国家自然科学基金(31272498)
- 作品数：9 被引量：28H指数：4
- 相关作者：郭锡杰侯成香吕丁丁覃光星耿涛更多>>
- 相关机构：江苏科技大学中国农业科学院蚕业研究所镇江高等专科学校更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 家蚕抗菌肽cecropin A的表达特征及其体内外抑菌研究被引量：3
- 2016年
- 家蚕抗菌肤cecropin A(BmCecA)是家蚕体液免疫中产生的一种重要的抗菌肤。本研究利用RT-PCR技术克隆出BmCecA基因的开放阅读框(ORF),该ORF编码22个氨基酸的信号肤和37个氨基酸的成熟肤,通过蛋白结构分析该成熟肤形成经典的双亲α螺旋。实时荧光定量PCR表明,BmCecA在5龄家蚕的体壁、马氏管、中肠、丝腺、血淋巴和脂肪体中均有表达在脂肪体中表达量最高,其次是血淋巴。通过固相合成法合成BmCecA成熟肤用质谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其分子量约为4.05 kD,高效液相色谱检测其纯度为89.14%。用合成多肤分别对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomouas aerugiuosa)、革兰氏阳性菌球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)做体外抑菌实验,发现BmCecA对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有明显的抑菌作用。首次用BmCecA做家蚕的体内抑菌实验,结果显示注射BmCecA的家蚕存活率显著高于对照组相对于对照组,致死中时间(LT_(50))分别延长了17.85%(大肠杆菌)、37.31%(铜绿假单胞菌)、21.92%(球形节杆菌)、49.45%(枯草芽孢杆菌)差异显著。凝胶迁移实验结果说明BmCecA可能在破坏细菌细胞膜之后作用于基因组DNA和RNA,从而导致细菌的快速死亡。本研究结果有利于从分子水平上深入理解家蚕乃至其它昆虫抵御细菌侵染的防御机理,也为家蚕的抗菌育种提供理论依据。
- 吕丁丁耿涛侯成香黄玉霞覃光星郭锡杰
- 关键词：家蚕CECROPIN抗菌活性细菌
- 家蚕抗菌肽Attacin1对球孢白僵菌的抗菌活性被引量：2
- 2019年
- 抗菌肽是宿主在免疫过程中产生的一类重要抗菌物质。通过实时荧光定量PCR检测发现家蚕幼虫在被球孢白僵菌(Beauveria bassiana)感染后抗菌肽Attacin1的编码基因BmAttacin1表达显著上调。克隆获得了BmAttacin1成熟蛋白的编码序列,利用原核表达系统成功表达并获得BmAttacin1蛋白。抑菌圈实验结果表明,BmAttacin1对革兰阴性菌大肠埃希菌(Escherichia coli)和球孢白僵菌有明显的抑菌效果,而对革兰阳性菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)没有抑菌效果;进一步将BmAttacin1与球孢白僵菌分生孢子孵育,间接免疫荧光检测发现BmAttacin1能与球孢白僵菌分生孢子结合。在BmN培养细胞中过表达BmAttacin1基因后,家蚕其他7种抗菌肽基因也都上调表达,其中天蚕素类抗菌肽基因BmCecropinA的表达上调了10倍,BmCecropinB上调了9倍,表明BmAttacin1的表达可能对其他抗菌肽基因的表达具有协同增强作用。试验结果为深入研究BmAttacin1与球孢白僵菌的相互作用以及BmAttacin1在家蚕抵御白僵菌感染过程中发挥的作用奠定了一定的基础。
- 胡丛武李瑞林吴万明侯成香高坤耿涛郭锡杰
- 关键词：家蚕抗菌肽球孢白僵菌
- 昆虫抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用研究进展被引量：5
- 2021年
- 昆虫抗菌肽(antimicrobial peptide,AMPs)是一类昆虫先天免疫系统中十分重要的效应因子,它分子量小、热稳定,并且具有广谱抗菌性,能够抑制、杀死多种细菌、真菌。近几年来,由于昆虫抗菌肽具有抗肿瘤的活性且其不具有抗原性而受到研究者的广泛关注。昆虫种类多、分布广,因此昆虫抗菌肽具有很高的开发潜力和实际应用价值。但是,目前对于昆虫抗菌肽抗肿瘤能力的研究尚不够深入,对其作用机制还没有一套准确并且系统的理论。现在普遍认为昆虫抗菌肽的抗肿瘤机制与其抗菌机制类似,可以分为破坏细胞膜机制以及非破坏细胞膜机制,并且同一种昆虫抗菌肽可以通过多种方式来抑制甚至杀死肿瘤细胞,但是对正常真核细胞无明显的毒副作用。相较于传统化疗药物的无差别杀伤,昆虫抗菌肽在肿瘤治疗领域有着巨大潜力。本文简要综述了昆虫抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用及其作用机制,并对其开发潜力和实际应用价值进行了展望,以期为今后的研究提供理论支持。
- 徐平吕丁丁郭锡杰
- 关键词：昆虫抗菌肽肿瘤细胞
- GSTs和GSH-Px在家蚕幼虫抵御球胞白僵菌感染过程中的作用被引量：3
- 2016年
- 本实验研究家蚕幼虫解毒和抗氧化防御体系在抗真菌感染过程尤其是真菌毒素解毒过程中的作用。检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌以及注射球孢白僵菌毒素之后血淋巴、中肠和脂肪体中谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活力、谷胱甘肽还原酶（GR）活力和谷胱甘肽（GSH）含量的变化及GST、GSH-Px基因表达水平的变化，同时还检测了注射GSH和毒素对家蚕幼虫感染球孢白僵菌后存活率的影响。结果表明球孢白僵菌感染家蚕幼虫后脂肪体、中肠、血淋巴中的GSTs、GR、GSH-Px酶活力性显著提高，各组织中BraGSTd1、BmG5Ts1、BmGSTo1和BmGSH-Px的表达量在感染后期（54～72h）也显著上调表达，说明家蚕幼虫可以通过增加酶活力并上调解毒和抗氧化因子的表达量以增强抗真菌感染能力。毒素注射实验表明家蚕幼虫对球孢白僵菌毒素的解毒作用主要在脂肪体和血淋巴中依赖GSTs、GR和GSH来完成，同时定量实验表明BmGSTs1和BmGSTo1在注射毒素24h后显著上调表达，说明它们可能是家蚕幼虫对球孢白僵菌毒素的主要解毒基因。存活率实验结果表明GSH能够缓解球孢白僵菌毒素对蚕体的损害，延长家蚕幼虫的半数致死时间（约6h）。本研究结果表明家蚕幼虫GSTs和GSH-Px构成的解毒和抗氧化防御系统在抗真菌感染过程中起到重要作用，丰富了对家蚕与病原真菌互作机制的认识。
- 耿涛黄玉霞侯成香吕丁丁覃光星郭锡杰
- 关键词：球孢白僵菌解毒作用
- 白僵菌诱导家蚕抗菌肽enbocin1基因的表达特征及产物的抗真菌活性被引量：4
- 2016年
- 家蚕的抗菌肽家族基因enbocin1是蚕体免疫系统相关基因。为解析家蚕对病原真菌感染免疫应答反应的分子机制,采用实时荧光定量PCR检测抗菌肽基因enbocin1在家蚕5龄幼虫感染球孢白僵菌(Beauveria bassiana)后的时空表达模式,结果显示:enbocin1主要在幼虫脂肪体中显著上调表达,而且持续至感染诱导后30 h,感染后8、30 h的表达水平分别上调了约44倍和6倍;在马氏管、体壁中该基因的诱导表达差异不显著,在血淋巴中几乎检测不到该基因的表达。进一步用原核表达系统成功表达并纯化获得了高纯度的重组家蚕抗菌肽enbocin1,体外抑菌试验表明其对白僵菌具有较强的抑菌活性,且重组enbocin1蛋白浓度与抑菌活性之间具有量效关系。用重组enbocin1蛋白制备了效价达1∶30 000的多克隆抗体,可用于进一步深入研究enbocin1的功能及其作用机制。研究结果提示抗菌肽enbocin1在家蚕抵御真菌感染的过程中可能具有重要作用。
- 黄玉霞耿涛侯成香吕丁丁覃光星高坤郭锡杰
- 关键词：家蚕抗菌肽抑菌活性球孢白僵菌
- 球孢白僵菌侵染对家蚕抗氧化水平的影响被引量：6
- 2017年
- 球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种广谱性、强致病性的病原真菌,然而其致病机制尚不明确,进一步阐释球孢白僵菌尤其是球孢白僵菌毒素的致病机制,对生防应用和病害防控具有重要意义。本研究检测了家蚕幼虫自然感染球孢白僵菌和注射球孢白僵菌毒素以及家蚕细胞添加毒素后,幼虫存活率、家蚕组织和细胞的总抗氧化活力、SOD和CAT酶活性及相关基因表达水平的变化。结果表明,家蚕2龄幼虫感染白僵菌后期(33~48 h),5龄幼虫感染球孢白僵菌后期(48~72 h),5龄幼虫和Bm N细胞注射(添加)球孢白僵菌毒素24 h后,家蚕血淋巴、脂肪体、中肠和马氏管组织、Bm N细胞总抗氧化活力、SOD和CAT酶活性显著降低;脂肪体、中肠、马氏管组织和Bm N细胞中Bmsod和Bmcat基因表达水平在感染后期和添毒后显著下调表达;球孢白僵菌毒素能够诱导家蚕Bm N细胞发生凝集反应并最终凋亡崩解;家蚕幼虫添加外源SOD和CAT等抗氧化剂后,能显著提高家蚕的存活时间。以上结果说明,球孢白僵菌侵染家蚕后,可能通过分泌毒素攻击脂肪体、中肠和马氏管细胞,下调Bmsod和Bmcat基因的表达,降低机体的总抗氧化能力,破坏家蚕的氧化还原平衡,损伤组织器官功能并最终导致家蚕死亡;同时破坏家蚕免疫系统,获得免疫逃逸,以利于菌丝生长、繁殖。
- 王树昌赫荣帆陆敏泉黄华平王娜玉郭锡杰耿涛
- 关键词：球孢白僵菌家蚕真菌毒素CAT
- 家蚕感染球孢白僵菌后4种抗菌肽基因的表达分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】阐明家蚕（Bombyxmori）抗菌肽对球孢白僵菌感染的应答模式，为揭示家蚕及鳞翅目昆虫抗真菌机制提供参考依据。【方法】利用实时荧光定量PCR检测家蚕被球孢白僵菌感染后抗菌肽基因cecropinA、gloverin2、lebocin1/2和lysozyme的表达情况，比较4种抗菌肽在家蚕脂肪体、血淋巴、马氏管和中肠中不同时间点的表达差异。【结果】经球孢白僵菌诱导后，cecropinA基因在家蚕脂肪体中的最高上调表达倍数为10.2倍，在血淋巴中的最高上调表达倍数为13.2倍，在马氏管中感染初期显著上调表达（P〈0.05，下同），在中肠中感染后期显著上调表达；gloverin2基因在家蚕脂肪体中出现2次上调表达过程，最高上调表达倍数为15.7倍，在血淋巴中感染前期呈上调表达，在马氏管中略呈下调表达，中肠中的gloverin2基因在接种后16-48 h呈显著上调表达，最高上调表达倍数为6.7倍；lebocin1/2基因在家蚕脂肪体和血淋巴中的最高上调表达倍数分别为19.4和22.4倍，在马氏管中仅在接种后16 h呈显著上调表达，在中肠中则是接种后24-48 h呈显著上调表达；lysozyme基因在家蚕脂肪体中显著上调表达，在血淋巴和马氏管中感染初期也呈显著上调表达，但在中肠中的表达无明显规律。【结论】cecropinA、gloverin2、lebocin1/2和lysozyme基因在球孢白僵菌侵染家蚕的过程中均不同程度地被诱导上调表达，尤其在家蚕脂肪体和血淋巴中较明显，由此推测这4种抗菌肽在抵御球孢白僵菌的侵染过程中发挥重要作用。
- 吕丁丁侯成香耿涛黄玉霞覃光星高坤郭锡杰
- 关键词：家蚕球孢白僵菌抗菌肽
- 感染球孢白僵菌的家蚕免疫应答差异表达基因分析被引量：3
- 2014年
- 【目的】筛选家蚕Bombyx mori应对白僵菌Beauveria bassiana侵染的应答基因,以进一步研究家蚕抵御真菌侵染的分子机制。【方法】采用新一代Solexa高通量测序技术对感染白僵菌及未感染白僵菌的对照组家蚕进行了测序分析,筛选差异表达基因;结合生物信息学工具分析差异表达基因的功能注释、分类及涉及的信号通路等;应用荧光定量PCR技术验证10个基因的差异表达。【结果】通过测序和生物信息学分析共获得377个差异表达基因,其中表达上调基因236个,下调基因141个;KEGG通路分析表明,各通路中既有表达上调的基因,也有下调基因;12个上调基因、26个下调基因参与3个显著性富集的KEGG通路,即核糖体、氨酰tRNA生物合成和剪接体通路。定量PCR与测序结果显示,溶菌酶、热激蛋白、谷胱甘肽S-转移酶、肽聚糖识别蛋白等与免疫应激相关的蛋白基因均呈现表达上调。【结论】本研究筛选获得的差异表达基因,特别是上调表达的基因可能与家蚕应对白僵菌侵染的应答机制有关,其中与免疫应激相关的蛋白基因如溶菌酶、热激蛋白、谷胱甘肽S-转移酶、肽聚糖识别蛋白基因等可能直接参与了家蚕对白僵菌的免疫识别和防御,研究结果为从分子水平阐明家蚕抵御真菌侵染的防御机制和白僵菌对家蚕的致病机理提供新的依据。
- 侯成香覃光星耿涛高坤潘中华钱荷英郭锡杰
- 关键词：家蚕球孢白僵菌免疫应答转录组差异表达基因
- 家蚕抗菌肽抵御病原微生物感染的免疫作用研究进展被引量：4
- 2022年
- 家蚕(Bombyx mori)在高密度饲养过程中容易遭受各类病原微生物的感染,常对养蚕业造成重大经济损失。家蚕通过自身先天性免疫系统来抵抗这些病原微生物的侵害,在这一防御系统的所有组成部分中,抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)是家蚕先天性免疫反应的下游效应子。目前已经证实家蚕抗菌肽有6个家族,即cecropin、defensin、moricin、gloverin、lebocin和Attacin。本文介绍了家蚕合成抗菌肽的分子机制,总结了家蚕抗菌肽的分类及免疫作用研究进展,并对家蚕抗菌肽的防御机制研究进行了讨论和展望,以期为后续抗菌肽研究提供参考。
- 吕丁丁吴承月郭锡杰
- 关键词：家蚕抗菌肽病原微生物免疫作用
- 家蚕抗菌蛋白Attacin 1对球孢白僵菌的抗菌活性及抗菌肽Cecropin A的表达特征
- 抗菌肽是宿主在免疫过程中产生的一类重要抗菌复合物。家蚕Attacin1(BmAttacin1)蛋白是抗菌肽中的一种，其开放阅读框(ORF)编码214个氨基酸。我们的前期研究中发现BmAttacin1基因在球孢白僵菌（Be...
- 胡丛武
- 关键词：家蚕抗菌肽球孢白僵菌抗菌活性
