国家自然科学基金(30870954)
- 作品数：9 被引量：31H指数：2
- 相关作者：陈凤玲刘晓燕马晓文张惠洁刘卉芳更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第三人民医院蚌埠医学院交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 巨噬细胞与糖尿病大血管病变被引量：3
- 2010年
- 糖尿病大血管病变是以动脉粥样硬化为主要病理特征的糖尿病慢性并发症之一，是2型糖尿病患者主要的死亡原因。近年来，巨噬细胞在糖尿病大血管病变中的作用及其机制日益引起关注。巨噬细胞通过表达和分泌促炎因子参与血管内膜下炎性反应的发生和发展，并且通过参与脂质聚集和逆向转运在动脉粥样硬化的发展过程中起重要作用。现就巨噬细胞在糖尿病大血管病变中的作用机制及其临床价值作一阐述。
- 章辰琛陈凤玲
- 关键词：巨噬细胞糖尿病大血管病变炎症
- 小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察不同浓度小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响,并探讨其可能的作用机制。方法佛波酯(PMA)刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞后经乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)诱导泡沫化,建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。根据小檗碱干预与否及干预浓度将泡沫细胞分为空白对照组和小檗碱(5～20μmol/L)干预组。细胞经分组处理24h后,流式细胞仪检测AcLDL聚集量;酶法检测胆固醇和乙酰甘油含量;闪烁计数法检测各组胆固醇流出率,同时分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662预处理对胆固醇流出率的影响(以吡格列酮作为阳性对照);RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达。结果与空白对照组比较,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞内AcLDL聚集量及胆固醇和乙酰甘油含量均显著减少(P<0.01),而胆固醇流出率上升(P<0.01),并呈现一定的量效关系。GW9662预处理后,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞的胆固醇流出率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞LXRα和ABCA1mRNA表达均高于空白对照组。结论小檗碱可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出量,其作用机制可能与激活PPARγ途径,增加LXRα和ABCA1mRNA表达有关。
- 刘晓燕严士敏龚慧赵秀丽陈凤玲
- 关键词：小檗碱泡沫细胞胆固醇三磷酸腺苷结合盒转运体A1肝X受体Α
- 亲脂素增加血管平滑肌细胞的脂质集聚
- 2009年
- 目的观察乙酰化的低密度脂蛋白（AcLDL）对血管平滑肌细胞亲脂素（adipophilin）表达的影响及亲脂素对血管平滑肌细胞的AcLDL摄取及脂质集聚的影响，从而探讨其在糖尿病大血管病变发生中的作用。方法以不同浓度AcLDL干预人血管平滑肌细胞（HVSMCs），应用Noahem印迹及Western印迹技术检测AcLDL对亲脂素表达的影响；以RNA干扰技术、流式细胞仪、酶法和油红O染色检测亲脂素对HVSMCs的脂质集聚及AcLDL摄取的影响。结果AcLDL呈剂量依赖性地增加HVSMCs的亲脂素的表达，沉默亲脂素基因使HVSMCs对AcLDL的摄取（降低38．7％，P〈0．05）和脂质集聚能力下降（甘油三酯、总胆固醇分别下降30．6％和29．8％，均P〈0．01）。结论亲脂素促进HVSMCs摄取AcLDL，增加HVSMCs脂质集聚，这可能是亲脂素促进动脉粥样硬化的机制之一。
- 陈凤玲杨志红王宣春刘瑜周闻白宋晓艳沈烨牟滤胡仁明
- 关键词：血管平滑肌细胞
- 内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响。方法制备糖尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT)C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子(GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达。分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达。结果糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P<0.001)。经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P<0.05)。结论糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高。体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufm1的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程。
- 刘卉芳张惠洁刘晓燕胡其娴马晓文胡小磊陈凤玲
- 关键词：内质网应激巨噬细胞
- 巨噬细胞亚群与胰岛素抵抗的研究进展被引量：1
- 2012年
- 胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的关键因素之一。在2型糖尿病胰岛素抵抗的发生、发展中,巨噬细胞起到了非常关键的作用。巨噬细胞是具有可塑性和多能性的细胞群体,在体内外不同微环境诱导下可极化为功能截然不同的细胞亚型。根据活化状态和功能不同,目前主要分为M1型和M2型,M1型主要发挥促炎性作用,M2型主要发挥抗炎性作用,两者在肥胖诱导胰岛素抵抗的发生、发展中分别起到促进和抑制的作用。
- 马晓文陈凤玲
- 关键词：胰岛素抵抗极化
- 人KIAA1199蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定
- 2012年
- 目的 KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础。方法采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中。经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199。其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性。此后应用ELISA及Westernblot方法鉴定该抗体。结果 pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KI-AA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础。
- 刘卉芳刘晓燕张惠洁胡小磊胡其娴马晓文陈凤玲
- 关键词：GST融合蛋白多克隆抗体
- 葡萄糖抑制THP-1巨噬细胞载脂蛋白E的表达
- 2009年
- 目的:观察葡萄糖对人单核细胞性白血病细胞株(human monocytic leukemia cell line,THP-1)巨噬细胞的载脂蛋白E(Apo E)表达的影响。方法:用佛波脂诱导THP-1细胞使其分化成巨噬细胞。再用含不同浓度葡萄糖的RPMI 1640培养基培养巨噬细胞72 h后,RT-PCR和Western Blot分别检测巨噬细胞Apo E的mRNA和蛋白的表达,同时用MTT法检测各组细胞活力。结果:葡萄糖呈剂量依赖性(20~30 mmol/L),明显抑制THP-1巨噬细胞Apo E的表达。结论:葡萄糖抑制THP-1巨噬细胞Apo E的表达,其可能是导致动脉粥样硬化的机制之一。
- 刘晓燕严士敏赵秀丽郁红陈凤玲
- 关键词：动脉粥样硬化巨噬细胞血糖过多载脂蛋白E
- 人骨生成诱导因子基因慢病毒载体构建及在人主动脉平滑肌细胞中稳定过表达被引量：1
- 2012年
- 目的:构建人骨生成诱导因子基因(osteoinductive factor,OIF)慢病毒载体,并在人主动脉平滑肌细胞(human aorticsmooth muscle cell,HASMC)中稳定过表达OIF。方法:PCR扩增OIF-3FLAG,并克隆到慢病毒载体pMSCV PIG中,构建慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并测序鉴定。应用脂质体将pMSCV PIG-OIF-3FLAG或pMSCV PIG与VSVG、GAG-POL共转染293T细胞,48 h后收集细胞上清,感染HASMC,48 h后加入嘌呤霉素4 d,即筛选出稳定过表达pMSCV PIG-OIF-3FLAG的HASMC细胞株,采用real-time PCR和Western blot检测OIF mRNA和蛋白表达。结果:构建OIF基因慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序后证实目的基因的插入位点和读码框正确;包装病毒感染HASMC,经real-time PCR和Western blot检测证实OIF mRNA和蛋白水平在该细胞株中高表达。结论:成功构建人OIF基因的慢病毒载体,并获得稳定过表达该基因的HASMC。
- 张惠洁刘卉芳张晓娜陈凤玲
- 关键词：慢病毒载体过表达
- 线粒体的功能及检测方法被引量：22
- 2011年
- 对线粒体进行检测有助于线粒体疾病的诊断。目前对线粒体功能检测的方法有呼吸控制率、线粒体ATP生成率、离子通道开放状态、线粒体膜电位变化、前臂有氧运动实验等。通过电镜可直接观察线粒体的形态变化。每种方法均有各自的原理和优缺点,临床需根据实际选择合适的方法,且尚需探索更为理想、简单、经济的检测手段。
- 王新陈凤玲
- 关键词：线粒体
