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钙网蛋白在甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌中的作用研究被引量：4: 2013年; 目的:探讨钙网蛋白(CALR)在对甲氨蝶呤(MTX)耐药的人绒毛膜癌中的作用。方法:采用Western blot印迹和细胞免疫荧光方法检测CALR蛋白在对MTX间断诱导耐药绒毛膜癌细胞株JeG-3/MTXA1与亲本细胞JeG-3中的表达差异,观察利用RNA干扰(RNAi)技术干扰CALR表达后耐药细胞耐药指数的变化。结果:Western blot验证结果,CALR在耐药细胞JeG-3/MTXA1中的表达明显高于亲本细胞JeG-3。细胞免疫荧光结果,在耐药细胞JeG-3/MTXA1中,CALR蛋白表达明显较亲本细胞JeG-3增多,且近核表达增强。经过RNAi后,耐药细胞JeG-3/MTXA1的耐药指数下调74.05%(33.94±0.68vs8.81±1.58),而对细胞增殖无明显影响。结论:CALR蛋白在耐药细胞中明显上调,干扰其表达后耐药细胞可明显降低其耐药指数。CALR可能参与对MTX耐药绒毛膜癌的发生。; 韩冰向阳冯凤芝万希润钱海利张雪燕孟希亭林晨; 关键词：绒毛膜癌耐药甲氨蝶呤钙网蛋白

内质网蛋白质折叠分子伴侣在氟尿苷耐药绒毛膜癌JeG-3／FUDRA细胞中的作用被引量：4: 2013年; 目的比较氟尿苷（FUDR）耐药的绒毛膜癌（绒癌）细胞系JeG．3／FUDRA细胞和其亲本细胞系JeG一3细胞（FUDR敏感）之间表达差异的蛋白质，探讨其在绒癌耐药发生中的作用。方法采用双向差异凝胶电泳（2-DE）技术筛选JeG一3／FUDRA细胞和JeG．3细胞之间表达差异的蛋白质，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）技术鉴定差异表达的蛋白质。利用靶基因功能的显著性（GO）分析和途径（Pathway）分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选，筛选出目的蛋白质。蛋白印迹法验证JeG一3／FUDRA细胞中目的蛋白质的表达；小分子干扰RNA（siRNA）干扰JeG一3／FUDRA细胞中目的蛋白质的表达后，观察其耐药性的变化。结果2-DE技术检测显示，在JeG-3／FUDRA细胞和JeG-3细胞中共筛选出46个差异表达的蛋白质，并经MALDI—TOF．MS技术鉴定证实其均为差异表达的蛋白质点；通过GO分析和Pathway分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选后发现，内质网蛋白质折叠分子伴侣钙网蛋白（CALR）、蛋白二硫异构酶A3（PDIA3）和相对分子质量为78000的葡萄糖调节蛋白（GRP78）在耐药细胞中表达均明显增高。蛋白印迹法检测显示，JeG-3／FUDRA细胞中CALR、PDIA3、GRF78蛋白的表达强度明显高于JeG-3细胞。干扰JeG一3／FUDRA细胞中CALR和PDIA3基因的表达后，JeG-3／FUDRA细胞的耐药性分别下降了76．3％（干扰前后分别为36．7±2．0和8．7±3．1，P〈0．05）和51．4％（干扰前后分别为36．7±2．0和17．8±1．2，P〈0．05）。结论内质网蛋白质折叠分子伴侣CALR、PDIA3、GRP78很可能参与了绒癌细胞FUDR耐药的发生。; 韩冰向阳冯凤芝万希润钱海利张雪燕孟希亭林晨; 关键词：绒毛膜癌蛋白质折叠氟尿苷

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国家教育部博士点基金(20101106110001)

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