目的应用膜片钳技术检测药物对人类ether-a-go-go相关基因(human ether-a-go-go-related gene,HERG)编码的钾离子通道的作用。探讨离子电流记录过程及实验要点。方法选择稳定转染并表达人源心肌HERG离子通道的HEK293细胞,通过全细胞记录方式,记录HERG电流。结果成功记录到HERG步阶电流和尾电流,步阶电流的Ⅰ-Ⅴ曲线表现为特征性的倒钟形结构,尾电流在去极化时迅速上升,在+10 m V时接近峰值。阳性药物E-4031能明显阻断HERG电流。检测的化合物A对HERG电流具有抑制效应,半数抑制浓度IC50为109μmol/L。结论体外HERG实验可直接检测药物对HERG电流的抑制作用,膜片钳的正确操作及电流记录是实验成败的关键因素。
目的通过观察多柔比星的斑马鱼胚胎心脏毒性表现,为其作为心脏毒性评价模型提供可靠的检测指标。方法选择发育正常的6hpf(hours post fertilization)斑马鱼胚胎暴露于多柔比星2.16～34.48μmol·L-148h。显微镜观察72hpf斑马鱼心血管系统的形态学改变。通过DVC摄像系统测定心率;测量静脉窦-动脉球(SV-BA)间距,HE染色观察斑马鱼心肌结构。结果多柔比星2.16μmol·L-1组斑马鱼心血管系统形态无改变,但心率下降,为(166±5)min-1;SV-BA间距增加,为(237±13)μm。多柔比星4.31μmol·L-1可引起斑马鱼出现心包水肿,心脏畸形,心率减低,为(166±5)min-1;SV-BA间距增加,为(268±13)μm。随着多柔比星浓度增加,斑马鱼出现体长缩短、体节发育异常、脊柱弯曲、卵黄囊水肿、出血、心脏缩小等多种表型改变。心脏组织切片显示,多柔比星8.62μmol·L-1可引起斑马鱼心包腔变大、心脏缩小、心肌层变薄和心肌细胞减少。结论多柔比星对斑马鱼胚胎心脏毒性作用的表现与对哺乳动物的毒性作用表现相同,有望成为评价药物心脏发育毒性的模型。
