国家自然科学基金(81071389)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：温州医科大学温州医学院更多>>
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- 白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP的制备及抗原性分析被引量：1
- 2014年
- 目的克隆、表达白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP编码基因并分析其抗原性。方法运用生物信息学方法分析alALP与aegyptin氨基酸序列(GenBank登录号为ABF18122.1)的同源性、二级结构和抗原肽段。提取白纹伊蚊唾液腺总RNA,根据alALP的基因编码序列(GenBank登录号为AY826121)设计引物,RTPCR扩增目的基因,亚克隆至pGEX-6P-1质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。重组aegyptin相似蛋白(GST-alALP)经还原型谷胱甘肽(Glutathione Sepharose 4B)亲和层析法纯化后,皮下注射免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量60μg,共免疫3次,每次间隔2周,制备小鼠抗GST-alALP血清。分别以小鼠抗GST-alALP血清和白纹伊蚊叮咬后小鼠血清为一抗,Western blotting分析GST-alALP蛋白的抗原性。结果生物信息学预测结果显示,alALP与aegyptin的氨基酸序列具有65.58%的同源性,二级结构高度相似并具有一段保守的抗原多肽。RT-PCR结果显示,alALP成熟肽基因扩增产物约为762 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒pGEX-6p-1-alALP构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约56 000的可溶性重组融合蛋白。Western blotting结果显示,GST-alALP蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和白纹伊蚊叮咬后的小鼠血清识别。结论克隆的alALP成熟肽基因能在原核表达系统中高效表达,且具有抗原性。
- 李星潘曹国梅邢翠翠华倩倩张亮亮梁韶晖
- 关键词：白纹伊蚊原核表达抗原性
- 蚊唾液腺功能蛋白研究进展被引量：1
- 2013年
- 蚊能传播多种疾病,严重危害人类健康。蚊唾液腺中存在多种功能蛋白,它们有些与疾病传播相关,有些参与蚊的吸血作用,有些具有潜在的药理学活性。本文主要对蚊的gSG6、aegyptin、saglin等唾液腺功能蛋白研究进展进行介绍。gSG6是一种潜在的按蚊叮咬的免疫流行病学指示器;aegyptin具有潜在的抗凝血药理学活性;saglin是疟原虫子孢子入侵蚊唾液腺的受体,参与疾病传播过程。同时,对蚊唾液腺其他功能蛋白的研究进展也进行了简单介绍。
- 李星潘梁韶晖
- 关键词：唾液腺
