江苏省自然科学基金(BK2012080)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：潘秀珍王长军郑峰张凤玉龚秀芳更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 2型猪链球菌Rgg调控因子的序列结构分析及原核表达
- 2016年
- 目的克隆2型猪链球菌Rgg转录调控因子编码基因并进行原核表达和纯化,并对其进行生物信息学分析和结构预测。方法 PCR扩增2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组的rgg基因,构建重组表达质粒pQE30-rgg,转化大肠杆菌M15,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;确定最佳诱导条件后,大量培养诱导重组表达菌,Ni 2+亲和层析柱纯化重组蛋白,非变性PAGE电泳分析其体外聚合状态。结果整个Rgg蛋白由15个α螺旋和2个β转角组成;构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,15℃过夜诱导获得可溶性重组蛋白的比例最高;获得了较高纯度的Rgg重组蛋白,并证实其在体外可形成同源二聚体。结论成功地原核表达并纯化了Rgg重组蛋白,证明它存在二聚体结构,为进一步研究其调控机制奠定了基础。
- 郑峰刘鹏蔡炳冈朱进潘秀珍王长军
- 关键词：猪链球菌原核表达
- 2型猪链球菌β-半乳糖苷酶基因的克隆表达及酶活性测定被引量：4
- 2014年
- 目的:克隆表达2型猪链球菌β-半乳糖苷酶(BgaC)编码基因,并测定其酶活性。方法:根据05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增bgaC基因,构建重组表达质粒pET28a-bgaC,转化E.coli BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE鉴定;最后对表达产物进行亲和层析纯化,获得BgaC纯化蛋白后测定其酶活性。结果:bgaC基因在原核细胞中得到高效表达,重组表达的BgaC分子质量约为69kDa,其酶促反应最适温度为42℃,最佳反应时间为30min,最适反应pH为5.5,最佳底物浓度为10mmol/L。2型猪链球菌BgaC的体外酶活为1615U/ml,酶比活为1076U/mg。结论:2型猪链球菌强毒力株05ZYH33中含有bgaC基因,在原核系统高效表达的BgaC具有良好的酶学活性。
- 张凤玉胡丹龚秀芳郑峰潘秀珍王长军
- 关键词：2型猪链球菌Β-半乳糖苷酶酶活性STREPTOCOCCUSSUISSEROTYPE
