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插入BC株V蛋白的重组新城疫病毒(LaSota株)毒力鉴定及对先天性免疫的影响: 2021年; 为探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的V蛋白拮抗宿主干扰素(interferon,IFN)信号通路对先天性免疫的影响,本试验测定了低毒力LaSota株插入BC株V蛋白的重组病毒rL-BC的毒力和感染后4,8,12h的感染效率,病毒感染后上清的IFN-β生成情况和P-STAT1、MDA5蛋白的表达水平,并检测感染后DF1、A549细胞先天性免疫分子的转录水平。结果显示,重组病毒的颅内致病指数(intracerebral pathogenicity index,ICPI)升高,不同时间的感染效率均高于亲本毒。此外,V蛋白的插入使上清中IFN-β生成量降低,P-STAT1和MDA5蛋白的表达水平下降,LGP2、TLR3等多种模式识别受体及ISG15、IFN-α等IFN通路相关分子的转录水平下降。以上均表明NDV的V蛋白通过抑制先天性免疫反应从而提高病毒毒力。; 于桐南福龙王政于成东孟媛李亭玉蔡锦顺蔡锦顺金宁一; 关键词：先天性免疫

犬圆环病毒及犬细小病毒双重PCR检测方法的建立被引量：6: 2017年; 为建立能同时检测犬圆环病毒(CanineCV)和犬细小病毒(CPV)的方法,根据CanineCV和CPV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增CanineCV和CPV的片段大小分别为984和668 bp。并将反应条件进行优化,建立了CanineCV和CPV的双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增CanineCV和CPV的目的条带,且未扩增出其他犬胃肠道病原;CanineCV和CPV的最低检出限分别为85.7和312 copies/L。对采集自广西地区的223份临床样品的检测结果显示,CanineCV的阳性率为2.24%(5/223)、CPV的阳性率为5.38%(12/223),后者与常规PCR检测方法相一致。结果表明,建立的双重PCR方法可以用于CanineCV和CPV的检测和流行病学调查。; 曹亮孙文超鲁会军田明尧刘云霞谢长占赵冠宇韩继成肖鹏鹏张金勇钱爱东金宁一; 关键词：犬细小病毒双重PCR

应用SOE PCR方法构建新城疫病毒基因起始片段的研究被引量：1: 2017年; 目的以猪源新城疫病毒JL02/2000株为模板,构建新城疫病毒反向遗传研究所需的基因起始片段。方法将NDV起始片段(ND1,226-4 916bp)设计拆分为ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4的4个约1.2kb的小片段,分别PCR扩增各片段,后采用SOE PCR技术将ND1-1、ND1-2拼接成中间片段ND1-1-2,将ND1-3、ND1-4拼接为ND1-3-4,再经第二次SOE-PCR整合拼接ND1-1-2和ND1-3-4片段,完成NDV起始片段ND1的构建,并连接到pCI载体上,构建pCIND1质粒,最后经酶切PCI-ND1质粒并送测序鉴定目的片段是否构建正确并成功连接到pCI载体上。结果经PCR扩增得到ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4共4个分别约1 200bp大小的片段,经第一轮SOE-PCR得到ND1-1-2和ND1-3-4两个2 200bp左右的片段,第二轮SOE-PCR得到4 900bp左右的ND1片段。连接产物PCI-ND1质粒经酶切和测序鉴定片段大小和序列与预期相符。结论成功构建了新城疫病毒基因起始片段(226-4 916bp),为构建新城疫病毒全长基因奠定了基础。; 南福龙陈兴张赫解长占崔卓栋张萍张金勇庄忻宇鲁会军金宁一; 关键词：新城疫病毒 PCR 基因克隆

新城疫病毒V蛋白研究进展: 2013年; 近年来,新城疫病毒(NDV)的感染及致病宿主范围呈现不断扩大的趋势。新城疫病毒V蛋白在病毒抑制干扰素信号转导、防止细胞凋亡的发生、改变宿主细胞周期、阻断双链RNA信号转导和抑制干扰素的生物合成等各种宿主逃逸机制中起着重要作用,并在病毒的致病性和宿主嗜性等方面也发挥了重要作用。基于对新城疫病毒V蛋白研究的深入,论文对新城疫病毒V蛋白的分子特性及其功能性研究做一简要概述。; 阎富龙鲁会军金宁一赵权; 关键词：新城疫病毒

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救: 2018年; 应用反向遗传技术对新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）LaSota株感染性克隆PBRN—FL质粒进行操作，构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定。依据GenBank所发表的欧洲型PRRSVLV株ORF5序列，设计引物扩增0RF5片段，通过PBRN—FL质粒上P和M基因间的PmeI酶切住点插入目的片段，构建重组质粒LaSota—ORF5。采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI—NP、PCI-P、PCI—L等3种辅助质粒共转染BSR—T7／5／细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光（IFA）和Western blot（WB）试验鉴定。结果显示：拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确，IFA出现绿色荧光，WB试验条带大小符合预期，证明GP5蛋白有效表达。结果表明：成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5，为制备表达PRRSVGP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础。; 张赫南福龙鲁会军解长占张萍张金勇庄忻雨田明尧步志高金宁一; 关键词：新城疫病毒 LASOTA GP5蛋白病毒拯救

新城疫病毒NP和P基因辅助质粒的构建及鉴定被引量：6: 2014年; 目的构建新城疫病毒JL02/2000株P和NP基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。方法根据新城疫病毒(JL02/2000毒株)的全基因组中的NP、P基因分别设计引物,应用RT-PCR方法扩增NP基因和P基因,将扩增的NP基因和P基因片段连接到pMD18-T载体上,限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ酶切鉴定确认后回收目的条带,分别插入到真核表达载体pCI上,经测序确认pCI-NP、pCI-P辅助质粒的构建。将pCI-NP、pCI-P转染BHK-21细胞,两次换液,72h后回收细胞,经RT-PCR检测NP和P基因片段。结果构建的辅助质粒pCI-NP和pCI-P经双酶切和测序鉴定到目的片段。pCI-NP、pCI-P转染后,RT-PCR检测到NP和P基因片段。结论新城疫病毒pCI-NP、pCI-P辅助质粒构建成功,pCI-NP、pCI-P可在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。; 陈兴阎富龙徐一鸣赵权肖朋朋郭海宁靖杰辛舒鲁会军金宁一; 关键词：新城疫病毒 NP基因 P基因

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