国家自然科学基金(30200315)
- 作品数：21 被引量：26H指数：3
- 相关作者：何文喜高杰牛忠英赵守亮李萍更多>>
- 相关机构：第四军医大学解放军第306医院中国人民解放军第三〇六医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 同源异型盒基因msx1 cDNA表达型质粒的构建及其表达
- 2005年
- 目的:克隆小鼠同源异型盒基因msx1cDNA,构建msx1真核表达载体,并在细胞内瞬时表达。方法:应用PCR克隆技术,克隆小鼠msx1全编码序列;利用基因重组技术,将msx1全编码cDNA序列导入pEGFP-N1绿色荧光蛋白表达型质粒。将构建好的表达型质粒转染入MDPC-23细胞内瞬时表达。结果:成功克隆Balb/c胎鼠msx1全编码cDNA序列,并将其成功地导入pEGFP-N1表达型质粒;经测序分析,msx1全编码序列与GenBank中的相应序列一致;所构建质粒在MDPC-23细胞内成功表达,BMP2刺激后MSX1的表达部位由胞浆转至胞核。结论:成功克隆小鼠msx1cDNA序列,所构建的msx1-pEGFP-N1质粒在成牙本质细胞内成功表达MSX1。
- 李萍吴补领何文喜高杰
- 关键词：MSX1克隆聚合酶链式反应成牙本质细胞瞬时转染
- 成牙本质细胞系MDPC-23的生物学特性
- 2004年
- 目的 :观察成牙本质细胞系MDPC - 2 3的生物学特性。方法 :细胞培养 ,细胞计数和逆转录多聚酶链反应。结果 :MDPC - 2 3为上皮样细胞形态 ,有多个细胞膜突起 ,易形成细胞结节 ,细胞倍增时间少于 2 4h。在mRNA水平证实MDPC - 2 3表达Ⅰ型原胶原a2、碱性磷酸酶和牙本质涎磷蛋白。结论 :MDPC - 2
- 何文喜牛忠英赵守亮臧晓霞高杰
- 关键词：成牙本质细胞生物学特性碱性磷酸酶细胞培养
- Smad7在成牙本质细胞系MDPC-23内转化生长因子β信号转导中的作用被引量：1
- 2005年
- 目的研究Smad7在成牙本质细胞系MDPC23内转化生长因子(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ)信号转导的作用。方法培养MDPC23细胞,免疫组化法观察TGFβ1对MDPC23细胞内Smad7分子定位改变。通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad7分子对TGFβ1调控目的基因转录的影响。结果MDPC23细胞表达Smad7蛋白,主要定位于细胞胞浆,在转化生长因子β1刺激30min后,Smad7从胞核向胞浆转位聚集。TGFβ1显著诱导p3TP Lux基础启动子活性。过表达Smad7完全抑制TGFβ1对p3TP Lux启动子活性的诱导,而过表达Smad7反义cDNA载体则显著促进了TGFβ1对p3TP Lux启动子活性的诱导。结论在成牙本质细胞系MDPC23内,Smad7可能作为一种抑制性Smad分子在拮抗TGFβ1信号转导过程中发挥重要的作用。
- 何文喜牛忠英赵守亮高杰李萍
- 关键词：SMAD7转化生长因子Β1信号转导
- 小鼠牙本质涎磷蛋白5′端非编码区启动子报告基因载体的构建和分析被引量：2
- 2005年
- 目的:克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)基因启动子,构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体,在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性。方法:PCR、报告基因载体构建、瞬时转染和报告基因检测。结果:PCR获得DSPP启动子的 3个不同片段,将它们克隆到萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3 -Enhancer,构建出 3种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体,将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞,载体中的启动子具有不同的活性。结论:成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体,为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。
- 高杰吴补领何文喜李萍郭婷李霞
- 关键词：牙本质涎磷蛋白启动子报告基因
- TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响被引量：2
- 2003年
- 目的 :研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)对成牙本质细胞系MDPC - 2 3增殖和细胞周期的影响。方法 :细胞培养 ,MTT比色测定法和流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)分析技术。结果 :TGF - β1能明显抑制MDPC - 2 3细胞增殖 ,无剂量依赖性 ,但呈时间依赖性 ;FCM结果显示 ,TGF - β1作用后 ,MDPC - 2 3细胞G1%升高 ,而S %显著降低 ,反映细胞增殖活性的增殖指数PrI值 (S +G2 M) %增高。结论 :TGF - β1抑制成牙本质细胞系MDPC - 2
- 何文喜牛忠英赵守亮张进高杰
- 关键词：TGF-Β1细胞增殖细胞周期转化生长因子Β1
- Smad在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用
- 2005年
- 目的:研究Smad蛋白在牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)基因表达中的作用。方法:细 胞培养,瞬时转染和报告基因检测。结果:转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)抑制DSPP 基因启动子活性。过表达野生型Smad3蛋白显著增强了TGF-β1对DSPP基因表达的转录抑制,而过表达Smad3 突变型蛋白则显著抑制了TGF-β1对DSPP基因启动子活性的影响。过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF -β1抑制DSPP基因启动子活性无明显影响。结论:Smad3在介导TGF-b1对DSPP基因的转录调控中发挥重要 的作用。
- 何文喜牛忠英赵守亮金卫林高杰李萍
- 关键词：牙本质涎磷蛋白基因表达
- Smad7反义寡核苷酸对TGF-β1调控人牙髓细胞生长和分化的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 :观察Smad7反义寡核苷酸对转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor -β ,TGF -β1)调控人牙髓细胞生长和分化的影响。方法 :细胞培养 ,细胞转染 ,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :Smad7反义寡核苷酸促进TGF -β1对人牙髓细胞增殖的诱导作用和对碱性磷酸酶活性的抑制作用。 结论 :Smad7参与介导TGF -β1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的调控 ,提示TGF
- 高杰何文喜吴补领李萍
- 关键词：SMAD7牙髓细胞碱性磷酸酶
- 小鼠牙本质涎磷蛋白启动子报告基因载体的构建和启动子活性分析被引量：7
- 2004年
- 目的 :克隆小鼠牙本质涎磷蛋白 ( dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因启动子 ,构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体 ,在小鼠成牙本质细胞系 MDPC-2 3中分析各种载体中 DSPP启动子活性。方法 :细胞基因组提取 ,PCR、瞬时转染和报告基因检测。结果 :从 MDPC-2 3细胞基因组中克隆出长为1 .5 kbp的 DSPP启动子 ,将启动子酶切成不同的片断 ,克隆到虫荧光素酶报告基因载体 p GL3 -Enhancer,构建出 4种含 DSPP启动子不同片段的报告基因载体 ,将这些报告基因载体瞬时转染至 MDPC-2 3细胞 ,载体中的启动子具有不同的活性。结论 :成功构建了含小鼠 DSPP启动子片段的报告基因载体 ,为以后研究 DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。
- 何文喜牛忠英赵守亮金卫林高杰赵书芳
- 关键词：牙本质涎磷蛋白启动子基因组报告基因
- 转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用被引量：2
- 2006年
- 目的研究成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因转录调控中的作用,探索成牙本质细胞内DSPP基因表达的调控机制。方法细胞免疫组化观察MDPC-23细胞内c-Jun和c-Fos蛋白分子的表达。瞬时转染和报告基因检测c-Jun和c-Fos在DSPP基因转录中的作用。结果MDPC-23细胞表达c-Jun和c-Fos蛋白,c-Jun和c-Fos主要分布在MDPC-23细胞胞核。c-Jun或c-Fos过表达均显著抑制DSPP基因启动子活性。结论证实成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos参与下调DSPP基因表达。
- 何文喜牛忠英赵守亮李萍高杰
- 关键词：牙本质涎磷蛋白C-JUNC-FOS基因转录
- TGF-β1/Smad3信号途径对牙本质涎磷蛋白基因表达的调控被引量：3
- 2008年
- 目的:研究小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中TGF-β1及其信号分子Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因表达中的调控作用。方法:PCR法制备DSPP引物、构建带有DSPP启动子片段的萤火虫荧光素酶基因报告载体,通过瞬时转染入MDPC-23细胞后,检测报告基因活性。结果:在TGF-β1的作用下,Smad3可以发生转位表达,由细胞浆转入细胞核内。同时,过表达野生型Smad3可以显著增强TGF-β1对DSPP启动子活性的下调作用。结论:TGF-β1可以通过Smad3信号通路对DSPP启动子进行调控;在DSPP启动子-2525^+54bp之间,存在TGF-β1/Smad3信号途径的结合位点,从而发挥对DSPP基因的调控作用。
- 高杰吴补领何文喜余擎李萍
- 关键词：牙本质涎磷蛋白报告基因SMAD3TGF-Β1
