国家高技术研究发展计划(2007AA022003)
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 相关作者：彭志海樊军卫唐华美王兆文张阳德更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院中南大学上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- UNC-112相关蛋白1基因在结肠癌中的表达及其意义被引量：3
- 2010年
- 目的探讨UNC-112相关蛋白1（URP1）基因在结肠癌发生发展中的意义。方法应用定量聚合酶链反应（PCR）技术检测15例结肠癌中URP1mRNA表达，应用组织芯片和免疫组织化学技术检测203例结肠癌中URP1蛋白表达。结果URP1mRNA在66．67％（10／15）的结肠癌中较相应正常结肠组织表达上调2倍以上。URP1蛋白在结肠癌中高表达率显著高于相应正常结肠组织（60．10％比14．78％）。URP1蛋白表达增高与结肠癌淋巴结转移（P〈0．01）、AJCC分期（P〈0．01）显著相关。结论URP1基因表达增高可能是结肠发生发展过程中的重要分子事件。
- 樊军卫王兆文唐华美严东旺周崇治裘国强彭志海
- 关键词：结肠癌基因表达组织芯片
- 包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒的制备及其特性被引量：2
- 2009年
- 背景:裸质粒DNA在基因治疗中因带负电荷,易被体内核酸酶降解,故无法实现有效转染,壳聚糖是自然界存在的可降解性阳离子多聚糖,能有效防止DNA被核酸酶降解,提高转染效率。目的:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,观察其相关特性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2009-02/08在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成。材料:pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70由国家卫生部纳米生物技术重点实验室构建,壳聚糖(批号060306,脱乙酰度>90.0%,黏度<100mPa*s)由上海伯奥生物科技有限公司提供,B16细胞由中南大学肿瘤研究所惠赠。方法:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,将壳聚糖基因纳米粒转染B16细胞,利用反转录-聚合酶链反应检测体外转染效果;应用噻唑蓝评价壳聚糖基因纳米粒子的体外细胞毒性。主要观察指标:激光粒度仪测定壳聚糖基因纳米粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率;凝胶阻滞实验观察壳聚糖和质粒DNA的聚合;DNaseⅠ的保护试验分析壳聚糖基因纳米粒抗核酸酶降解能力。结果:壳聚糖基因纳米粒的平均粒径约为223nm,Zeta电位为16mV;DNA包封率为92.3%,B16细胞转染实验显示其效率与Lipofectamine2000相近,而其毒性远低于Lipofectamine2000。结论:壳聚糖纳米粒子可高效装载质粒DNA转染B16细胞,而且对细胞基本无毒。
- 吴季霖张阳德李坚张红
- 关键词：纳米粒纳米生物材料基因载体
- 石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞生长特性的影响被引量：2
- 2010年
- 背景:有报道指出石墨碳纳米颗粒具有强大的吸附能力,只要尽可能将其控制在有效浓度范围内,石墨碳纳米颗粒会具有很好的细胞相容性及增敏效应。目的:了解石墨碳纳米颗粒的形态特征,观察石墨碳纳米颗粒其对体外培养细胞增殖与超微结构的影响。方法:取石墨碳纳米颗粒0.5g,加100mL三蒸水,振荡后微孔过滤,即为石墨碳纳米颗粒母液。取处于对数生长期的HepG2细胞、L02细胞、Hl7702细胞、3T3细胞,调整密度为5×107L-1接种于6孔板,0.5mL/孔,加入含胎牛血清、青霉素、链霉素的RPMI-1640培养基1.5mL,培养24h后弃去旧液,设1～5号孔为实验组,分别加入质量浓度为25,10,7.5,5,0.25mg/L石墨碳纳米颗粒培养液2.0mL,设6号孔为空白对照组,不加石墨碳纳米颗粒溶液,继续培养24h后终止培养。用原子力显微镜测量石墨碳纳米颗粒的粒径,电子显微镜观察石墨碳纳米颗粒的形态特征;用细胞计数板在光学显微镜下计数不同浓度石墨碳纳米颗粒对细胞数量的影响;透射电镜观察7.5mg/L石墨碳纳米颗粒对细胞超微结构的影响。结果与结论:石墨碳纳米颗粒呈球形微粒,粒径约20nm。与空白对照组比较,各浓度石墨碳纳米颗粒培养液组除HepG2细胞外,其余3种细胞数量基本都有所增加,其中7.5mg/L石墨碳纳米颗粒培养液对L02细胞、Hl7702细胞、3T3细胞、HepG2细胞数量的影响最为显著(P<0.05)。对7.5mg/L石墨碳纳米颗粒作用后的细胞进行透射电镜观察,可见石墨碳纳米颗粒分布于细胞内部,如细胞质、细胞核、线粒体中,未见亚细胞结构受损及细胞凋亡坏死现象发生。证实石墨碳纳米颗粒对体外培养的细胞无损伤不良反应,且能够促进细胞生长增殖,其作用强度与质量浓度有关,7.5mg/L为较佳质量浓度。
- 刘东京张红张阳德刘美洲吴季霖潘一峰陈伟刘辉曾庆仁
- 关键词：人肝癌细胞株超微结构细胞生长
- 新型PDMS弹性印章的制备方法及其在纳米生物芯片中的应用
- 2010年
- 目的通过多次转模低成本批量制备弹性印章,并通过微接触印刷法制造纳米生物芯片。方法利用SU-8模具制备PDMS二级模具,通过表面溅射Cr-Cu使PDMS印章与二级模具顺利脱模,并通过扫描电镜(SEM)观察模具的完整性。制备的印章通过微接触印刷法在玻片表面固定人IgG抗体,通过与纳米量子点(QD-605nm)标记的二抗反应,共同构建纳米生物芯片,通过荧光显微镜观察印刷图形的质量及印刷抗体的活性。结果PDMS二级模具表面溅射Cr-Cu后能轻松地与PDMS印章脱模,且结构完整、图形清晰。弹性印章印刷IgG抗体形态清晰,量子点荧光强度好。结论通过PDMS二级模具表面溅射Cr-Cu能够实现弹性印章的低成本批量制备,且该印章结合纳米量子点优异的荧光性能可制备高灵敏的生物芯片。
- 夏骏陈翔高峰彭志海
- 关键词：量子点生物芯片
- 结肠癌实质细胞长标签基因表达系列分析文库的建立及应用被引量：2
- 2010年
- 目的:应用长标签基因表达系列分析(long serialan alysis of gene expression,LongSAGE)技术定量分析结肠癌实质细胞转录组,并筛选肿瘤相关基因。方法:应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)、RNA提取和线性扩增方法得到结肠癌实质细胞及其相应正常结肠上皮细胞的反义RNA(antisense RNA,aRNA)样品,构建LongSAGE文库;然后应用SAGE2000软件对所得序列文本进行分析,筛选肿瘤相关基因;最后采用RT-PCR方法验证该差异表达基因。结果:结肠癌细胞LongSAGE文库标签体总数为50542个,识别出基因总数为16497个。正常结肠细胞LongSAGE文库标签体总数为50124个,识别出基因总数为16417个。LongSAGE文库筛选出结肠癌差异表达基因705个(P<0.05)。转化生长因子β诱导基因(transforming growth factor β-induced gene,TGFBI)为LongSAGE文库筛选出的结肠癌相关基因,RT-PCR检测验证了其在结肠癌组织标本中表达上调。结论:LCM-LongSAGE是对结肠癌实质细胞进行定量转录组研究的可行流程。
- 樊军卫唐华美严东旺王兆文王晓亮彭志海
- 关键词：结肠肿瘤基因表达谱显微切割基因表达系列分析
- 石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞生长曲线及周期的影响
- 2009年
- 背景:有报道指出石墨碳纳米颗粒具有强大的吸附能力,只要尽可能将其控制在有效浓度范围内,石墨碳纳米颗粒会具有很好的细胞相容性、增敏效应。目的:观察石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞的生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。设计、时间及地点:细胞-材料学体外实验,于2007-01/2008-12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成。材料:石墨碳纳米颗粒由中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心自制。人肝细胞(L02)、人肝细胞(Hl7702)、小鼠细胞(3T3)、人肝癌细胞(HepG2)购自湘雅医院中心实验室公司。方法:取石墨碳纳米颗粒母液,稀释10倍后,采用激光粒度分析仪观察石墨碳纳米颗粒的大小及Zeta电位。取含胎牛血清的RPMI-1640培养基,设立11瓶,分别加入适量石墨碳纳米颗粒母液,使其含石墨碳纳米颗粒的浓度分别为100,75,50,25,20,15,12.5,10,7.5,5,0mg/L。将L02细胞、Hl7702细胞、3T3细胞、HepG2细胞密度均调整为1×109L-1,接种后置37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度培养箱中,取处于指数生长期的细胞用于各项指标测定。主要观察指标:MTT比色法测定细胞数量,流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞凋亡率。结果:石墨碳纳米颗粒的粒径约20nm,带有负电荷,其电位值为-14.8mV。与未加石墨碳纳米颗粒的空白对照组比较,除人肝癌细胞(HepG2)外,不同浓度的石墨碳纳米颗粒对其余3株细胞增殖均有促进作用,且浓度为7.5mg/L时促细胞增殖作用最强。在石墨碳纳米颗粒浓度为7.5mg/L条件下,4株细胞的凋亡率均明显低于空白对照组。石墨碳纳米颗粒作用24h的L02肝细胞周期发生改变,G0期细胞数减少,更多的细胞进入到S期和G2期。结论:石墨碳纳米颗粒能进入体外培养细胞内,并对细胞生长、增殖产生促进作用,不诱导细胞凋亡,其作用强度与浓度有关。
- 刘东京张阳德吴季霖刘美洲刘东非潘一峰陈伟刘辉曾庆仁
- 关键词：人肝癌细胞株细胞周期
- 应用结肠癌基因表达谱数据整合分析筛选肿瘤相关基因被引量：8
- 2010年
- 目的 通过结肠癌基因表达谱数据整合分析筛选肿瘤相关基因.方法 基因芯片技术构建的结肠癌基因表达谱与转录组公共数据库SAGE DGED信息相结合,筛选肿瘤相关基因.定量聚合酶链反应（PCR）验证基因差异表达.组织芯片（腺癌22例、腺瘤20例、正常8例）和免疫组织化学技术检测基因蛋白表达.结果 119条基因（上调17条、下调102条）在基因芯片与SAGEDGED中表达变化结果一致.定量PCR检测TGFBI、NME1、IFITM3、FCGBP和TSPAN1基因表达,结果与基因表达谱数据一致.IFITM3蛋白表达在结肠腺瘤（20%,4/20）和腺癌（55%,12/22）中表达较正常结肠组织（0,0/8）明显升高（P〈0.05）.结论 基因芯片数据和SAGE DGED相结合,可快速、准确筛选结肠癌肿瘤相关基因.
- 樊军卫唐华美王兆文周崇治王晓亮裘国强彭志海
- 关键词：结肠癌基因表达基因芯片
