江苏省卫生厅科研基金(H200610)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 相关作者：欧阳骏温端改樊彩斌严春寅侯建全更多>>
- 相关机构：苏州大学东南大学潍坊市第二人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅科研基金江苏省医学重点人才培养基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转染IκB激酶2的显性负性突变体的受者未成熟树突状细胞诱导产生的CD4＋CD25-T细胞致耐受特性被引量：1
- 2012年
- 目的探讨体外转染抑制性蛋白IKB激酶2的显性负性突变体（IKK2dn）基因的受者大鼠未成熟树突状细胞（imDC）诱导产生的CD4±CD25-T细胞致耐受作用的特性及机制。方法将含IKK2dn基因的腺病毒载体按1：200的感染复数（200MOI）体外转染受者Lewis大鼠骨髓源性imDC，2d后负载供者BN大鼠抗原，48h后与受者大鼠T细胞初次混合淋巴细胞反应（MLR），72h后免疫磁珠法分离筛选混合淋巴细胞反应（MLR）中诱导产生的CD4±CD25-T细胞，将获得的CD4±CD25-T细胞与受者大鼠T细胞再次MLR72h，检测其对T细胞增殖反应的影响，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定MLR上清中白细胞介素（IL）-2、IL-10、转化生长因子（TGF）-p和干扰素（IFN）-1的水平。结果Westernblot结果显示，转染IKK2dn基因的imDC稳定、高效表达IKK2dn。转染IKK2dn受者imDC诱导产生的CD4＋T细胞低表达CD25（18．50±1．40）％，与未转染组（72．20±3．30）％及转染空载体组（63．70±1．80）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。转染IKK2dn诱导产生的CD4＋CD25-T细胞能抑制异种抗原刺激引起的受者T细胞的增殖反应（0．044±0．006），与转染空载体所诱导产生的CD4＋T细胞比较（0．419±0．014），差异有统计学意义（P〈0．05）。MLR中高比例的CD4＋CD25-T细胞能够明显抑制受者T细胞的增殖反应（0．044±0．006），与低比例组比较（0．106±0．006），差异有统计学意义（P〈0．05），且CD4＋CD25-T细胞介导的MLR上清液中IL-10、TGF—β水平明显升高（P〈0．05），IL-2、IFN-γ水平明显降低（P〈0．05）。结论转染IKK2dn基因并负载供者抗原的受者imDC可以诱导受者T细胞产生CD4＋CD25-T细胞，此种CD4＋CD25-T细胞能够引起受者T细胞针对供者抗原的特异性低反应，具有诱导免疫耐受的作用。
- 杜科霖樊彩斌温端改侯建全欧阳骏张东兴
- 关键词：树突状细胞淋巴细胞反应CD4
- 肾移植急性排斥反应患者血清IL-15、穿孔素及颗粒酶B mRNA的表达被引量：2
- 2008年
- 目的探讨白细胞介素15（IL-15）、穿孔素（PFP）、颗粒酶B（GraB）mRNA在肾移植急性排斥反应（AR）、环孢素A（CsA）肾毒性、细菌感染时的变化。方法采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-PCR）方法动态检测45例肾移植患者外周血淋巴细胞（PBL）中IL，15、PFP及GraB mRNA表达的变化。结果AR组IL-15、PFP及GraB mRNA的表达均高于肾功能稳定组，较临床症状出现早2～3d；经激素冲击治疗后，PFP及GraB mRNA的表达减弱，但IL-15 mRNA未见明显减弱。细菌感染组PFP和GraB mRNA的表达水平亦上升，但IL-15 mRNA的表达水平未见明显升高。CsA中毒组三项指标在监测过程中均未见明显变化。结论FQ-PCR测定PBL中IL-15、PFP及GraB mRNA表达是一种无创、较敏感的早期检测AR的方法，并可以预测抗排斥反应的治疗效果。IL-15作为CD8记忆T细胞生长和活化必须的细胞因子，可能是介导AR发生的重要因子。它受细菌感染因素干扰少，与PFP和GraB mRNA同时检测对AR的判断更为准确。
- 欧阳骏温端改侯健全严春寅樊一笋顾国浩
- 关键词：白细胞介素15穿孔素颗粒酶B肾移植急性排斥反应
- 白细胞介素15和骨桥蛋白在大鼠肾移植急性排斥反应早期的表达
- 2010年
- 目的研究白细胞介素（IL）15、骨桥蛋白、穿孔素及颗粒酶B在大鼠肾脏移植急性排斥反应（AR）早期的表达变化。方法以BN大鼠和LEW大鼠分别作为供受体，建立大鼠肾移植动物模型。环孢素A处理组（CsA组）：（BN→LEW，术后注射环孢素A）；IL-15阻断组：（BN→LEW，术后注射IL-15抗体）；AR组：（BN→LEW，术后注射生理盐水）；对照组：（LEW→LEW，术后注射生理盐水）。对照组6只大鼠，其余组10只大鼠，于移植后1、3、5、7d取外周血，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）动态检测骨桥蛋白、IL-15、穿孔素及颗粒酶BmRNA的表达，并作移植肾病理分析。结果AR组、CsA组及IL-15阻断组肾移植术后IL—15、骨桥蛋白mRNA表达逐渐上调，第5天均达到高峰；对照组均处于低水平。术后第5天，CsA组和IL一15阻断组IL一15mRNA分别为9685±1440、4346±741均低于AR组（17022±2153，P〈0．01），IL-15阻断组明显低于CsA组（P〈0．01）；CsA组和IL-15阻断组骨桥蛋白mRNA分别为13226±1565、19112±2908均低于AR组（24663±2449，P〈0．01），IL-15阻断组明显高于CsA组（P〈0．01）。术后第5天IL-15阻断组和CsA组穿孔素和颗粒酶BmRNA表达明显低于AR组（P〈0．01）。移植肾病理组织检查显示，AR组呈现重度急性排斥反应，IL-15阻断组排斥反应征象轻微。结论大鼠肾移植AR发生早期骨桥蛋白、IL-15、穿孔素和颗粒酶BmRNA在外周血中均高水平表达，通过阻断IL-15／IL-15受体途径可明显下调颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达。
- 欧阳骏何军樊一笋樊彩斌孙鹤云温端改
- 关键词：肾移植白细胞介素15移植物排斥骨桥蛋白
- 腺病毒介导的IL-24表达对PC-3人前列腺癌细胞体内外抑癌效应被引量：2
- 2010年
- 目的:研究腺病毒介导的IL-24基因表达对前列腺癌细胞体内外的抑癌效应及分子机制。方法:将扩增的Ad-IL-24感染PC-3细胞,用RT-PCR和Western blot法检测IL-24基因在PC-3细胞中的表达;MTT法检测IL-24基因表达对PC-3细胞的生长影响;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡变化;RT-PCR法检测IL-24基因的表达对PC-3细胞中的Bcl-2、Bax、p53和Caspase3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-IL-24在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、CD34等与细胞凋亡和血管形成相关因子的表达。结果:IL-24基因在PC-3细胞中成功表达,对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,可上凋p53、Bax、Caspase-3基因和下凋Bcl-2基因表达,进而诱导细胞凋亡。Ad-IL-24能显著抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,瘤重的抑制率可达54%;免疫组化结果显示Ad-IL-24不仅能明显上调Bax和Caspase-3基因和下调Bcl-2基因表达,而且能引起与血管形成标记基因CD34表达水平下降。结论:腺病毒介导的IL-24基因表达在体内外可明显抑制PC-3细胞的生长,诱导其凋亡。其机制可能与上凋P53、Bax、Caspase-3基因和下凋Bcl-2和CD34基因表达水平有关。
- 张治国杨吉成杨慧翠盛伟华谢宇锋龙建华丁翔欧阳骏
- 关键词：IL-24基因前列腺癌肿瘤抑制
- IKK2dn体外转染对大鼠树突状细胞成熟度的影响被引量：6
- 2009年
- 目的:探讨腺病毒介导IKK2dn基因(Adv-IKK2dn)体外转染大鼠树突状细胞(DCs)对其生物学行为的影响。方法:将含有IKK2dn基因的腺病毒载体转染大鼠骨髓源性DCs,获得稳定高表达IKK2dn的DCs。流式细胞术(FCM)分析转染IKK2dn基因DCs的表型变化,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激同种T细胞增殖的能力,ELISA测定MLR上清IL-10和IFN-γ水平。结果:Westernblot结果显示,转染pAdxsi-GFP-IKK2dn病毒质粒的DCs稳定表达IKK2dn。转染IKK2dn基因的DCs与未转基因的DCs相比,表面CD86和MHC-II的表达水平无显著差异。和负载BN大鼠抗原的未转染IKK2dn的DCs相比,转染IKK2dn并负载BN抗原的DCs刺激同种T细胞增殖能力显著下降(P<0.01),MLR上清中IL-10水平升高(P<0.01),而IFN-γ水平降低(P<0.01)。结论:IKK2dn基因的转染能使DCs维持于未成熟状态。同时,负载BN抗原的转IKK2dn基因的DCs可以抑制同种T细胞增殖反应,为诱导体内免疫耐受提供了实验依据。
- 欧阳骏樊一笋樊彩斌温端改侯建全严春寅张学光
- 关键词：树突状细胞混合淋巴细胞反应
- 转染IKK2dn的受者树突状细胞回输延长同种异体肾移植大鼠的存活时间被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨IKK2dn基因转染并负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞（imDC）延长同种异体肾移植大鼠的存活时间及其机制。方法获取和培养Lewis大鼠骨髓源性DC，转染IKK2dn并负载BN大鼠可溶性抗原进行体外实验，检测CD86和主要组织相容性复合物（MHC）II的表达及DC刺激T淋巴细胞增殖的能力。。肾移植受者为Lewis大鼠，用随即数字表法分DC组、空转染组、转染组、对照组，术前7d分别输注1×10^7个DC、Adv-0-DC、负载BN抗原的Adv-IKK2dn-DC和等量生理盐水，供者均为BN大鼠，另设第i方供者组，术前处理同转染组，供者为Wistar大鼠。移植后检测各组受者T淋巴细胞的增殖能力及血清白细胞介素2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）的表达水平，观察各组大鼠的存活时间和发生排斥反应情况。结果DC的体外实验结果显示：与转染IKK2dn前相比，转染后DC仍能低水平表达CD86和MHCⅡ，负载供者抗原后CD86和MHCⅡ表达均增加，而转染IKK2dn后再负载供者抗原，CD86和MHCⅡ的表达未发生明显变化；DC负载供者抗原后，刺激T淋巴细胞增殖的能力明显增强（P〈0．05），而转染IKK2dn并负载供者抗原后不能有效刺激T淋巴细胞增殖。肾移植术后的检测结果显示：转染组T淋巴细胞的增殖能力明显低于其他4组（P〈0．05或P〈0．01），血清ID2和IFN-γ水平也显著降低。转染组移植肾存活时间为（26．8±1．76）d，较其他各组显著延长（P〈0．01），并且转染组发生排斥反应的病理级别较低，病理学观察仅见间质少量炎症细胞浸润，肾小球和肾小管基本正常。结论IKK2dn基因转染并负载供者抗原的受者imDC回输可以延长同种异体肾移植大鼠存活时间，其机制可能与降低DC共刺激分子表达、抑制TH1细胞因子产生有关。
- 欧阳骏樊彩斌温端改侯建全严春寅张学光
- 关键词：树突细胞
- 腺病毒介导的ING4基因对人膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨腺病毒介导的人生长抑制因子4（ING4）基因对人膀胱移行细胞癌T24细胞体外抑癌效应及其分子机制.方法 将含ING4的重组腺病毒（Ad-ING4）转染T24细胞,以空载体组、未转染组细胞作对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在T24细胞中的表达 四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组T24细胞生长情况 流式细胞术（FCM）和Hochest 33258染色法检测各组T24细胞凋亡变化 半定量RT-PCR法检测各组细胞中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x（Bax）、p53、缺氧诱导因子（HIF）1α和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达 Western印迹法检测各组细胞中caspase-3蛋白的表达.结果 腺病毒介导的ING4基因在T24细胞中成功表达,能明显诱导T24细胞凋亡,其凋亡率可达17.2%±4.1%,高于空载体组（4.7%±1.2%）和未转染组（4.8%±1.2%,P〈0.05） 外源性ING4基因可引起T24细胞中p53、Bax基因表达上凋（1.40±0.11比0.27±0.04,1.50±0.12比0.60±0.05）和Bcl-2、HIF-1α基因表达下凋（0.19±0.02比1.20±0.08,0.33±0.03比0.98±0.06,均P〈0.05）,并促进caspase-3活化.结论 腺病毒介导的ING4基因在体外可通过上凋p53、Bax/Bcl-2基因和下凋HIF-1α基因表达,导致caspase-3的活化而抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞的生长,并诱导其凋亡.
- 张治国欧阳骏韩从辉杨吉成杨慧翠龙建华丁翔
- 关键词：膀胱肿瘤细胞凋亡
- Ad-ING4-IL-24双基因共表达腺病毒对前列腺癌细胞株PC3体内外抑癌增效作用被引量：1
- 2010年
- 目的 观察肿瘤生长抑制因子4（ING4）和白细胞介素-24（IL-24）双基因共表达腺病毒载体对PC3人前列腺癌细胞体内外抑癌增效作用.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测ING4和IL-24在PC3细胞中的表达;噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM）检测双基因对PC3细胞的生长抑制和凋亡效应;半定量RT-PCR法和Western blot法检测双基因的表达对PC3细胞中的bcl-2、bax、p53和Caspase-3凋亡相关基因表达的影响.在前列腺癌的裸鼠移植瘤动物模型上,检测Ad-ING4-IL-24对移植瘤生长的抑制作用,并通过免疫组织化学法检测bcl-2、bax、Caspase-3、CD34等相关因子的表达.结果腺病毒介导的ING4和IL-24双基因在PC3细胞中成功表达,对PC3细胞增殖具有抑癌增效功能,可引起p53、bax、Caspase-3基因表达上调和bcl-2基因表达下凋,诱导细胞凋亡.Ad-ING4-IL-24能显著抑制PC3裸鼠前列腺癌移植瘤生长,瘤重的抑制率可达74%,免疫组织化学结果显示Ad-ING4-IL-24能明显上调bax和Caspase-3的表达和下调bcl-2和CD34基因表达.结论 Ad-ING4-IL-24在体内外均可明显抑制PC3细胞的生长,诱导其凋亡,具有抑癌增效功能.其机制可能是通过上凋p53、bax、Caspase-3基因和下凋bcl-2和CD34基因表达水平.
- 张治国欧阳骏杨吉成韩从辉丁翔
- 关键词：ING4IL-24前列腺癌
