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寡氧单胞菌中CRISPR位点的分析被引量：1: 2017年; 对寡氧单胞菌基因组中的CRISPR位点进行生物信息学分析。CRISPRdb数据库中公布的和NCBI上下载的共26株寡氧单胞菌的基因组序列,分析其CRISPR位点的分布情况、重复序列、间隔序列以及间隔序列和噬菌体序列数量之间的关系。共发现15个确定的CRISPR结构和132个可疑的CRISPR,不同菌株CRISPR结构中的重复序列具有较强的保守性。间隔序列的靶向基因主要来自细菌的基因组,说明寡氧单胞菌CRISPR的的进化与其他细菌基因有关。此外,间隔序列与前噬菌体数量之间的负相关关系,说明CRISPR能阻止噬菌体的入侵。寡氧单胞菌CRISPR位点的分析为进一步研究耐药性及基因组稳定性奠定了基础。; 刘兴雨毕春霞辛晓妮付恒霞周明艳王斌闫志勇; 关键词：CRISPR

嗜麦芽寡养单胞菌D2株2套Ⅱ型分泌系统的全基因簇序列测定及分析被引量：1: 2013年; 嗜麦芽寡养单胞菌D2株经前期研究发现有2套Ⅱ型分泌系统（T2SS），根据嗜麦芽寡养单胞菌K279a、R551—3、JV3、D457的T2SS基因簇序列，以及D2株的部分测序结果设计引物，采用基因移步法逐一扩增2套T2SS基因序列，产物连接至T载体，经酶切鉴定后测序、拼接。发现有22个完整的开放多码框架（ORF），比对分析后发现T2SSl的基因簇与同种属细菌相应基因簇序列同源性均在80％以上，对应氨基酸序列同源性均能达到97％以上，而T2SS2基因簇与K279a、R551—3对应基因序列和氨基酸序列的同源性均不及T2SS1高。2套T2SS的GspE、F、I基因同源性在50％以上，其他对应基因同源性在35％～68％之间不等，氨基酸序列同源性则为15％～61％。2套他ss与铜绿假单胞菌PA01的同源性高于不同科的小肠结肠炎耶尔森菌。T2SS的序列测定及同源性分析为进一步研究细菌蛋白分泌机制奠定基础。; 张卫毕春霞罗玮秦江楠陈豪王斌闫志勇; 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌同源性

一株产中性蛋白酶海洋细菌的筛选与初步鉴定被引量：10: 2011年; 目的从海洋环境及生物中筛选高产蛋白酶菌株,初步研究其生长特性及酶学特性,为进一步研究开发提供依据。方法将从青岛黄海海域的鱼类、贝类、海水、海泥等样品中分离的细菌,用奶粉平板法和Folin-酚法筛选蛋白酶酶活性较高的菌株,测定该菌株的最佳产酶条件并初步检测其酶学特点,通过形态学、分子生物学鉴定,初步确定种属。结果菌株为革兰阴性杆菌,好氧,无芽孢,无荚膜,有鞭毛。奶粉平板上的菌落直径1～2 mm,圆形乳白色、光滑、边缘整齐、半透明。根据16S rDNA序列测定和系统发育树分析,初步鉴定该菌为Aranicola proteolyticus。该菌生长温度15～37℃,最适生长温度25℃。生长pH 5.5～9.0,最适pH 7.5。生长氯化钠浓度0～6%,最适浓度1%;所产蛋白酶的最适酶活性温度40℃,最适pH 7.5。结论菌株XF-1环境适应性较好,为中度嗜冷细菌。所产蛋白酶为中性蛋白酶。; 肖峰张浩王斌闫志勇宋旭霞胡明侯云郑德志樊瑞峰; 关键词：中性蛋白酶

融合蛋白M-IL-2(^(88)Arg,^(125)Ala)在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性研究: 2014年; 构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活性研究。经测序及PCR鉴定,M-IL-2(88Arg,125Ala)正确插入pPICZαA中,电转化后,重组载体通过同源重组整合到酵母基因组中,SDS-PAGE检测在26 ku左右有明显目的条带,与理论相符。经Western blot鉴定具有较高抗原性及特异性。BCA法测定甲醇诱导96 h融合蛋白表达量达315.2 mg/L。CCK-8法检测融合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞生长抑制作用,表明纯化的融合蛋白在体外能抑制人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞的生长增殖。该研究为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)大规模制备和动物实验以及临床前期研究奠定了基础。; 李林钱冬萌邵光灿闫志勇宋旭霞陈豪王斌; 关键词：毕赤酵母抗肿瘤活性

几株高产蛋白酶菌株的分离鉴定及初步研究被引量：3: 2013年; 从采集的245份海洋生物及环境样本中筛选高产蛋白酶菌株,进行形态学和分子生物学鉴定,并对其生物学特性和菌株间的配伍效果进行研究。结果显示,所分离的菌株中Pe、Pc为枯草芽孢杆菌,Ps为地衣芽孢杆菌。培养16h后进入生长平台期,Pc和Ps菌株生长的最适pH均为7.0,最适生长温度均为35℃;菌株Pe的最适pH为6.5,最适生长温度是30℃。菌株Pe与Ps 1∶1配伍后产酶效果最好。; 朱绍辉王斌夏伟张浩张国雨王晓丽李超徐权汉; 关键词：蛋白酶菌株

一株产蛋白酶海洋菌的筛选、鉴定及培养条件优化被引量：5: 2012年; 为了获得高产蛋白酶的菌株,将其广泛应用于水产养殖中。从青岛市胶州湾海泥中分离得到一株产蛋白酶的海洋菌ZR-Pw。通过菌株ZR-Pw的菌落形态、菌体形状、革兰氏染色,结合16SrDNA基因序列,对菌种进行鉴定;将ZR-Pw接入发酵培养基中,测定该菌株的生长曲线、产酶曲线,确定其产酶的最适温度及pH。结果显示:菌株ZR-Pw为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。菌株在生长到18h时,菌体生长量达到最大值。在菌株生长到24h时,产酶量达到最大值。该菌株产酶最适温度为35℃,最适pH8.0。试验为菌株ZR-Pw产蛋白酶的产业化开发提供依据。; 夏伟闫志勇朱绍辉张浩李超王晓丽张国雨徐权汉; 关键词：地衣芽孢杆菌

嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统F和E基因序列测定被引量：2: 2011年; 目的克隆并测定嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统部分编码基因GspF和Gsp E的完整基因序列。方法分别根据已获得的嗜麦芽寡养单胞菌D2株部分序列,以及GenBank收录的K279a和R551株的序列依次设计3组引物,移步法PCR扩增GspF和E基因,产物纯化后连接pMD18T载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后进行测序分析,将获得各PCR片段进行拼接,最终获得GspF和E基因的完整编码基因,并在GenBank中进行对比分析。结果 PCR先后扩增获得的3段序列,测序并拼接后发现其含有两个完整开放读码框架,分别为长1200 bp的GspF基因(GenBank收录号为GU377212.1)和长1434 bp的GspE基因(GenBank收录号为HM151387)。在GenBank中BLAST分析发现,D2株与嗜麦芽寡养单胞菌R551-3菌株的GspF基因及氨基酸序列同源性分别为93%和98%;GspE基因及氨基酸序列同源性与同菌种菌分别为92%和99%。结论成功克隆出嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统基因簇中的GspF和GspE完整编码序列;嗜麦芽寡养单胞菌GspF和GspE种内高度保守,而其他细菌差异显著,提示其Ⅱ型分泌机制可能与其他革兰阴性菌有一定差异。; 辛晓妮闫志勇罗玮杨丽胡明侯云; 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌

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