐湖土壤微生物总DNA的提取方法进行了比较和探索,通过改良6种植物DNA的提取方法,分别提取了盐湖土壤微生物总DNA,并采用紫外分光光度法、凝胶电泳、内切酶分析和PCR扩增法检测了各个方法所提取的DNA样品的质量。结果表明:改良后的方法 3是较适合提取运城盐湖土壤微生物总DNA的方法。采用该方法所得DNA的OD260/280值为1.883,DNA浓度和得率分别为18.1 ng·μL-1和72.4 ng·g-1;DNA片段长度约为23 kb,琼脂糖凝胶电泳条带清晰,无降解;DNA能被EcoRⅠ完全酶切,并可用于PCR扩增分析。; 苗莉云张鹏; 关键词：微生物宏基因组总DNA

NaCl和Na_2SO_4胁迫对盐地碱蓬幼苗生理特征的影响被引量：4: 2013年; 以盐地碱蓬幼苗为试材,研究了相同Na+浓度的NaCl和Na2SO42种盐胁迫对盐地碱蓬幼苗含水量、叶绿素、有机酸、脯氨酸和可溶性糖含量的影响。结果表明:NaCl胁迫能促进盐地碱蓬幼苗含水量的增加,而Na2SO4胁迫则抑制其增加;NaCl和Na2SO4胁迫均导致其叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总量的减少以及有机酸含量的下降;而脯氨酸含量则随盐浓度的增大而增加,可溶性糖含量随盐浓度的增大呈先升高后降低的变化趋势。总体表现出Na2SO4胁迫对盐地碱蓬的伤害作用弱于NaCl。; 苗莉云张鹏; 关键词：盐地碱蓬 NACL处理

产紫杉醇内生真菌Z58的分离和鉴定被引量：6: 2012年; 本研究从曼地亚红豆杉(Taxus x media)树皮内表皮分离得到一株产紫杉醇的内生真菌Z58,通过高效液相色谱法、质谱法和核磁共振波谱法对其紫杉醇提取物进行了分析.结果表明,内生真菌Z58的紫杉醇提取物具有和紫杉醇标准品相近的色谱特征峰,其保留时间为10.2 min;也与紫杉醇标准品具有相同的质谱特征峰((M+Na)+=876)和1H-NMR谱带.并通过形态学特征分析和18S rDNA序列分析,将内生真菌Z58初步鉴定为肉座菌属(Hypocrea sp.)真菌.肉座菌Z58的紫杉醇产量约为2.5～3.0μg/g(紫杉醇/菌丝干重),是一株具有潜在应用价值的产紫杉醇内生真菌.; 苗莉云张鹏刘博刘博徐曼周蓬蓬; 关键词：红豆杉紫杉醇内生真菌 RDNA

产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件优化被引量：14: 2013年; 【目的】通过优化内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件,提高10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)和紫杉醇(Taxol)的产量。【方法】采用单因素试验分析不同的培养基初始pH值、培养温度、摇床转速和培养时间对10-DAB和紫杉醇产量的影响,优化枝状枝孢霉MD2的培养条件;以YES为基本培养基,采用单因素试验和正交试验分析添加苯甲酸钠、苯丙氨酸、丝氨酸和甘氨酸4种前体物对10-DAB和紫杉醇产量的影响,优化枝状枝孢霉MD2的培养基组分。【结果】优化后发酵条件为:在初始pH为5.0的300 mL YES培养基中,添加15 mg/L苯甲酸钠、25 mg/L苯丙氨酸、5 mg/L丝氨酸、15 mg/L甘氨酸,接种1 mL枝状枝孢霉MD2的孢子悬液(107 108个孢子/mL),28.0°C、220 r/min发酵培养12 d。在此条件下,枝状枝孢霉MD2的生物量、10-DAB和紫杉醇的产量分别为15.5 g/L、471.5μg/L和569.5μg/L,与初始发酵条件相比,分别提高了1.3、3.6和3.4倍。【结论】首次获得了枝状枝孢霉MD2生产10-DAB和紫杉醇的较适摇瓶发酵条件,可为进一步放大发酵培养提供参考。; 苗莉云张鹏周蓬蓬周蓬蓬; 关键词：内生真菌紫杉醇发酵条件

过表达Bapt基因提高中国红豆杉细胞的紫杉醇产量被引量：6: 2013年; 过表达紫杉醇合成关键酶基因是提高红豆杉细胞紫杉醇产量的有效方法.本文通过构建C-l3苯丙素侧链CoA-乙酰转移酶(C-13 phenylpropanoid side chain-CoA acetyltransferase,BAPT)基因Bapt的表达载体p1303-SbaptN,采用根癌农杆菌介导法转化中国红豆杉细胞,经潮霉素抗性筛选获得转基因细胞系.转基因细胞的PCR和Southern印迹分析结果表明,T-DNA及其包含的基因与宿主细胞染色体成功整合;Western印迹结果表明,转基因细胞中报告基因GusA-mgfp5正常表达;QRT-PCR结果显示,转基因细胞的Bapt mRNA表达量是未转化细胞的1.26倍;HPLC检测结果显示,转基因细胞的紫杉醇产量为37.4μg/g,是未转化细胞的1.87倍.本研究结果表明,过表达Bapt基因提高了中国红豆杉细胞的紫杉醇产量.; 苗莉云张鹏刘博刘博周蓬蓬; 关键词：中国红豆杉过表达紫杉醇

过表达Dbtnbt基因提高中国红豆杉细胞的紫杉醇含量被引量：2: 2014年; 本文通过克隆3'-N-去苯甲酰紫杉醇N-苯甲酰转移酶(3'-N-debenzoyltaxol Nbenzoyltransferase,DBTNBT)基因Dbtnbt,构建其表达载体p1303-SDbtnbtN,转化中国红豆杉细胞,经潮霉素抗性筛选获得转基因细胞系.转基因细胞分析结果表明,T-DNA及其包含的基因与宿主细胞染色体成功整合;转基因细胞中报告基因GusA-mgfp5正常表达;转基因细胞的Dbtnbt mRNA表达量是未转化细胞的1.33倍;转基因细胞的紫杉醇产量约为27.3μg/g,是未转化细胞的1.37倍.本研究结果表明,过表达Dbtnbt基因将中国红豆杉细胞的紫杉醇产量提高约37%.; 张鹏张鹏李书涛付春华周蓬蓬宋发军; 关键词：红豆杉过表达紫杉醇

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中国博士后科学基金(20100471183)