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棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因启动子活性检测条件的优化被引量：1: 2012年; 旨在用阳离子脂质体介导携带有pGL3-Basic报告基因的棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6启动子pGL-CYP6B6-promoter重组质粒转染Sf9细胞,对启动子活性的检测条件进行优化。将长度为999 bp的棉铃虫CYP6B6基因启动子亚克隆至荧光素酶报告载体pGL3-Basic上,提取无细胞内毒素的质粒,转染处于对数生长期的昆虫细胞Sf9,通过检测荧光素酶的表达量验证启动子的活性。对转染后的检测时间、加入转染质粒的量,转染质粒与内对照质粒pRL-TK的比例分别进行了优化,进而确定检测的最优条件。结果表明,转染后的最适检测时间为24 h,转染质粒的最适用量为3.2μg,报告质粒与内对照质粒用量的比例为10 1时转染效率最高。; 李芬刘小宁; 关键词：细胞色素P450 SF9细胞转染活性检测

2-十三烷酮诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera)细胞色素P450 CYP6B6时空表达规律的研究被引量：5: 2014年; 植物次生物质2-十三烷酮能够诱导棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因的过量表达,以6龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫为对象,研究2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6的诱导作用,并对其表达规律进行了初探。分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫组化的方法,分析棉铃虫在终浓度为10 mg·g-1的2-十三烷酮胁迫下,不同时间及不同组织部位CYP6B6基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达变化规律。qRTPCR结果显示:用添加了2-十三烷酮的人工饲料饲喂棉铃虫不同时间后,在头壳中CYP6B6 mRNA的表达量一直低于对照组,到48 h时与对照组具有显著差异(t4=15.32,P=0.000 1);在脂肪体中随着时间的推移,表达量呈升高趋势,在36 h已过量表达(t4=7.627,P=0.001 6);在24 h时体壁和中肠组织的表达量分别较对照组提高了2.06倍和7.16倍,之后表达量均呈现先降低后升高的趋势,且在48 h时达到最大。免疫组化结果显示:在棉铃虫幼虫组织中发现CYP6B6蛋白在体壁、脂肪体、中肠中均有表达,相比之下在体壁中表达量较高。该研究为深入了解棉铃虫P450 CYP6B6的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的研究奠定了基础。; 刘小宁李芬张学涛朱燕; 关键词：MRNA水平蛋白水平

昆虫基因启动子及细胞色素P450基因启动子研究进展被引量：5: 2012年; 细胞色素P450是一类重要的解毒酶系。昆虫在各种内源或外源性有毒物质的胁迫下,通过调控体内细胞色素P450的过表达,对有毒化合物进行解毒代谢,从而适应不利环境。在昆虫体内,P450基因表达的调控主要发生在转录水平上,启动子作为基因的一部分,能够与RNA聚合酶结合形成转录起始复合体,进而控制基因表达的起始时间和表达程度。基于此,就昆虫启动子的分析及功能验证的主要方法、昆虫启动子的结构特征及昆虫细胞色素P450基因启动子的一些研究进展进行概述,以期为昆虫细胞色素P450基因启动子的深入研究提供借鉴。; 李芬刘小宁; 关键词：启动子细胞色素P450 昆虫抗药性

棉铃虫细胞色素P450CYP6B6基因启动子的活性分析被引量：1: 2012年; 在昆虫细胞色素P450s超家族中,CYP6家族基因与杀虫剂抗性关系最为密切,其中CYP6B家族基因的表达在植物次生物质的代谢调节中发挥重要作用.为研究CYP6B6基因的表达调节机制,本文采用PCR的方法从棉铃虫中肠DNA序列中扩增了CYP6B6基因转录起始位点上游不同片段长度的5段序列,构建由其驱动的萤火虫荧光素酶基因报告质粒pGL3-CYP6B6-promoter,与内参载体pRL-TK同在脂质体的介导下转染昆虫Sf9细胞,体外分析该基因启动子的转录活性及与调控相关的因素.结果显示,5个报告质粒的荧光素酶相对活性分别是基本载体pGL3-Basic载体的0.95、1.95、1.21、1.17和1.01倍,其中p-791片段序列具有启动子活性,这段序列位于翻译起始位点上游400bp之间,生物信息学分析显示,该区间具有TATA box、CAAT box、CBFα、C/EBP等基本元件和AhR等异源物质响应的重要元件结合序列,暗示该序列可能具有与转录调控相关的元件,这为研究CYP6B6的调控机制奠定了基础.; 李芬马纪刘小宁; 关键词：棉铃虫细胞色素P450 活性分析

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国家自然科学基金(3096022)