国家自然科学基金(81071374)
- 作品数：30 被引量：91H指数：5
- 相关作者：殷国荣王海龙孟晓丽殷丽天刘红丽更多>>
- 相关机构：山西医科大学太原师范学院徐州医学院更多>>
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- 磷酸甘油酸变位酶研究进展被引量：7
- 2012年
- 磷酸甘油酸变位酶(PGAM)是一种糖酵解酶,与碳水化合物转运、新陈代谢、催化活性及生长发育有关。PGAM首先在酵母中发现,随着其氨基酸序列和晶体结构的发现,在人、大肠埃希菌、日本血吸虫和刚地弓形虫等多种生物体中发现该蛋白。本文综述了来源于脊椎动物、无脊椎动物、原生动物等的PGAM蛋白的理化性质及其研究进展。
- 王芬李润花殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫
- 重组弓形虫热休克蛋白70鼻内及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答比较被引量：5
- 2011年
- 目的比较重组弓形虫热休克蛋白70(rTgHSP70)滴鼻及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答及其持续时间。方法将90只BALB/c小鼠随机分为3组:滴鼻组用20μg rTgHSP70滴鼻,皮下组用80μg rTgHSP70皮下免疫,间隔2周加强免疫1次,对照组不处理。末次免疫后第1、2、3、4、5、6周,每组分别处死小鼠5只,ELISA法检测血清IgG水平、鼻咽和肠冲洗液sIgA水平;分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数。结果滴鼻组小鼠血清IgG水平第1～6周高于皮下组和对照组,其中第3～5周差异有统计学意义(P<0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠第3～5周,皮下组小鼠第4～5周鼻咽冲洗液sIgA水平显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠小肠冲洗液sIgA水平第1～6周显著高于皮下组和对照组(P均<0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠脾淋巴细胞数量第2～4周显著高于对照组(P<0.000 1),3～4周显著高于皮下组(P<0.001);皮下组小鼠第2～4周显著高于对照组(P<0.001)。滴鼻组小鼠IEL数量第1～6周显著高于对照组(P<0.000 1),第3～4周显著高于皮下组(P<0.000 1),皮下组小鼠第1～5周显著高于对照组(P<0.05)。结论 rTgHSP70皮下和滴鼻免疫小鼠均能诱导有效的黏膜和系统免疫应答,且滴鼻免疫的效果优于皮下免疫,是rTgHSP70更为有效的免疫途径。
- 殷丽天曹蕾王海龙孟晓丽张建红殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫热休克蛋白70鼻内免疫
- 刚地弓形虫滑行相关蛋白的研究进展被引量：5
- 2016年
- 顶复门寄生虫入侵宿主细胞的能力是其生存和致病的关键。刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是顶复门的一种专性细胞内寄生虫,无论其滑行、入侵或逸出感染细胞,都必须依靠被称为肌-动球蛋白马达(actomyosin motor,AMM)的装置提供动力。AMM主要由肌球蛋白A、1条肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC1)和2条必需轻链(essential light chain,ELC)1、2以及滑行相关蛋白(gliding-associated protein,GAP)组成。目前已经发现的GAP家族包括GAP45、GAP50、GAP80、GAP70和GAP40,它们是构成驱动寄生虫运动的滑行体的重要成分。滑行体是一个存在于寄生虫质膜与内膜复合物之间的以肌-动球蛋白为基础的动力装置。本文概述了目前对GAP构建与功能的理解以及弓形虫运动的分子基础,同时对GAP作为弓形虫病疫苗候选抗原分子作了展望。
- 李润花殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫
- 刚地弓形虫滑行相关蛋白45的克隆、表达与免疫反应性检测
- 2019年
- 目的克隆、原核表达刚地弓形虫滑行相关蛋白45(TgGAP45)基因,检测重组蛋白rTgGAP45的免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。根据TgGAP45基因全长编码序列的开放阅读框设计引物,PCR扩增TgGAP45基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定。将重组质粒pET-30a(+)-TgGAP45转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,分别以抗His标签抗体、人抗弓形虫血清或小鼠抗弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)鉴定重组蛋白免疫反应性。结果刚地弓形虫GAP45基因的cDNA开放式阅读框全长为738 bp,PCR扩增结果显示,在750 bp处有一条特异性扩增条带(带His标签),与预期大小相符。菌落PCR、双酶切以及测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-TgGAP45构建成功。SDS-PAGE结果表明,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析结果显示,诱导表达的蛋白为带His标签的重组蛋白,可分别被His标签抗体、人抗弓形虫血清和小鼠抗弓形虫STAg血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgGAP45基因片段可在原核表达系统中高效可溶性表达,该重组蛋白rTgGAP45具有免疫反应性。
- 李润花关丽殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫基因克隆原核表达免疫反应性
- 重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合佐剂鼻内免疫小鼠诱导的抗体免疫应答
- 2013年
- 目的观察重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2(rTgPGAM2)联合IL-2或IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的特异性抗体免疫应答。方法将48只6周龄BALB/c小鼠随机均分为6组:免疫组分别用500IU IL-2、1 000UIFN-γ、30μg rTgPGAM2、30μg rTgPGAM2+500IU IL-2、30μg rTgPGAM2+1 000UIFN-γ滴鼻免疫,抗原和佐剂均溶于20μl PBS中,对照组滴鼻20μl PBS。共免疫3次,第1次免疫与第2次免疫间隔14d,第2次免疫与第3次免疫间隔7d。末次免疫后第14d,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测血清IgA和IgG及鼻咽冲洗液、阴道冲洗液、肠冲洗液sIgA水平。结果免疫组血清IgA和IgG水平高于对照组,以rTgPGAM2+IL-2组和rTgPGAM2+IFN-γ组升高更显著(F=18.653和8.853,P<0.05);免疫组小鼠鼻咽冲洗液、阴道冲洗液sIgA水平显著高于对照组(F=6.670和7.288,P<0.05),rTgPGAM2+IL-2和rTgPGAM 2+IFN-γ免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平显著高于对照组(F=4.557,P<0.05)。结论单独用rTgPGAM2或佐剂或两者联合免疫小鼠均能诱导黏膜特异性体液免疫应答,其中rTg-PGAM2联合IL-2佐剂能诱导产生更高水平的抗体。
- 杨燕萍王海龙孟晓丽刘转转刘宜升殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫黏膜免疫
- 重组弓形虫肌动蛋白解聚因子滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及保护作用被引量：1
- 2014年
- 目的观察重组弓形虫肌动蛋白解聚因子(Recombinant Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor,rTgADF)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用。方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为2组,分别用30μg rTgADF(溶于20μl PBS)和20μl PBS于第0、14和21d各滴鼻免疫1次。末次免疫后14d,每组处死小鼠5只,ELISA法测定血清IgA、IgG和IgG1/IgG2a及鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA以及脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平。每组另取5只小鼠,用4×104 RH株弓形虫速殖子/只灌胃攻击(致死性),观察小鼠健康状况并计算存活率。其余小鼠用1×104速殖子/只灌胃攻击(慢性),攻击后30d处死,计数肝、脑组织速殖子。结果 rTgADF诱发小鼠产生较强的系统免疫和黏膜免疫应答,免疫组小鼠血清IgG、IgA和IgG1/IgG2a水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),脾淋巴细胞培养液上清中IFN-γ和IL-2、IL-4水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),IL-10水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。致死性攻击后30d,对照组小鼠全部死亡,免疫组小鼠存活率为20%,差异有统计学意义(P<0.01);慢性感染后30d,免疫组小鼠肝和脑虫荷分别比对照组减少63.87%(P<0.01)和50.14%(P<0.05)。结论 rTgADF滴鼻免疫小鼠诱导产生较强的黏膜及系统免疫应答,并可部分抵抗弓形虫致死性和慢性攻击,可作为弓形虫候选蛋白疫苗。
- 关丽张铁娥王海龙孟晓丽杨建一殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫肌动蛋白解聚因子黏膜免疫
- 刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析被引量：3
- 2012年
- 目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)磷酸甘油酸变位酶2(TgPGAM2)基因片段,并分析其抗原性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。PCR扩增TgPGAM2基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将测序正确的重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2转化至E.coli BL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性。结果PCR扩增产物约为750 bp。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约30 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析证实其能被兔抗弓形虫血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgPGAM2基因片段可在原核表达系统中表达,且该可溶性重组蛋白具有抗原性。
- 殷丽天王芬孟晓丽王海龙刘红丽申金雁殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫基因克隆原核表达抗原性
- 重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合IL-2、IFN-γ佐剂鼻内免疫小鼠诱导的小肠黏膜免疫应答被引量：1
- 2012年
- 为探讨IL-2和IFN-γ的佐剂效应，本研究观察了重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2（rTgPGAM2）联合IL-2或IFN-γ滴鼻免疫小鼠诱导小肠黏膜IgA抗体分泌细胞（IgA—ASCs）和小肠冲洗液sIgA的免疫应答。将48只6周龄雌性BALB／c小鼠随机均分为6组，免疫组分别用500IUIL-2、1000UIFN-γ、30μgrTgPGAM2、30μgrTgPGAM2＋500IUIL-2或30μgrTgPGAM24-1000UIFN-1滴鼻免疫小鼠，抗原和佐剂溶于20μLPBS中，对照组用20μLPBS滴鼻。免疫3次，一免和二免间隔2周，二免后1周三免。三免后第14天，颈椎脱臼处死小鼠，免疫组化检测小鼠十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgA-ASCs，计算阳性率，ELISA测定小肠冲洗液sIgA水平。结果表明，免疫组十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgA—ASCs阳性率高于PBS组，其中rTgPGAM2、rTgPGAM2联合IL-2或IFN-γ佐剂组差异显著（P〈0．05或P〈0．01）。rTgPGAM2联合IL-2或IFN-γ佐剂组小肠冲洗液sIgA水平显著高于PBS组（P〈0．01）。rTgPGAM2、TgPGAM2＋IL-2和TgPGAM2＋IFN-γ滴鼻免疫小鼠均可有效诱导肠黏膜免疫应答，IL-2和IFN-γ可显著增强抗原的免疫效应，IL-2的佐剂效应优于IFN-γ。
- 祝建疆李雅清王海龙孟晓丽杨建一殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫抗体分泌细胞鼻内免疫黏膜佐剂
- 脊椎动物和寄生虫尿苷磷酸化酶的研究进展被引量：1
- 2014年
- 尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase,UPP)是嘧啶补救合成途径的一种关键性调节酶,可逆地催化尿嘧啶核苷、脱氧尿嘧啶核苷转变为尿嘧啶和核糖-1-磷酸,对维持和调控组织中尿嘧啶核苷的浓度起着至关重要的作用。不同物种的尿苷磷酸化酶虽然在功能上有很多相似之处,但是在理化性质、结构特点、活化位点、与底物结合位点等诸多方面存在差异,因此将尿苷磷酸化酶作为靶点,设计和开发抗菌、抗寄生虫感染药物有着广阔的前景。本文综述不同生物来源的尿苷磷酸化酶蛋白的理化性质及研究进展,为研究刚地弓形虫UPP基因表达蛋白作为抗弓形虫疫苗靶点的可行性提供理论依据。
- 李润花祝建疆殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫疫苗靶点
- 刚地弓形虫磷酸甘油酸酯变位酶2基因编码蛋白主要特性与抗原表位的生物信息学分析被引量：14
- 2010年
- 目的从生物信息学角度分析刚地弓形虫磷酸甘油酸酯变位酶2(TgPGAM2)基因编码蛋白的结构与抗原表位,预测该蛋白的免疫原性。方法利用蛋白分析专家系统(ExPASy)提供的ProtParam、SOSUI、TMHMM、HNN、MotifScan,NCBI上的ORF finder、SignalP、Bcepred等生物信息学在线分析程序,结合Gene Runner、DNAMAN等生物信息学软件,分析、预测TgPGAM2蛋白的理化性质、可溶性、表面可及性?可塑性,信号肽,跨膜区,翻译后修饰位点、亲(疏)水性、二级结构、抗原表位等。结果该蛋白由264个氨基酸组成,分子式为C1345H2097N363O385S11,分子质量为29.865 3 ku,等电点理论值为6.46,波长280 nm时的吸光度(A)值为1.697,半衰期为30 h,有10个表面可及性参数≥1.9的区域、3个亲水性参数得分≥1.9的区域、3个柔韧性参数得分≥2的区域、8个翻译后修饰位点、16个潜在抗原表位,为可溶性表达蛋白。结论刚地弓形虫PGAM2基因编码的Tg PGAM2为可溶性蛋白,具有免疫原性,可作为弓形虫病疫苗候选抗原。
- 王芬王海龙殷丽天孟晓丽刘红丽殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫生物信息学抗原表位
