国家自然科学基金(30670290)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 相关作者：宋昭彬张修月章海滨袁慧岳碧松更多>>
- 相关机构：四川大学教育部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 岩原鲤HSC70基因的克隆、序列分析及其组织表达研究被引量：6
- 2013年
- 采用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)技术从岩原鲤Procypris rabaudi脑组织中克隆出长1043bp的组成型热休克蛋白HSC70(heat shock cognate70)基因的cDNA(complementary deoxyribonucleic acid)部分片段,其编码的347个氨基酸包含HSP70家族签名序列(IVLVGGSTRIPKIQK),核定位信号标签(KRKH-KKDISDNKRAVRR)及2个糖基化位点(NKSI/NVSA)。采用相同引物从岩原鲤基因组DNA中扩增出长1418bp的HSC70基因片段,比对分析显示其含有3个分别长200bp、98bp和77bp的内含子。氨基酸序列同源性分析显示,HSC70基因氨基酸序列具有高度保守性,岩原鲤HSC70基因氨基酸序列与草鱼Ctenopharyngodon idellus的同源性达到了100%,与其他脊椎动物的同源性为95.68%～99.71%。FQ-PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR)方法检测显示,岩原鲤HSC70基因存在明显的组织表达差异,在脑中相对表达量最高,其次为卵巢、心、肌肉和肾,在肝中相对表达量最少。
- 章海滨张修月宋昭彬
- 关键词：克隆基因表达岩原鲤
- 岩原鲤微卫星富集文库的构建及微卫星分子标记的筛选被引量：9
- 2008年
- 用磁珠富集法构建了岩原鲤Procypris rabaudi AC重复和GATA重复的微卫星富集文库。采用PCR方法分别以人工合成的oligoA和探针(AC)12或(GATA)6为引物筛选含有微卫星的阳性克隆。(AC)n富集库和(GA-TA)n富集库的阳性克隆率分别为30%和7%左右。对40个AC重复的阳性克隆和30个GATA重复的阳性克隆测序,共获得61个微卫星序列,其中包含了一个三碱基重复(TGA)的微卫星序列。选择设计了19对AC重复和16对GATA重复的微卫星引物以及1对TGA重复的微卫星引物,通过PCR优化,共有20对引物能够产生稳定、清晰的目的产物带。为了检测获得的岩原鲤微卫星座位是否能用于近缘物种的研究,我们将20对岩原鲤微卫星引物用于中华倒刺鲃Spinibarbus sinensis基因组DNAPCR扩增,有60%的引物对能产生特异性的目的条带。本研究获得的20个岩原鲤微卫星座位可以用于岩原鲤及近缘物种的遗传多样性、种群遗传结构等的进一步研究。
- 袁慧张修月宋昭彬岳碧松
- 关键词：岩原鲤富集文库微卫星
- 岩原鲤促性腺激素基因的克隆和组织表达差异被引量：1
- 2013年
- 通过RT-PCR技术从岩原鲤(Procypris rabaudi)卵巢组织中克隆了促性腺激素GtHα、FSHβ、LHβ3个亚基的mRNA序列。GtHα亚基开放阅读框长357 bp,编码118个氨基酸残基,第1～23个氨基酸为信号肽。FSHβ亚基开放阅读框长393 bp,编码130个氨基酸残基,第1～22个氨基酸为信号肽。LHβ亚基开放阅读框长444 bp,编码147个氨基酸残基,第1～28个氨基酸为信号肽。氨基酸序列比对结果表明,GtHα亚基在近缘物种间比较保守,其氨基酸序列的相似性要高于FSHβ和LHβ亚基。通过Real-time fluorescent quantitative PCR(FQ-PCR)分析发现,GtHα亚基在检测的6种组织中均有表达,卵巢中的表达量极高,肝、脑、心、垂体和肌肉中表达量依次降低;FSHβ亚基在除肌肉外的其余5种组织中均有表达,卵巢中的表达量最高,脑和心中表达量次之,肝和垂体的表达量明显偏低;LHβ亚基只在卵巢和垂体中表达,卵巢中的表达量要明显高于垂体。
- 章海滨王爽张修月宋昭彬
- 关键词：CDNA克隆基因表达岩原鲤
