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基因工程抗体亲和力成熟的策略被引量：9: 2006年; 近年来,抗体因其高度的特异性在诊断和药物的靶向治疗上备受青睐,相关行业的发展也极为迅猛。在体内诊断和治疗上,基因工程抗体具有众多鼠源性单克隆抗体无可比拟的优势,但前者亲和力低是制约其实际应用的瓶颈问题,作者将就基因工程抗体亲和力成熟的策略及其应用进行综述。; 胡晓林张春明; 关键词：基因工程抗体突变

双特异性抗体及其在肿瘤治疗中的应用: 2007年; 双特异性抗体(BsAb)是改造抗体治疗效果的发展方向之一,现已成为抗体工程研究领域的热点。在过去20年的研究中,研究人员看到了常规BsAb的潜能以及它的不足。随着分子生物学技术的迅速发展,出现了利用基因工程手段构建的BsAb的多种模式,并且有多种BsAb制剂已经用于肿瘤的初期临床诊断和治疗。该文对BsAb最新的研究进展和肿瘤治疗中的应用进行了阐述。; 张欣张春明; 关键词：肿瘤治疗

单链抗体研究进展及其在医学中的应用被引量：15: 2005年; 自英国和日本学者发现白喉抗毒素以来,人们对于抗体的研究经历了多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体3个阶段,其中单链抗体由于具有相对分子质量小、穿透力强、血中半衰期短、抗原结合特异性强、免疫原性弱和可在原核细胞中表达等特点而倍受人们关注。; 秦丽莉张春明; 关键词：单链抗体靶向治疗

心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析法的建立被引量：3: 2006年; 目的心肌肌钙蛋白I(Cardiac TroponinI cTnI)胶体金免疫层析法(GICA)的建立。方法从心肌组织中提取心肌肌钙蛋白I作为抗原,免疫新西兰大耳白家兔,制备出抗人心肌肌钙蛋白I抗体,并用胶体金标记cTnI抗体,采用免疫层析技术,建立了cTnI胶体金免疫层析法。结果心肌肌钙蛋白I抗血清滴度达1:100000,Ka=2.38×109L/mol;心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析法:灵敏度为5ng/ml;特异性:与心肌肌钙蛋白T,心肌肌钙蛋白C,激酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)均无交叉反应。结论本方法特异性强、快速、简便,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要,具有广泛应用前景。; 王德芝陈冀莹秦丽莉赵保健张春明; 关键词：胶体金免疫层析

重组人心肌肌红蛋白基因工程菌的构建: 2008年; 目的构建稳定、高效表达重组人心肌肌红蛋白(rhMb)的基因工程菌株,为临床检测早期心肌损伤及预后提供诊断试剂,促进肌红蛋白诊断标准化的研究。方法采用RT-PCR技术从人心肌组织总RNA中克隆出全长的人心肌肌红蛋白基因,将其插入到PMD18-Tsimple克隆载体中,转化DH5α克隆菌株。经酶切和测序对目的基因进行分析,再插入到pET-21a(+)表达载体中,转化BL21(DE3)。对诱导表达的目的蛋白行SDS-PAGE和运用锐普心肌梗死仪检测重组蛋白的抗原性并准确定量。结果测序表明RT-PCR所得的肌红蛋白基因hMb序列与GenBank(NM005368.2)中报道的序列一致,目的蛋白表达量达菌体总蛋白的15%,重组蛋白抗原性良好。结论成功构建了稳定、高效表达重组人心肌肌红蛋白基因工程菌株。; 张欣张春明王德芝; 关键词：基因工程菌

心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)提纯及ELISA的建立: 2006年; 目的心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiactroponinⅠ,cTnⅠ)的提纯及酶联免疫分析方法的建立。方法从猝死健康人心脏中,提取人心肌肌钙蛋白Ⅰ作为抗原,用其免疫新西兰雌性大耳白家兔,制备出抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ抗体,采用夹心方法,建立cTnⅠ酶联免疫吸附分析法。结果从人心肌中提取出11.7mgcTnⅠ,心肌肌钙蛋白Ⅰ抗血清滴度达1∶100000,Ka=2.38×109Lm/ol。方法学指标:灵敏度为0.2ngm/l;精密度,批内、批间变异系数分别为CV=3.8%和CV=8.2%;准确度,平均回收率99.7%;特异性,与心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白C、肌酸磷酸激酶(CK)、肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)均无交叉反应。用该方法和进口试剂盒对32例急性心肌梗死(AMI)患者和40例健康人血中cTnⅠ水平进行检测,两者符合率分别为93.7%、95.0%。结论该方法适于临床常规检验及科研工作需要,具有广泛应用前景。; 王德芝陈冀莹秦丽莉张春明; 关键词：酶联免疫吸附分析

心肌肌钙蛋白I(cTnI)合成肽及其抗体的研究: 目的：人心肌肌钙蛋白 I(cardiac troponinl,cTnl)合成肽及其抗体的研制,为以国产试剂替代进口试剂奠定基础。方法：根据 cTnl 氨基酸序列,结合计算机软件分析,预测 cTnl 分子的亲水性、抗原性和...; 张春明王德芝陈冀莹秦丽莉李玉彬胡晓林张欣佟晓丽; 关键词：抗体; 文献传递

重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ基因工程菌的构建被引量：6: 2007年; 目的构建稳定、高效表达重组人心肌肌钙蛋白I(cTnI)的基因工程菌株,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料,促进cTnI诊断标准化的研究。方法采用RT-PCR方法从人心肌组织总RNA中克隆出全长的人cTnI基因,将其插入到pMD19-T克隆载体中,经酶切和测序对目的基因分析,再插入到pET-21a(+)表达载体中,转化BL21(DE3),对诱导表达的目的蛋白行SDS-PAGE和采用锐普心梗仪检测重组蛋白的抗原性并准确定量。连续传代试验验证基因工程菌稳定性。结果克隆了全长的cTnI基因,目的蛋白表达量达菌体总蛋白的38%,重组蛋白抗原性良好,基因工程菌具有较高的稳定性。结论成功构建了稳定、高效表达重组人cTnI的基因工程菌。; 李玉彬张春明王德芝

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天津市科技攻关项目(043102211)