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Toll样受体与HPV感染相关疾病研究进展: 2011年; 人乳头瘤病毒感染引起皮肤、黏膜疣状增生，且与宫颈癌等恶性肿瘤的发生密切相关。Toll样受体能特异性识别微生物病原相关分子模式，启动天然免疫应答并激活获得性免疫反应。研究表明，某些Toll样受体在人乳头瘤病毒感染宿主表达异常，Toll样受体激动剂对人乳头瘤病毒感染相关疾病具有治疗作用。概述Toll样受体及其与人乳头瘤病毒感染相关疾病的关系以及Toll样受体激动剂在人乳头瘤病毒感染相关疾病治疗中的研究现状。; 汤怡周强程浩; 关键词：人乳头瘤病毒 TOLL样受体

自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测尖锐湿疣皮损的研究被引量：2: 2015年; 目的采用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测外生殖器尖锐湿疣皮损组织中HPV6b和11型E7蛋白的表达，探讨该抗体在临床检验中的应用价值。方法 55例经临床和病理确诊的尖锐湿疣皮损石蜡标本，用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体进行免疫组化检测，其中18例皮损冰冻标本用RT-PCR法测定HPV6b和11型E7蛋白mRNA表达，分析与免疫组化结果的符合率。结果 55例尖锐湿疣皮损的免疫组化染色显示，HPV6b和11型E7蛋白为胞核染色，且皮损全层表皮细胞均有阳性表达，但基底层阳性细胞较多。HPV6b和11型E7蛋白阳性表达率分别为76.36%（42/55）和58.18%（32/55），总阳性表达率为94.55%（52/55），两蛋白双阳性率为40.00%（22/55），两蛋白均阴性表达为3例（5.45%）。18例尖锐湿疣冰冻标本经RT-PCR法检测，HPV6b和11型E7 mRNA阳性表达分别为15例和10例，双阳性表达7例，其阳性表达型别与免疫组化结果完全一致，符合率均为100%。结论该自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体免疫组化法检测尖锐湿疣皮损，检测结果直观，可以观察到HPV6b和11型感染细胞在病损中的分布位置。; 曹蕾程浩王惠周强汤怡姜少杰丁杨陈贤祯; 关键词：尖锐湿疣

11型HPVE7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备被引量：2: 2014年; 目的构建人11型乳头瘤病毒(HPV 11)E7蛋白的原核表达载体,表达纯化后制备抗HPV11E7蛋白的多克隆抗体。方法构建pGEX-4T2-HPV11E7原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达可溶性融合蛋白GST-HPV11E7,纯化获取11型HPVE7蛋白。将HPV11E7蛋白免疫新西兰大白兔获得抗HPV11E7的多克隆抗体,用蛋白G琼脂糖纯化获得IgG型多克隆抗体。Western blot法及免疫荧光染色检测该抗体的效价及特异性。结果 SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导6 h后可表达出高水平可溶性GST-HPV11E7融合蛋白。纯化后免疫新西兰大白兔获得抗HPV11E7的血清,纯化获得了IgG型多克隆抗体。Western blot及免疫荧光染色结果显示,兔抗HPV11E7 IgG具有效价高和特异性强的特点。结论成功表达了HPV11E7蛋白并制备了效价较高、特异性较好的IgG型兔抗HPV11E7蛋白多克隆抗体。; 丁杨姜少杰陈贤祯陈丽红张行程浩; 关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白原核表达多克隆抗体

荧光定量PCR检测尖锐湿疣皮损Toll样受体的表达水平被引量：11: 2011年; 目的检测尖锐湿疣皮损中Toll样受体（TLRs）的mRNA表达水平，探讨TLRs在人乳头瘤病毒（HPV）感染免疫中的可能作用。方法提取40例尖锐湿疣患者皮损和35例HPV阴性的慢性宫颈炎患者宫颈刮落细胞的总RNA，逆转录为cDNA后用实时荧光定量PCR法检测TLRl～10的mRNA表达水平，并检测40例尖锐湿疣的HPV分型。结果40例尖锐湿疣患者以低危型HPV6和11型为主（77．5％和55％）。55％尖锐湿疣患者感染两种以上HPV亚型，其中35％合并高危型HPV感染。尖锐湿疣组TLR3、7、8的mRNA表达水平高于其他TLRs，TLR9的mRNA表达水平低于其他TLRs（P均〈0．05）。尖锐湿疣皮损TLR1—10的mRNA表达水平在HPV6型和HPV11型感染间以及在低危型与合并高危型HPV感染间差异无统计学意义（P均〉0．05）。尖锐湿疣组TLR1～3、TLR5～8和TLR10的mRNA表达水平均高于HPV阴性的慢性宫颈炎组（P均〈0．05），其中TLR2、7、8的mRNA表达水平升高更显著（P均〈0．01）。而TLR4、11LR9的mRNA表达水平与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论尖锐湿疣皮损中部分TLRs（3、7、8）表达水平较高，但TLR9表达水平较低。相对于HPV阴性的慢性宫颈炎，尖锐湿疣皮损中TLR1—3、TLR5～8和TLR10的mRNA表达上调。不同HPV型别感染的尖锐湿疣皮损中TLRs表达谱差异无统计学意义。推测尖锐湿疣TLRs表达谱的改变可能与HPV感染有一定关系，是否与HPV感染的免疫逃逸机制及持续感染有关尚有待进一步明确。; 朱小霞程浩张行朱可建周强陈大方王琦; 关键词：荧光定量PCR 尖锐湿疣人乳头瘤病毒 TOLL样受体

人乳头瘤病毒感染对树突细胞的影响机制被引量：1: 2013年; 树突细胞（DC）作为功能最强的抗原提呈细胞参与机体免疫应答.人乳头瘤病毒（HPV）作为一种肿瘤相关病毒,其免疫致病机制日益受到关注.HPV感染后可影响DC的功能,导致抗病毒免疫受损,并与HPV持续感染有一定关系；同时,DC可通过Toll样受体（TLR）及TLR信号转导通路诱导抗病毒免疫应答,但在某些条件下可能诱导免疫耐受.目前,HPV感染导致DC异常的作用机制,以及DC疫苗治疗HPV感染尚有待进一步研究.; 丁杨程浩; 关键词：树突细胞人乳头状瘤病毒宿主免疫

人乳头瘤病毒6b型E7蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4: 2011年; 进行人乳头瘤病毒6b型(Human papillomavirus type 6b,HPV6b)E7蛋白原核表达并制备其多克隆抗体。用已构建的pGEX-4T-2/HPV6bE7原核表达载体诱导表达大量可溶性融合蛋白GST-HPV6bE7,用Glutathione-Sepharose 4B亲和柱和凝血酶纯化获取HPV6b型E7蛋白。将纯化的E7蛋白免疫新西兰兔并纯化为多克隆抗体IgG。采用Western-Blot及免疫荧光法分析该抗体的效价及特异性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导3～6h后pGEX-4T-2/HPV6bE7表达载体在大肠杆菌中高水平表达可溶性融合蛋白。纯化的E7蛋白免疫新西兰兔后可获得兔多克隆抗体IgG。经Western-Blot及免疫荧光鉴定,兔抗IgG具有高效价性和抗HPV6bE7蛋白特异性。获取纯化的HPV6b型E7蛋白具有较好的免疫原性,其免疫兔产生的多克隆抗体IgG效价高,特异性好,有望进一步用于HPV6b型的生物学功能研究和免疫学效应研究。; 汤怡周强王琦程浩; 关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白多克隆抗体

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国家自然科学基金(81071302)

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