湖北省自然科学基金(2003ABA150)
- 作品数：10 被引量：24H指数：3
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- 脂质体介导外源基因体外转染兔角膜内皮细胞条件的优化被引量：3
- 2008年
- 目的：观察阳离子脂质体LipofectamineTM 2000是否能介导目的基因转移至兔角膜内皮细胞,并优化转染条件。方法：体外培养兔眼角膜内皮细胞,以绿色荧光蛋白（GFP）为报告基因,通过体外细胞转染实验,用不同的细胞融合度、脂质体浓度、脂质体与质粒的比例、转染时间优化转染条件,荧光显微镜观察目的基因的表达。结果：角膜内皮细胞内可见脂质体介导的绿色荧光蛋白表达,LipofectamineTM在细胞融合度为80%～90%,脂质体/DNA为3L/g,脂质体的量为1.8μL,转染时间为5h时,转染效率最高。结论：阳离子脂质体可有效介导目的基因转移至角膜内皮细胞内,GFP可作为报告基因优化脂质体转染条件。
- 毛晓春李贵刚张虹
- 关键词：角膜内皮细胞脂质体基因转染
- 脂质体介导兔角膜内皮细胞基因转染的观察被引量：2
- 2007年
- 目的观察阳离子脂质体Lipofectamine2000能否介导目的基因转移至兔角膜内皮细胞内及脂质体潜在的毒副作用。方法RT-PCR检测特异性胶原Ⅷ进行细胞鉴定,通过体外细胞转染实验优化阳离子脂质体与质粒DNA的浓度和比例,选择Lipo-fectamineTM2000/pEGFP-N1比值3∶1,脂质体体积分别为0μL、6μL、9μL、12μL转染兔角膜内皮细胞,荧光显微镜观察目的基因的表达,透射电镜观察细胞超微结构。结果RT-PCR扩增得到单一产物,与预期的扩增序列大小完全一致,角膜内皮细胞内可见脂质体介导的绿色荧光蛋白表达,LipofectamineTM2000浓度能显著影响其对兔角膜内皮细胞的转染效率,存在最佳浓度,在35mm培养皿中,3μgDNA与9μL脂质体转染效率最高,透射电镜显示12μL脂质体可导致细胞器出现肿胀、崩解现象。结论阳离子脂质体可有效介导目的基因转移至角膜内皮细胞内,在35mm培养皿中,12μL脂质体对角膜内皮细胞有一定的毒副作用。
- 毛晓春张虹李贵刚
- 关键词：角膜内皮细胞脂质体转染
- 水溶性氮酮对人眼小梁细胞增殖活性和超微结构的影响(英文)被引量：2
- 2006年
- 目的观察水溶性氮酮对体外培养的人眼小梁细胞增殖活性和超微结构的影响，寻找氮酮作用于眼部的安全浓度。方法进行人眼小梁细胞的体外培养，MTT法观察不同浓度氮酮作用不同时间后，对小梁细胞增殖的影响；倒置相差显微镜和透射电镜下观察氮酮对小梁细胞形态和超微结构的影响；荧光染色法观察氮酮对小梁细胞活性的影响。结果10^-5～10^-Rg／L的氮酮作用24h不影响小梁细胞的增殖和活性，10^-4g／L的氮酮作用12h不影响小梁细胞的增殖。10^-6-10^-8g／L氮酮作用24h，10^-5g／L氮酮作用12h对人小梁细胞形态和超微结构无影响。荧光染色法显示10^-3g/L和10^-4g/L氮酮作用6h后的细胞呈不同程度变性、坏死。结论10^-6～10^-Rg/L浓度的氮酮不会影响小梁细胞的超微结构、增殖和活性，氮酮有望在眼科广泛应用。
- ZHANG Hong CHENG Zheng LI Gui-gang LI Bin ZHANG Jin-ling
- 关键词：增殖活性
- 水溶性氮酮对人眼小梁细胞增殖活性与形态结构的影响被引量：5
- 2006年
- 目的观察经皮渗透促进剂氮酮对体外培养的人眼小梁细胞增殖活性和超微结构的影响，寻找氮酮作用于眼部的安全浓度。方法进行人眼小梁细胞的体外培养，四氮唑盐（MTT）法观察不同浓度氮酮作用不同时间对小梁细胞增殖的影响；倒置相差显微镜和透射电镜下观察氮酮对小梁细胞形态和超微结构的影响；荧光染色法观察氮酮对小梁细胞活性的影响。结果10^-8～10^-5g·L^-1氮酮作用24h不影响小梁细胞的增殖。10^-8～10^-6g·L^-1氮酮对小梁细胞形态和超微结构无影响。荧光染色法显示氮酮作用后的细胞呈不同程度变性坏死。结论10^-8～10^-6g·L^-1氮酮不会影响小梁细胞的形态结构和增殖活性，低浓度氮酮在理论上对小梁细胞是安全的。
- 张虹程铮李贵刚李斌张金玲
- 关键词：氮酮小梁细胞增殖超微结构
- 压力对人眼小梁细胞自分泌TGF-β_2的影响
- 2006年
- 目的 采用开放式压力控制培养系统研究压力对体外培养的人眼小粱细胞自分泌转化生长因子-β2（TGF-β2）的影响，探讨TGF-β2在原发开角型青光眼发病机制中的作用。方法 体外培养人眼小梁细胞并传至第5代。对照组不施加压力（0mmHg，1mmHg=0．133kPa），实验组施加20、40、60及80mmHg压力，分别持续0、12、24、36h。采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞上清液中TGF-β2浓度。结果 小梁细胞自分泌TGF-β2随压力增高而增加，与对照组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；在20～60mmHg范围内，加压时间越长，TGF-β2增高越明显；虽然80mmHg压力水平下TGF-β2增高幅度下降，但加压12和24h组TGF-β2水平仍明显高于对照组（P〈0．05）。结论随压力增高，小梁细胞自分泌TGF-β2增多，其水平与压力大小及作用时问相关，推测TGP-β2分泌异常可能是原发开角型青光眼病理进程中的重要机制之一。
- 张虹陈莲一李贵刚单长梅
- 关键词：转化生长因子-Β2青光眼小梁细胞
- 水溶性氮酮对体外培养兔角膜内皮细胞活性与超微结构的影响被引量：3
- 2006年
- 目的研究水溶性氮酮对体外培养的兔角膜内皮细胞活性与超微结构的影响,确定水溶性氮酮应用于眼部的安全浓度。方法采用消化法培养兔角膜内皮细胞,取第3或第4代细胞以1×104个.L-1的浓度接种,共分8组,其中一组设为对照组,不给予水溶性氮酮,其他7组细胞中水溶性氮酮浓度分别为0.001,0.005,0.010,0.050,0.100,0.500,1.000 g.L-1,24 h后采用MTT法测定细胞活性。另取上述培养的细胞,按1×104个.L-1的浓度接种到载玻片上,分别加入浓度为0.010,0.100,0.500 g.L-1的水溶性氮酮作用10 m in,观察细胞膜超微结构变化。另采用相同浓度的水溶性氮酮作用于体外培养的兔角膜内皮细胞10 m in,观察细胞膜超微结构的变化。结果与对照组比较,浓度≤0.100 g.L-1的水溶性氮酮作用24 h后对兔角膜内皮细胞的活性没有明显影响,浓度≥0.500 g.L-1的水溶性氮酮作用24 h可以引起兔角膜内皮细胞活性下降(P<0.01);经浓度≤0.100 g.L-1水溶性氮酮作用10 m in,兔角膜内皮细胞细胞膜有裂隙形成,但细胞器等结构无明显损害,浓度≥0.500 g.L-1水溶性氮酮可导致兔角膜内皮细胞凋亡。结论浓度<0.100 g.L-1水溶性氮酮可增加角膜内皮细胞对药物的通透性,并有望用于角膜内皮细胞基因转染研究。
- 张虹李贵刚谢二娟胡维琨张金玲程铮
- 关键词：氮酮角膜内皮细胞超微结构
- 开放式压力控制培养系统对人眼小梁细胞超微结构及纤维连接蛋白合成的影响被引量：1
- 2007年
- 目的采用开放式压力控制培养系统,研究压力对人眼小梁细胞(HTMCs)超微结构及纤维连接蛋白(FN)合成的影响。方法组织块法体外培养HTMCs,选取第5代细胞分为实验组和对照组。对照组不施加压力,实验组采用开放式压力控制培养系统分别施加20、40、608、0 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)的压力,压力作用时间分别为12、24、36 h。在光学显微镜、透射电镜下观察HTMCs形态及超微结构的变化。采用免疫组化方法和图像分析法检测FN的表达变化。结果透射电镜显示:20 mmHg压力作用12、24、36 h后与对照组比较,HTMCs超微结构未见明显改变;40mmHg压力作用12、24、36 h后HTMCs胞质内出现大小不等的空泡;60、80 mmHg压力作用12、24、36 h后,HTMCs出现线粒体嵴变得短而少或者丧失、溶酶体髓样结构增多等不可逆性改变。免疫组化结果显示体外培养的HTMCs均阳性表达FN;图像分析显示:20 mmHg压力作用12、24、36 h后HTMCs合成FN与对照组比较差异均无显著性意义(均P>0.05);40 mmHg压力作用12、24、36 h后HTMCs合成FN明显增加,差异均有显著性意义(均P<0.01);而60、80 mmHg压力作用12、243、6 h后HTMCs合成FN则逐渐下降(均P<0.01),但与对照组比较仍有不同程度增高(均P<0.01)。结论环境压力升高可以引起小梁细胞形态、超微结构以及FN的表达发生变化,从而可能在原发性开角型青光眼的发生和发展过程中发挥重要作用。
- 张虹单长梅李贵刚陈莲一
- 关键词：纤维连接蛋白小梁细胞
- 氮酮促进脂质体介导质粒DNA转染兔角膜内皮细胞及毒性的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨氮酮(AZONE)促进脂质体介导质粒DNA转染兔角膜内皮细胞的作用及其对细胞活性的影响。方法采用细胞培养方法,利用绿色荧光蛋白基因做报告基因,配制不同转染液,脂质体联合pEGFP-N1、氮酮联合脂质体及pEGFP-N1、氮酮联合pEGFP-N1、单纯pEGFP-N1、单纯脂质体、单纯氮酮,分别处理兔角膜内皮细胞,荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的表达。用RT-PCR方法检测EGFPmRNA表达情况。采用MTT法研究不同转染液对细胞活性的影响。结果单纯氮酮、单纯脂质体及对照组处理的细胞不表达绿色荧光蛋白。氮酮联合脂质体及pEGFP2N1对兔角膜内皮细胞的转染效率为42.6%,脂质体联合pEGFP2N1组的转染效率为22.4%,氮酮联合PEGFP-N1组的转染效率为7.2%,单组质粒组的转染效率为1%。氮酮加脂质体加PEGFP-N1组转染效率高于其他转染组(P<0.01)。各组转染液对角膜内皮细胞活性无影响。结论氮酮可促进脂质体介导质粒DNA转染兔角膜内皮细胞,在有效的转染浓度下对细胞无明显毒性,有望成为促进角膜内皮细胞基因转染的新型试剂。
- 毛晓春李贵刚张虹
- 关键词：氮酮角膜内皮细胞脂质体基因转染
- 水溶性氮酮对体外培养兔眼晶体上皮细胞活性及超微结构的影响
- 2007年
- 目的研究水溶性氮酮对体外培养兔眼晶体上皮细胞活性及超微结构的影响,探索水溶性氮酮的眼部安全应用浓度。方法体外培养兔眼晶体上皮细胞,采用细胞记数法、MTT法、透射电子显微镜研究0.001,0.005,0.010,0.050,0.100,0.500,1.000 g.L-1水溶性氮酮对细胞活性和超微结构的影响。结果浓度<0.100 g.L-1的水溶性氮酮作用24 h对晶体上皮细胞的活性无影响;浓度≥0.500 g.L-1的水溶性氮酮作用24 h可引起晶体上皮细胞活性下降(P<0.01)。浓度<0.100 g.L-1水溶性氮酮作用10 min对细胞器等结构无损害。浓度≥0.500 g.L-1的水溶性氮酮可导致细胞死亡。结论水溶性氮酮在浓度0.100 g.L-1对不会导致细胞活性的降低及细胞器损害,有较大的临床应用价值。
- 毛晓春张虹李贵刚
- 关键词：超微结构
- 透明晶状体和老年性白内障晶状体上皮细胞水通道蛋白1的表达被引量：11
- 2004年
- 目的 探讨透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞水通道蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)的表达水平。方法 收集 5例透明晶状体和 4 0例老年性白内障患者的前囊膜。应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对前囊膜下晶状体上皮细胞AQP1进行检测。结果 AQP1阳性表达在透明晶状体和老年性白内障患者前囊膜下晶状体上皮细胞的细胞膜。图像分析透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值低于透明晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值。结论 透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞的细胞膜表达AQP1,AQP1可能在老年性白内障发生发展中起一定作用。
- 张虹彭洁胡维琨谢二娟李贵刚
- 关键词：老年性白内障透明晶状体晶状体上皮细胞AQP水通道蛋白1前囊膜
