国家自然科学基金(30670224)
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：首都医科大学吉林大学吉林医药学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NAi技术在医学寄生虫学研究中的应用
- 2010年
- RNAi是指在进化过程中高度保守的、由siRNA（Small interfering RNAs）诱发的同源mRNA高效特异性降解的现象.因其发生在转录之后,故又称为转录后基因沉默（Post-transcriptional gene silencing,pTGS）. 近年来的研究表明, 很多种寄生虫都存在着RNAi现象.RNAi为寄生虫（医学原虫、医学蠕虫）基因功能的研究和新药靶点的筛选提供了有效的技术平台.
- 冯宪敏卢思奇
- 关键词：RNA干扰RNAI
- 甲硝唑对体外蓝氏贾第鞭毛虫形态结构的损伤被引量：5
- 2006年
- 用含甲硝唑500μg/ml(12hLC50)的改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。分别用光镜和电镜观察药物作用后2、4、8及12h虫体的形态变化。光镜观察显示:虫体变圆,从培养管壁脱落,鞭毛摆动迟缓或停止,细胞质出现空泡。电镜观察显示:虫体胀大、变圆、细胞质内核糖体溶解,出现大量空泡;核呈锯齿状异形。证实甲硝唑对体外培养的贾第虫滋养体的形态结构有明显的损伤作用。
- 田喜凤卫茹杨志宏卢思奇
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫甲硝唑
- 体外纯培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体异常形态观察
- 2007年
- 目的观察体外纯培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的异常形态。方法用改良TYI-S-33培养基培养贾第虫,在接种后不同时间取培养管底部虫体涂片,Giemsa’s染色,在显微镜下观察虫体形态并照相。结果除观察到典型的营二分裂法繁殖的贾第虫滋养体外,还可见到多种形态异常的虫体,包括虫体呈非典型二分裂;滋养体胀大,胞质中有团块状和(或)不规则形状的嗜酸性物质;在胀大的贾第虫细胞内含有团块状和(或)不规则形状的嗜酸性物质以及鞭毛;在胀大的贾第虫细胞内含有6或8个核状物以及鞭毛;在一个母体细胞中含有3或4个子体细胞的雏形;胞质互相融合的4个滋养体的雏形;胞质互相融合的3个滋养体;胞质互相融合的4个滋养体;1对营二分裂的滋养体与另一个滋养体互相融合;2对营二分裂的滋养体互相融合;仅有1个细胞核的滋养体。结论在体外纯培养的贾第虫滋养体中发现一些异常形态的虫体,造成这种现象的原因尚不清楚,其发育过程有待进一步研究。
- 方正明卢思奇
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫纯培养
- 蓝氏贾第鞭毛虫的细胞骨架蛋白被引量：2
- 2007年
- 蓝氏贾第鞭毛虫是一种重要的肠道致病性原虫，其致病力与细胞骨架密切相关。贾第虫具有高度发达的细胞骨架系统，包括8根鞭毛、1个腹吸盘、中体和funis等，主要由微管蛋白、肌动蛋白、动力蛋白、贾第素及其相关蛋白组成。该文就贾第虫细胞骨架及相关蛋白的结构和功能作一综述。
- 温少芳卢思奇
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架
- 蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。
- 曹利静冯宪敏魏超君王凤云张西臣卢思奇
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫锤头状核酶丙酮酸激酶
- 蓝氏贾第鞭毛虫滋养体有丝分裂的初步观察被引量：2
- 2010年
- 目的观察体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体有丝分裂。方法用改良的TYI-S-33培养基培养贾第虫。从培养第6h开始,每间隔2h取分裂的细胞直至第24h,制备涂片,Giemsa染液染色,用光镜和透射电镜观察细胞分裂状况。结果有丝分裂前期:染色质凝集形成细长的染色质丝;中期:形成大小约1μm的棒状染色体,且全部排列在细胞核中央,或分散在核内;后期:姐妹染色单体分开,向细胞核两极移动,核膜拉长;末期:核膜中间向内缢束呈葫芦状,细胞核缢裂成两个子核,随即进行胞质分裂。结论蓝氏贾第鞭毛虫滋养体有丝分裂与典型真核细胞相似,但分裂期核膜始终存在,为半开放式分裂。
- 李冀沈海娥张岸平邵薇陆霜玉任兴波卢思奇田喜凤
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫滋养体有丝分裂
- 蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定被引量：3
- 2008年
- 丙酮酸磷酸双激酶(Pyruvatephos phate dikinase,PPDK)可能是蓝氏贾第鞭毛虫能量代谢中具有催化作用的关键酶桩一。为了进一步探讨该酶在贾第虫能量代谢中的作用,本文采用RNA draw软件分析贾第虫编码PPDK的基因序列并设计特异性反义锤头状核酶(Hammerheade ribozyme),克隆该核酶序列并与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建了载有特异性锤头状核酶的贾第虫病毒重组载体pGCV634/H5/2174。该载体经线性化处理后进行体外转录,转录产物以电击方式转染对数生长期的贾第虫滋养体。提取转染后24h虫体总RNA,并以其为模板进行RT-PCR验证转染效果和对靶mRNA的切割效果。结果初步证实了该载体对虫体细胞内编码PPDK的mRNA具有切割作用。
- 曹利静冯宪敏卢思奇张西臣王凤云
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸磷酸双激酶锤头状核酶
- 特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制被引量：2
- 2010年
- 目的应用特异性锤头状核酶技术研究蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase)mRNA的表达抑制。方法用电击转染的方法将含有针对贾第虫丙酮酸激酶mRNA的核酶pGCV-PKH载体导入蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞内(A组),同时设单纯电击转染滋养体(B组)和正常培养滋养体(C组)为对照。转染后24、48、72和96h收集各组虫体,计算滋养体浓度,绘制虫体生长曲线。提取虫体总RNA,分别采用RT-PCR和实时PCR方法检测转染后各组各时间段(24、48、72和96h)核酶mRNA和丙酮酸激酶mRNA相对含量的变化,用紫外分光光度法检测丙酮酸激酶活性。结果虫体生长曲线显示,转染96h,A组虫体的生长受到明显抑制。RT-PCR检测结果表明,A组在转染后24h即可在贾第虫滋养体细胞内检测到核酶RNA,其水平可持续至转染后96h。A组在电击转染后24和48h,丙酮酸激酶mRNA的表达量分别下降至C组的5%(5.00±0.17)和8%(8.00±0.19),相应的酶活性下降至C组的32%(32.00±0.64)和38%(38.00±0.65)。结论特异性锤头状核酶显著抑制了蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达。
- 冯宪敏曹利静王凤云张西臣卢思奇
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶锤头状核酶
