对胰岛素类似物MIP(B27赖氨酸去三肽胰岛素前体)融合蛋白包涵体的复性方法进行初步的比较,探讨了不同方法对MIP融合蛋白包涵体复性效率的影响。采用大肠杆菌IMPACT-TWIN(Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag-Two Intein)表达系统表达MIP融合蛋白。通过透析法、稀释法和凝胶过滤对MIP融合蛋白包涵体进行复性研究,经几丁柱亲和纯化后获得复性的MIP蛋白前体。采用12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及Bradford法测定其浓度并计算复性效率及剪切效率。实验结果表明:凝胶过滤法复性效率较透析法和稀释法高,并且能够获得较多的具剪切活性的可溶性蛋白,其复性效率为65%,剪切效率为5.1%。通过对MIP融合蛋白包涵体3种复性方法的比较,为MIP融合蛋白包含体复性方法开辟了新的途径,并为大量制备可溶性的MIP融合蛋白提供实验依据和理论基础。
