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中国博士后科学基金(200801353)
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抑癌基因p14^ARF表达上调对慢性髓性白血病细胞凋亡的影响
2013年
目的探讨上调抑癌基因p14^ARF表达对慢性髓性白血病(CML)细胞凋亡的影响以及其对伊马替尼增敏的作用。方法应用水泡性口膜炎病毒外壳糖蛋白假构型(VSV—Gpseudotyped)慢病毒载体基因转导系统,将抑癌基因p14^ARF导入CML细胞系K562及4例CML急变期患者原代白血病细胞(分别称为CML—BCl~4),同时以转染空载体的细胞作为对照组。用荧光显微镜及流式细胞术检测转导效率,Western blot法检测K562细胞p14^ARF蛋白表达;用WST一8法检测细胞增殖抑制率及转染目的基因的K562细胞在不同浓度倍比稀释的伊马替尼(0、0.015、0.062、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0μmol/L)处理后细胞增殖抑制情况;用FITC标记的膜联蛋白V/碘化丙锭(AnnexinV-FITC/PI)标记流式细胞术检测细胞凋亡;半固体培养法检测白血病细胞集落形成能力。结果荧光显微镜及流式细胞术检测GFP阳性细胞率显示,转染目的基因及空载体的K562细胞及CML-BCl细胞转染效率接近100%,而CML—BC2—4细胞转导效率为80%~90%;Western blot分析结果显示,转导p14^ARF的K562细胞(K562-p14^ARF)ARF蛋白表达较未转导细胞明显提高;K562-p14^ARF细胞凋亡率为20%;转导p14^ARF后的4例CML患者原代白血病细胞凋亡率为(71.1±22.4)%,与对照组的(12.4±6.2)%相比差异有统计学意义(P〈0.05)。伊马替尼对K562-p14^ARF细胞增殖有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性。转导p14^ARF后的4例CML患者原代白血病细胞集落形成数为41.5±13.2,与对照组(88.5±7.9)相比差异有统计学意义(P〈0.05)。结论人为上调p14^ARF基因表达可诱导CML细胞凋亡,与伊马替尼联合应用可进一步加强对细胞增殖的抑制作用。
白元松
刘静
刘晓会
代恩勇
孙步彤
卢振霞
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白血病
慢性
髓性
P14^ARF
慢病毒载体
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