重庆市自然科学基金(2008BB5113)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：陈炜徐小峰张俊磊韩俊峰李国利更多>>
- 相关机构：重庆三峡医药高等专科学校重庆医科大学第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Antibodies against ribosomal protein S29(RPS29)fused with glutathione's transferase specially react with native RPS29 in mouse and human cells
- 2011年
- 也作为 RPS29 知道的 ribosomal 蛋白质 S29，是核糖体的 40S 子单元的一个部件不仅，而且在胚胎的开发， oncogenesis 和另外的病理学的条件包含了。然而，对 RPS29 的稀罕商业抗体限制这蛋白质的精确生理、病理学的功能的发现。在这研究，整个 RPS29 基因被插入到 plasmid pGEX-6p-1 表示谷胱甘肽的 transferase (GST ) 在 Escherichia coli 的熔化蛋白质(E。coli ) 紧张 BL21。可溶的 recombinant 蛋白质的高收益被获得。老鼠与 recombinant RPS29 蛋白质被使免疫。从使免疫的老鼠的浆液能特殊由西方的弄污， immunofluorescence 染色和流动 cytometric 分析在 CCE 房间与净化的 recombinant RPS29 蛋白质和本国的 RPS29 蛋白质反应。进一步更 polyclonal 抗体也与人的房间紧张 ECV304 明确地反应了，它显示出典型 cytoplasmatic 荧光。我们准备了的 polyclonal 抗体将是为在胚胎的开发和人的疾病学习 RPS29 的角色的一个可得到的工具。
- Liu JiaHan JunfengLi DongyingJian RuiRao XianCaiChen WeiWang JialiXu XiaofengHu ZhenZhang Junlei
- 关键词：流式细胞仪分析核糖体蛋白抗体反应免疫荧光染色
- 病毒介导的P53低表达HepG2细胞株的建立
- 2012年
- 目的构建干扰P53的逆转录病毒载体,建立稳定低表达P53的HepG2细胞株。方法合成干扰P53基因的寡核苷酸序列插入pMSCV-hyg-U6质粒,转化受体菌DH5α,经酶切测序鉴定后瞬时转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR方法检测P53 mRNA表达水平评估干扰效果;选择干扰效果最好的重组质粒转染PT67细胞进行病毒包装,获得逆转录病毒颗粒感染HepG2细胞,通过Hygromycin筛选获得多个细胞克隆,Western blot检测P53蛋白的表达情况;选择P53表达水平最低的细胞克隆。通过5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡实验,检测P53低表达的HepG2细胞p53通路介导的细胞凋亡情况。结果经酶切和测序验证成功构建重组病毒载体;瞬时转染HepG2细胞后P53 mRNA表达下调;病毒颗粒感染HepG2细胞后P53的mRNA、蛋白表达下调;用5-FU处理后P53低表达HepG2细胞凋亡水平明显低于对照。结论成功构建了干扰P53的逆转录病毒载体,建立了P53低表达HepG2细胞株,明显阻断了P53通路依赖的细胞凋亡。
- 刘佳张俊磊李庆伟韩俊峰徐小峰王嘉丽陈炜饶贤才李国利
- 关键词：逆转录病毒P53HEPG2
