山东省自然科学基金(ZR2010CL015)
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
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- 一步酶消化贴壁筛选法快速分离纯化大鼠精原干细胞
- 2013年
- 为了快速分离、纯化大鼠精原干细胞,试验采用一步酶消化法制备睾丸细胞悬液,用贴壁筛选法富集和纯化大鼠精原干细胞,用添加了胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、可溶性胶质细胞源神经营养因子受体α1(GFRα1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的DMEM/F12无血清培养基和小鼠胚胎成纤维细胞饲养层对纯化的细胞进行了培养。结果表明:培养的细胞具有精原干细胞活性。说明一步酶消化贴壁筛选法能快速分离、纯化大鼠精原干细胞。
- 王庆忠刘慧莲王汉海
- 关键词：精原干细胞纯化
- 生姜醇提取物诱导TM_4细胞凋亡的研究被引量：1
- 2012年
- 生姜醇提取物的应用已引起了广泛的关注,特别是在医药方面得到了人们的高度重视。本研究主要探讨生姜醇提取物对支持细胞系TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUN-NEL法检测5个不同浓度的生姜醇提取物对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的作用。结果表明,生姜醇提取物抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖效应,当用40μM/mL的生姜醇提取物处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TENNEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异。这些结果说明,生姜醇提取物在预防和治疗睾丸癌方面有应用价值。
- 王庆忠
- 关键词：细胞凋亡
- 环磷酰胺处理致小鼠睾丸支持细胞去分化抑制精子发生被引量：2
- 2013年
- 目的研究环磷酰胺对小鼠支持细胞的影响。方法睾丸组织切片的苏木素-伊红(HE)染色观察环磷酰胺对睾丸支持细胞的影响,通过免疫组织化学和细胞化学分析检测支持细胞中CK-18等的表达,通过Western-blot法检测ERK1/2的表达。结果环磷酰胺处理导致小鼠支持细胞凋亡和数量减少,残存的支持细胞去分化,去分化的支持细胞中的ERK1/2-MAPK信号通路被激活。结论环磷酰胺处理活化了ERK1/2-MAPK信号通路并诱导支持细胞去分化。
- 王庆忠王汉海刘慧莲王东方冯道俊刘世武
- 关键词：环磷酰胺支持细胞去分化小鼠
- GDNF对体外培养小鼠精原干细胞增殖的影响
- 2012年
- 为了研究胶质细胞原性神经营养因子(GDNF)对体外培养小鼠精原干细胞增殖与分化的影响,试验采用差速贴壁法分离小鼠精原干细胞(SSCs)和支持细胞(sertoli),以sertoli为饲养层接种精原干细胞,用免疫荧光染色法对精原干细胞进行鉴定,并将精原干细胞分为2组,试验组培养基中加入GDNF,对照组不加,测定精原干细胞的生长增殖情况,检测精原干细胞生长周期。结果表明:共培养6,9,12,15天时,试验组精原干细胞吸光度值明显高于对照组(P<0.05或0.01)。随着共培养时间的延长,试验组精原干细胞S期染色质含量逐渐增多,然后又逐渐下降,开始另一个分裂周期;与试验组比较,对照组精原干细胞S期染色质含量增长缓慢(P<0.05)。说明GDNF能促进体外分离培养的小鼠精原干细胞的更新增殖。
- 刘慧莲王庆忠
- 关键词：精原干细胞小鼠
- 大鼠精原干细胞的筛选与培养被引量：3
- 2012年
- 目的:建立大鼠精原干细胞的筛选和培养的方法体系。方法:采用改良的二步酶消化法分离大鼠睾丸细胞,用改进的差异贴壁分选法筛选大鼠精原干细胞,用添加了胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、可溶性GFRα1和bFGF的DMEM/F12无血清培养基和大鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养高度富集的大鼠精原干细胞,通过形态观察、标志基因的RT-PCR检测和免疫细胞化学分析鉴定培养细胞的干细胞活性。结果:我们的改良二步酶消化法和差异贴壁分选法能有效的分离和筛选大鼠精原干细胞,这些高度富集的精原干细胞能够存活20 d以上,形成较大的干细胞克隆,并表达精原干细胞的标志基因和具有干细胞活性。结论:成功建立了大鼠精原干细胞的分离、筛选和培养体系。
- 王庆忠王东方刘慧莲冯道俊
- 关键词：精原干细胞分离纯化无血清培养
- 枸杞多糖对小鼠精原干细胞增殖作用的影响被引量：5
- 2012年
- [目的]观察枸杞多糖(LBP)对体外培养的小鼠精原干细胞的增殖作用。[方法]选2～5日龄的ICR小鼠,采用多次贴壁法纯化精原干细胞培养3 d,加入不同浓度的LBP,利用MTT比色分析法和Brdu增殖细胞标记法,检测不同浓度LBP对体外培养精原干细胞增殖的影响。[结果]与对照相比,用LBP处理后的精原干细胞的细胞数量明显增多,高浓度的LBP(200μg/ml)对精原干细胞的增殖有明显的促进作用(P<0.01)。[结论]LBP能够促进精原干细胞的增殖。
- 刘慧莲
- 关键词：枸杞多糖精原干细胞小鼠
- 姜黄素对小鼠睾丸细胞株TM_4细胞的影响
- 2012年
- 主要探讨姜黄素(Curcumin,CCM)对支持细胞株TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测了5种不同浓度的姜黄素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的影响。结果表明,姜黄素抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖效应,当用40μmol/mL的姜黄素处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TUNNEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异。说明姜黄素在预防和治疗睾丸癌方面有一定的应用价值。
- 王庆忠
- 虫草素对小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞增殖的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨虫草素对支持细胞系TM4体外增殖的影响。方法采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测5个不同浓度的虫草素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的作用。结果虫草素抑制TM4细胞的增殖,诱导其细胞凋亡,并呈现出剂量依赖效应。当用10 mg/L以上的虫草素处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TEN-NEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异。结论虫草素在预防和治疗睾丸癌方面有应用价值。
- 王庆忠王东方刘慧莲冯道俊王汉海郭祖宝
- 关键词：虫草素
- 恒河猴精原干细胞的筛选、培养与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:建立恒河猴精原干细胞的筛选和培养方法。方法:采用改良的二步酶消化法分离恒河猴睾丸细胞,用改进的差异贴壁筛选法纯化恒河猴精原干细胞,用添加了胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、可溶性GFRα1和bFGF的DMEM/F12无血清培养基和小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养恒河猴精原干细胞,并通过形态观察、标志基因的免疫细胞化学分析和半定量RT-PCR分析鉴定培养细胞的干细胞活性。结果:分离纯化的恒河猴精原干细胞在添加了3种生长因子的培养基中能形成较大的干细胞克隆,并表达精原干细胞的标志基因。结论:本研究初步建立了恒河猴精原干细胞的培养体系,为进一步开展相关研究奠定基础。
- 王庆忠刘慧莲王汉海
- 关键词：精原干细胞恒河猴
- 生精冲剂对白消安致生精障碍大鼠恢复精子发生及其机理的研究被引量：1
- 2013年
- 为研究生精冲剂对精子发生的作用,我们随机将30只雄性SD大鼠分为正常组、药物组和对照组。后2组通过腹腔注射白消安制备成生精障碍模型大鼠。药物组每天灌胃生精冲剂,对照组灌胃等量的生理盐水。连续30 d后,测定血清FSH、LH、T水平和睾丸组织切片观察的结果显示,药物组大鼠血清中3种激素的水平与对照组相比差异显著(P<0.05),并可在睾丸组织切片的曲细精管中,观察到大量的精原细胞和圆形精子细胞,而对照组中只有少量的精原细胞,半定量RT-PCR分析结果表明,生精冲剂促进了GDNF表达。因此,生精冲剂对精子发生有明显的促进作用。
- 王庆忠王东方刘慧莲冯道俊王汉海郭祖宝
- 关键词：生精冲剂生精障碍大鼠模型男性不育GDNF
