国家科技重大专项(2014ZX09304311)
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
- 相关作者：梁成罡张慧丁晓丽李晶王杰更多>>
- 相关机构：中国食品药品检定研究院中国药科大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 蛋白酶消化结合荧光定量PCR法和杂交法检测重组人胰岛素中E.coli细胞DNA残留量的比较被引量：1
- 2017年
- 目的:利用蛋白酶K消化结合荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)技术,检测重组人胰岛素原料中E.coli细胞DNA残留量,并进行初步的方法学验证,与狭缝杂交-放射自显影方法进行比较。方法:通过蛋白酶K消化样品,利用核酸纯化提取试剂盒提取DNA,然后采用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,再根据标准曲线对样品中DNA残留量进行分析。对方法进行线性、范围、准确度和精密度的验证,对重组人胰岛素中DNA残留量进行测定。结果:该方法检测E.coli细胞DNA残留的最低定量限度为0.03 pg·μL^(-1),DNA含量在0.03~2.25×10~3 pg·μL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数在0.98以上;该方法检测不同加标样品回收率较接近,3次测定的相对标准偏差均小于20%;该方法检测各批次重组人胰岛素的DNA残留量均小于10 ng·剂量^(-1),而狭缝杂交——放射自显影法50 pg(标准DNA)均未出现条带。结论:蛋白酶消化结合试剂盒洗脱解决了残留DNA检测中样品前处理的难题,定量PCR检测可能代替杂交法,快速、准确、灵敏地对重组人胰岛素原料中E.coli细胞残余DNA进行定量测定,为将来荧光定量PCR检测药物中宿主DNA残留方法标准化奠定了基础。
- 王杰吕萍张慧李晶丁晓丽魏云林梁成罡
- 关键词：重组人胰岛素
- 抗体信息数据库被引量：1
- 2017年
- 抗体是介导体液免疫的重要效应分子。近年来,随着治疗性抗体药物不断上市及其临床应用范围不断拓宽,治疗性抗体已成为生物制药的产业支柱。另一方面,随着抗体相关的基础研究日益深入和抗体序列、结构、功能表位等相关数据大量涌现,作为抗体数据管理、搜索与利用的重要工具,抗体资源库也层出不穷并得到长足发展,在相关的研究、开发、生产与销售中发挥日益重要的作用。本文对包括Kabat、IMGT、ab Ysis等在内抗体信息数据库进行介绍。
- 周婷婷冯健男
- 关键词：抗体数据库IMGT
- RP-HPLC法测定重组人胰岛素中胰岛素前体的含量被引量：3
- 2015年
- 目的：建立反相高效液相色谱法测定重组人胰岛素中胰岛素前体的方法。方法：采用Grace Vydac C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱为分析柱,以乙腈-0.1%TFA水溶液（20∶80）为流动相A,以乙腈-0.1%TFA水溶液（80∶20）为流动相B,梯度洗脱,流速为0.8mL·min-1,检测波长为215nm,柱温为40℃。结果：胰岛素前体在0.76~389.5μg·mL-1范围内峰面积与浓度有良好的线性关系（r=0.9999）,方法平均回收率为103.8%（n=9）。结论：经方法学验证,本法能准确测定重组人胰岛素中胰岛素前体的含量。
- 丁晓丽葛玉鹏张慧梁成罡
- 关键词：重组人胰岛素反相高效液相色谱法
- 重组人促卵泡激素N末端不均一性分析方法研究
- 2017年
- 目的:建立重组人促卵泡激素(rhFSH)N端不均一性的分析方法,并对不同企业样品rh FSH原液的N端不均一性进行比对研究。方法:通过对亚基的还原与烷基化处理方法、糖苷酶切条件及RP-HPLC条件的优化,将完整与N端缺失氨基酸的亚基有效分离,建立了2种rhFSH的N端不均一性分析方法,并利用质谱分别对目的蛋白进行定性鉴别。以国内外企业的rhFSH原液为样品进行N末端不均一性比较。结果:建立的2种RP-HPLC方法均可实现完整与缺失β亚基的有效分离,各样品rhFSH的N端不均一性基本一致。结论:rhFSH国内生物类似药与国外参照药的N端不均一性比较有较高的相似性;本实验建立的2种RP-HPLC方法可评价产品质量,为生物类似药的可比性研究提供技术支持。
- 杨少慧李晶梁成罡
- 关键词：重组人促卵泡激素
- 主成分自身对照法测定重组人胰岛素中杂质B_(30)脱苏氨酸胰岛素的含量
- 2015年
- 目的:建立主成分自身对照法测定重组人胰岛素中杂质B30脱苏氨酸胰岛素的含量。方法:采用外标法,分别测定重组人胰岛素与脱苏氨酸胰岛素的相对保留时间;测定重组人胰岛素和B30脱苏氨酸胰岛素的线性方程,以斜率计算杂质B30脱苏氨酸胰岛素相对于主成分重组人胰岛素的校正因子;通过方法学考察,表明采用主成分自身对照法测定重组人胰岛素中杂质B30脱苏氨酸胰岛素的含量可行。结果:测得杂质B30脱苏氨酸胰岛素相对于主成分重组人胰岛素的相对保留时间为1.07,校正因子为1.04,可以采用不加校正因子的主成分自身对照法测定其含量。结论:用主成分自身对照法测定重组人胰岛素中B30脱苏氨酸胰岛素含量的方法可行。
- 丁晓丽葛玉鹏李晶张慧梁成罡
- 关键词：重组人胰岛素
- 抗体-药物偶联物药物用抗体研究进展被引量：1
- 2014年
- 抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugates,ADC)由抗体、细胞毒性药物及偶联链三部分组成,兼具了抗体的高特异性和细胞毒素对肿瘤的高毒性,是新一代抗体技术的发展方向之一。作为ADC的载体部分,理想抗体及其靶标的选择是设计开发安全性高、疗效好的ADC药物的重要因素。本文将对ADC药物用抗体的发展现状、特点、类型及靶标选择,以及现有的不同靶点裸抗体的发展进行简要综述,为理想ADC药物的开发提供参考。
- 杨跃梅沈倍奋
- 关键词：单克隆抗体靶标
