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猪圆环病毒1型和2型Rep蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：2: 2007年; 分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a(+)和pET-32a(+)两种原核表达载体上。测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,猪圆环病毒1型和2型的ORF1均能在pET-28a和pET-32a中分别以重组蛋白His-Rep(40 Ku)和Trx-His-Rep(54 Ku)的形式表达。进一步纯化后测定重组蛋白的浓度,推算出猪圆环病毒1型和2型的His-Rep蛋白产量分别为34 mg/L菌液和14 mg/L菌液,Trx-His-Rep蛋白产量则为12 mg/L菌液和10 mg/L菌液。这些纯化的蛋白在Western blot中能够与猪抗猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应,显示其具有良好的免疫学活性。本研究建立的猪圆环病毒重组Rep蛋白的原核表达系统及其纯化方法,为下一步开展Rep蛋白功能等相关研究奠定了基础。; 李益飞申会刚商绍彬陈庆新郭军庆周继勇; 关键词：REP蛋白纯化

猪圆环病毒2型感染的血清学分析被引量：82: 2004年; 应用间接免疫荧光技术 ,测定了浙江省内 4 4个猪场 2 0 0 0～ 2 0 0 2年间的 2 0 39个血清样本 ,对不同地区、年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示 ,浙江省 4 4个猪场均有猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染 ,猪场的感染率为 10 0 % ,全省猪的 PCV2感染的平均血清阳性率为 5 8.31% ,其中种猪感染的血清阳性率为 5 9.38% ,断奶后猪感染的血清阳性率为 5 6 .6 5 %。长白种猪感染的血清阳性率为 4 4 .83%、长白仔猪感染的血清阳性率为 6 4 .2 8% ,明显高于大约克和杜洛克种猪和仔猪的感染率。 PCV2感染的血清阳性率高的种猪和仔猪群 ,其 PRRSV和 Pr V的抗体阳性率低。这些结果说明 ,PCV2在猪群中的感染非常普遍 ,不同品种猪对 PCV2的易感性不同。; 周继勇陈庆新叶菊秀朱家新郑肖娟商绍彬陈亭飞母安雄周恩民; 关键词：猪圆环病毒2型血清学间接免疫荧光试验多系统衰竭综合征

重组表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的抗原特性分析被引量：12: 2005年; 将猪圆环病毒2型(PCV2 )去核定位信号衣壳蛋白(Nuclearlocalizationsignal_defectedcapsidprotein ,dCap)与谷胱甘肽_S_转移酶(GST)融合,在大肠杆菌中表达,经纯化和凝血酶剪切分别获得纯化的GST_dCap融合蛋白和dCap蛋白,Westernblot结果表明二者都能与猪抗PCV2血清发生特异性反应。dCap蛋白免疫小鼠制备的单克隆抗体,不仅能特异地与GST_dCap融合蛋白、dCap蛋白和纯化的PCV2粒子发生反应,而且能特异地与PK_15细胞内的PCV2病毒颗粒发生反应,其中抗dCap蛋白的单克隆抗体4C4、3F6和2G7具有阻止病毒感染细胞的能力。表明原核表达的dCap蛋白完全或部分正确模拟了PCV2天然衣壳蛋白的构像,PCV2衣壳蛋白存在阻止PCV2病毒感染细胞的功能性表位。; 商绍彬周继勇吴建祥陈庆新龚辉; 关键词：猪圆环病毒2型单克隆抗体抗原表位

猪圆环病毒Ⅱ型Rep基因在PK15细胞中的表达及特性被引量：8: 2005年; 为研究猪圆环病毒型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性,通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945bp片段,与真核表达载体pCI-neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep。pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48h,通过RT-PCR可检测到PCV2RepmRNA的转录;用猪PCV2多抗血清作间接免疫荧光试验,可检测到Rep基因表达产物。在表达量低的细胞中,PCV2Rep蛋白主要位于PK15的细胞浆,在表达量高的细胞中,细胞浆和细胞核中均含有大量的Rep蛋白,表明Rep对PK15细胞的细胞浆和细胞核的亲嗜性没有明显差别。; 申会刚周继勇陈庆新郭军庆陈婷飞商绍彬李增魁; 关键词：PK15细胞 REP 间接免疫荧光试验基因表达产物质粒转染

猪Ⅱ型圆环病毒浙江株的分离及全基因组结构分析被引量：19: 2004年; 用PCR方法对从浙江省猪场收集的、以淋巴结肿大和生长迟缓为特征的患猪腹股沟淋巴结进行PCV2检测。将检测为阳性的病料研磨、离心、过滤除菌后 ,接种PCV freePK 1 5细胞进行病毒分离 ,分离获得 3株病毒 ,命名为HZ0 2 0 1、HZ0 2 0 2、NB0 30 1。PK 1 5细胞增殖所得病毒离心纯化后 ,在电镜下可观察到直径约为 1 7～ 2 0nm ,呈二十面体对称的病毒粒子。以组织和病毒的细胞DNA为模板进行PCV2的全基因扩增 ,测序结果显示 ,3株病毒分离物全基因序列均由 1 76 7bp组成 ,直接来自病料与细胞分离毒株的核苷酸同源性为 1 0 0 %。基因组内含有 1 1个ORF。通过比较发现 ,分离毒株与PCV2参考株的同源性介于 94 2 %～ 99 7%之间 ;与PCV1参考株的同源性为77 2 %～ 77 9%。; 陈庆新周继勇叶菊秀申会刚陈婷飞; 关键词：猪圆环病毒2型基因结构 PCV2

规模猪场4大疫病的血清学检测及免疫抑制病因分析被引量：12: 2009年; 选取杭州、绍兴、嘉兴和湖州4个地区的规模猪场为试验猪场,用正向间接血凝试验(IHA)检测猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)抗体合格率;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)抗体阳性率,分析免疫抑制状况。同时,采取临床可疑病料,用RT-PCR技术检测PRRSV、PCV2、CSFV和伪狂犬病毒(PRV)的感染率。结果显示:不同年龄猪群中,PCV2抗体阳性率都在96.0%以上,而CSFV、FMDV抗体合格率及PRRSV抗体阳性率呈现一致的变化趋势,即母猪最高,哺乳仔猪其次,培育猪和肥育猪最低;在病原检测中,PRRSV和PCV2检出率最高,分别为44.3%和60.7%。另外,双重感染和多重感染明显,特别是PRRSV+PCV2+CSFV三重感染,阳性率达7.6%。本试验结果为制定有效的免疫程序等防治措施提供科学依据。; 徐丽华王一成袁秀芳周继勇张存叶伟成商绍斌; 关键词：CSFV FMDV PCV2 病原检测免疫抑制

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