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深圳市志贺菌脉冲场电泳分子分型分析被引量：1: 2008年; 目的分析深圳市2001—2006年分离志贺菌菌株之间的相关性，初步建立志贺菌的脉冲场电泳（pulsed-field gel eleetrophoresis，PFGE）分子分型监测网络。方法55株志贺菌基因组DNA经Xba I酶切，通过PFGE获得电泳图谱，利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果55株志贺菌被分为41种PFGE图谱，聚类分析显示32株细菌谱型属于同一个群，其余菌株谱型差异较大。结论深圳地区存在遗传紧密相关的志贺菌流行克隆，也存在遗传不相关克隆。PFGE分子分型崎测网络的建立，有助于细菌性痢疾的主动监测、暴发调查和传染源追踪。; 兰全学扈庆华石晓路王冰林一曼程锦泉张顺祥; 关键词：志贺菌属脉冲场细菌分型技术

改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌被引量：27: 2004年; 目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断。; 扈庆华郑薇薇石晓路李庆阁王冰庄志雄刘小立; 关键词：分子信标实时PCR 副溶血弧菌食物中毒

改良分子信标—实时PCR快速检测霍乱弧菌被引量：9: 2004年; 目的　建立改良分子信标—实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法 ,应用于霍乱监测。　方法　根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位 (ctxA)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测霍乱弧菌的实时PCR反应体系 ,应用于霍乱监测。　结果　霍乱弧菌改良分子信标检测体系检测 12种细菌 ,只有霍乱弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为10 2 4fg/ul ,菌液灵敏度为 3 2cfu/ml或 3cfu/PCR反应体系。对 10 0份海产品和 3 0份腹泻病人大便标本进行检测 ,结果都为阴性。检测时间仅需 2h。　结论　改良分子信标—实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强 ,可用于霍乱的快速诊断。; 扈庆华郑薇薇石晓路叶宝英李庆阁王冰庄志雄刘小立; 关键词：霍乱弧菌流行病学

一起肠炎沙门菌食物中毒的快速诊断与溯源被引量：2: 2006年; 本研究采用改良分子信标-实时PCR快速检测方法和核酸脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术，成功地应用于深圳市一起细菌性食物中毒的快速诊断和准确溯源。; 石晓路扈庆华王冰林一曼刘小立林和顺贺连华吴平芳; 关键词：沙门菌食物中毒脉冲场凝胶电泳细菌性食物中毒实时PCR 分子信标

改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌被引量：22: 2006年; 目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93 fgμ/l,菌液灵敏度为64 cfu/m l或2 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌,均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测,42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2 h^1 d时间。结论:改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于志贺菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段,对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。; 吴平芳石晓路郑琳琳扈庆华李庆阁张佳峰庄志雄刘小立张顺祥王冰贺连华林一曼; 关键词：志贺菌实时PCR

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌被引量：4: 2006年; 目的:建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌(LMO)的快速方法,应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法:根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标-实时PCR检测体系,应用于食品中LMO检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110 fg,菌液灵敏度为99 cfu/m l或4 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO,均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时间由原来的至少4 d缩短至1 d。对228份食品进行LMO检测,8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性,其中6份LMO细菌培养阳性。结论:改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高,特异性强,能提高LMO的检出率和准确性,可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。; 王冰扈庆华石晓路李庆阁郑琳琳林一曼贺连华张顺祥; 关键词：产单核李斯特菌实时PCR

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒溯源中的应用研究被引量：21: 2007年; 目的用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法,追踪某次沙门菌食物中毒的来源,确定中毒食品,快速控制传染源。方法对食物中毒中分离的肠炎沙门菌用XbaI酶切总DNA,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)法进行分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行电子化数据分析,绘出聚类分析图。结果脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对患者样本分离的242株肠炎沙门菌进行分子分型,型别基本一致,表明是同一批食物中毒;从三文治等蛋糕制品中分离的9株菌株与患者分离株图谱完全一致,表明此次食物中毒的源头为某蛋糕厂生产的三文治等食品。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于菌株的同源性的分析和传染源的追踪。; 石晓路刘小立黄薇王冰林一曼贺连华吴平芳扈庆华; 关键词：沙门菌食物中毒

改良分子信标-双重实时荧光PCR快速检测SARS病毒被引量：4: 2005年; 目的建立改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒的方法,用于SARS的早期诊断和动物溯源。方法利用改良分子信标技术、装甲RNA和双片段双色荧光技术,根据GenBank公布的SARS病毒聚合酶基因1b的阅读开放框架结构的保守序列,自行设计一对引物和探针,以部分临床标本的酶联吸附实验结果和传统细胞培养方法作为对照,建立分子信标检测SARS病毒的方法。对368份临床标本(咽漱液、血液、粪便、尿液)、52份细胞培养液和50份动物标本进行荧光PCR扩增。结果分子信标检测SARS病毒的方法灵敏度为10～100个拷贝ml,与流感病毒等呼吸道病毒无交叉反应。分子信标检测368份临床标本,20份阳性。其中确诊病例阳性率为21.27%(1047),确诊病例的咽漱液阳性率为43.48%,还分别从粪便和血清中检测到SARS病毒。52份细胞培养液,29份阳性,阳性率为55.77%。50份动物标本,23份阳性,阳性率为46%。结论改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒方法灵敏度高、特异性强,可用于SARS的临床早期诊断和动物溯源。; 扈庆华刘小立庄志雄石晓路何雅青刘建军王冰刘涛张永有李庆阁赵锦何建凡杨洪房师松张丹周俊安; 关键词：SARS病毒

深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立与应用被引量：6: 2007年; [目的]建立深圳市伤寒PulseNet数据库,用于伤寒的实时监测和分子流行病学调查。[方法]采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对深圳市2002～2005年106株伤寒的染色体DNA进行酶切,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。[结果]深圳市各年的伤寒菌株变异较多,呈现30多种PFGE图谱。同一起伤寒暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。[结论]深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。; 石晓路扈庆华王冰林一曼兰全学程锦泉张顺祥阚飙徐建国; 关键词：伤寒脉冲场凝胶电泳 PULSENET

单核细胞增生李斯特菌PFGE分型与血清学分型的联合分析被引量：6: 2010年; 目的:采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对单核细胞增生李斯特菌(Lm)进行基因分型,同时进行血清学分型,比较分析两种分型方法的优劣和之间的关系。方法:按照标准化的Lm-PFGE方法对17株Lm进行PFGE分型,分别用限制性内切酶ApaI和AscI酶对菌株进行酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱,利用B ioNum erics软件对图谱进行聚类分析。同时对上述菌株进行血清学分型。结果:17株Lm被内切酶ApaI分为13种带型,被内切酶AscI分为14种PFGE型。17株Lm分为5种血清型。结论:Lm-PFGE分型方法是一种高分辨力、稳定可靠的技术。PFGE的分辨力高于血清学分型,两种分型方法密切相关。聚类分析结果显示ApaI酶切分型与H抗原密切相关。; 王冰扈庆华兰全学石晓路林一曼程锦泉马汉武叶长芸阚飚; 关键词：单核细胞增生李斯特菌分子分析血清学分型分型方法电泳图谱

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广东省卫生厅资助课题(A2003709)

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