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腺病毒的标记方法: 2010年; 腺病毒载体具有滴度高、容量大及可以同时感染分裂与未分裂细胞等一系列优点,因此在基因治疗领域得到广泛应用。腺病毒颗粒的标记对于腺病毒生物学功能的基础研究及评估腺病毒载体的基因治疗效果具有重要意义。本文通过综述腺病毒标记的方法,回顾腺病毒标记技术的发展过程,同时期望为找到更好的标记腺病毒的方法以及其在基因治疗研究领域的进一步应用提供一些思路。; 赵俊丽夏海滨; 关键词：腺病毒病毒载体基因治疗

携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合腺病毒载体Ad5/11的构建及其体外实验研究被引量：2: 2011年; 目的:构建携带报告基因eGFP及人内皮他丁en-dostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11。方法:采用重叠PCR及在细菌E.coli.BJ5183中同源重组的方法,获得表达eGFP报告基因的嵌合腺病毒骨架载体,然后以经PacI线性化的嵌合腺病毒载体骨架与PacI线性化的表达endostatin-K5的腺病毒E1穿梭载体共转染真核细胞HEK293细胞中获得携带报告基因eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP。以获得的嵌合型腺病毒载体感染U87MG细胞,在荧光显微镜观察eGFP的表达,采用RT-PCR检测endostatin-K5的表达;将所构建的嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP与未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP在体外感染人胶质瘤细胞系A172及乳腺癌细胞系MDA-MB-231;通过荧光蛋白eG-FP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP可成功地表达eGFP及endostatin-K5。以经过修饰的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP感染人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的感染效率,明显高于对照未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP。结论:携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11,可明显提高对人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率。; 王东阳刘世海李星赵俊丽陈皓冯飞雪王丽娴夏海滨; 关键词：腺病毒载体

人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备被引量：3: 2008年; 目的：利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素（canstatin）重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法：PCR法扩增canstatin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAd5-CMV中,获得穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin.用PacI酶单独酶切穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7~10d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果：测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒（病毒滴度为2.0×1015pt/L）.结论：成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础.; 齐宗利李慧瑾王东阳赵俊丽边晔冯真真蒋羽清郑晓晶夏海滨; 关键词：腺病毒载体血管能抑素绿色荧光蛋白质类

腺病毒载体衣壳蛋白质的遗传修饰被引量：1: 2010年; 腺病毒载体是最早用于基因治疗研究的病毒载体之一,也是目前肿瘤基因治疗中最为常见的病毒载体之一,其主要通过靶细胞表面的天然柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)感染宿主细胞。由于大多数肿瘤细胞表面该受体表达水平较低,降低了腺病毒载体对靶细胞的感染效率,从而制约了腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用。因此,如何提高腺病毒载体对靶细胞的感染效率是腺病毒载体应用于肿瘤基因治疗的关键。目前对腺病毒载体衣壳蛋白质(capsid protein)的遗传修饰是提高其对宿主细胞感染效率的主要途径。本文将对这一领域的主要研究进展作一综述,为该方面的研究提供有用的信息。; 边晔冯飞雪夏海滨; 关键词：腺病毒载体遗传修饰肿瘤基因治疗

RNA干扰与肿瘤基因治疗被引量：1: 2009年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由外源性或内源性双链RNA分子阻断或者降低同源基因表达的现象。由于RNAi对靶基因的沉默作用具有高效性、特异性等特点,近年来已广泛应用于基因治疗。肿瘤除早期进行手术及化疗等传统治疗手段外,目前尚无有效的治疗对策。采用RNAi技术的基因治疗手段为肿瘤的有效治疗带来了新的希望。本文将对RNAi干扰机制、RNAi在肿瘤基因治疗中的研究进展及其在应用过程中所面临的挑战作一综述。; 孙晓聪夏海滨; 关键词：小干扰RNA RNA干扰肿瘤基因治疗

细胞凋亡相关分子与肿瘤基因治疗被引量：3: 2009年; 细胞凋亡的过程涉及一系列凋亡相关分子的调控。这些凋亡相关分子在机体中的异常调节将导致包括肿瘤和免疫性疾病在内的多种疾病的发生。针对凋亡相关分子的治疗策略在肿瘤治疗中具有重要意义。本文以细胞凋亡相关分子及其在肿瘤基因治疗中的应用研究做一综述,为肿瘤治疗提供新的策略。; 冯真真夏海滨; 关键词：细胞凋亡促凋亡蛋白肿瘤基因治疗

人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体的构建及其表达被引量：3: 2009年; 目的:人endostatin、K5及endostatin-K5基因克隆,重组腺病毒载体的构建及其表达产物体外活性检测。方法:采用PCR方法扩增基因,通过酶切连接方法将3种基因片段克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His中;用磷酸钙沉淀法分别将经PacI酶切的表达人endostatin、K5及endostatin-K5的腺病毒shuttle载体与PacI酶切的腺病毒骨架共转染HEK293细胞;用CsCl密度梯度离心法纯化制备病毒;用重组腺病毒感染HeLa细胞并在不同时间点收获蛋白,Western blot检测24h、48h和72h的蛋白表达量;通过MTT方法检测蛋白对ECV-304生长抑制作用。结果:成功制备表达人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体;Westernblot可以检测到蛋白表达,蛋白表达量随病毒感染HeLa细胞的时间延长而逐渐增高;由重组腺病毒所表达的3种蛋白对ECV304细胞均有明显的生长抑制作用。结论:由含有人en-dostatin、K5及endostatin-K5基因的重组腺病毒载体所表达的蛋白对ECV-304生长具有明显的抑制作用。; 李慧瑾张伟锋王东阳李荣华齐宗利赵俊丽夏海滨; 关键词：ENDOSTATIN K5 腺病毒载体 MTT检测肿瘤

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陕西省自然科学基金(2007C201)

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