贵州省优秀科技教育人才省长资金项目(2005144)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：袁军解志杰吴军安邦全杨永红更多>>
- 相关机构：贵州省人民医院第三军医大学更多>>
- 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目国家自然科学基金贵州省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外抗原诱导小鼠T细胞对NK细胞功能的抑制及其可能分子机制研究被引量：1
- 2007年
- 目的:为了探讨抗原诱导T细胞抑制对NK细胞功能的抑制及其可能机制。方法:在体外,分别利用抗原、抗原+抗CD80抗体、刀豆蛋白A、抗CD3抗体先行诱导小鼠T细胞,并于诱导后24、48、72、96小时分别引入NK细胞,通过51Cr释放试验动态观察NK细胞的功能状况,激光共聚焦显微镜观察T细胞抑制NK细胞功能的作用模式,同时用RT-PCR方法检测经诱导的T细胞Bc1与Bc2表达情况。结果:①各组在24、48、72小时相点,上清液对NK功能均无显著影响,而到96小时,抗原激活组与抗原+抗CD80抗体诱导组两组上清液对NK细胞的杀伤能力表现出促进作用,与其它各时相点相比有统计学意义(P<0.05),且后者低于前者,二者相比也具统计学意义(P<0.05)。②刀豆蛋白A与抗CD3抗体刺激组T细胞从T细胞接受刺激24小时起至96小时,均表现了抑制NK细胞功能。抗原+抗CD80抗体耐受诱导组与抗原激活组T细胞则是在诱导后48小时方表现出对NK细胞的抑制,与其它两组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。③只有同种抗原剌激48小时的细胞培养物可检出Bc1、Bc2。其他时相、其他细胞刺激剂作用下均未能检出Bc1,Bc2的表达。结论:经诱导的T细胞能以直接接触的方式抑制NK细胞功能,但不同诱导剂活化的T细胞引起NK细胞抑制的机制可能不同。小鼠HLA-G的类似物-Bc1与Bc2的表达与抗原信号有关,抗原诱导的小鼠T细胞可能通过表达Bcl与Bc2来抑制NK细胞的功能,从而参与移植耐受的形成,这一结论提示这类非经典MHCI类分子有可能成为移植耐受的检测标志。
- 袁军吴军解志杰王庆红王小娟胡婕
- 关键词：NK细胞器官移植免疫耐受
- 体外抗原诱导T细胞对NK细胞功能的抑制作用及其影响因素
- 2007年
- 目的研究①体外抗原诱导后,T细胞对NK细胞功能的抑制及其机制。②APC及不同T细胞亚群对这一过程的影响。方法①分离小鼠APC及T细胞,按1∶3混合后分组进行诱导,48h加入NK细胞通过51Cr标准4h释放实验观察NK细胞功能状况;激光共聚焦显微镜观察T细胞对NK细胞功能的抑制作用;RT-PCR法检测抗原诱导后小鼠T细胞bc1、bc2的表达。②标准51Cr释放试验检测NK细胞功能以观察CD4+CD25+T细胞,抗原诱导的CD4+及CD4-T细胞对NK的抑制以及APC对体系中T-NK细胞间相互作用的影响。结果①51Cr释放率分别为:Anti-CD80诱导组21%,抗原激活组24.4%,细胞对照组34%,无T细胞对照组32%,前3组上清液与NK细胞作用后靶细胞51Cr释放率分别为34%、31.6%、33.1%。1、2两组51Cr释放率显著低于其余各组(P<0.01),两组间无显著性差异。无T细胞对照组及各组上清液中51Cr释放率无显著性差异。共聚焦显微镜下可观察到T细胞与NK细胞的直接接触。经抗原诱导48h的细胞培养物可检出bc1、bc2的表达。②祛除或未祛除APC两组51Cr的释放率均显著低于各对照组,且两组间无显著性差异(P>0.05)。CD4+CD25+T细胞组与CD4+T细胞组,51Cr释放显著低于其他各组(P<0.01),且前者显著低于后者(P<0.05);CD4-T组与两对照组间无显著性差异。结论①抗原诱导T细胞对NK细胞的抑制作用可通过直接接触的方式,与共刺激因子CD80无关。T细胞上bc1、bc2表达是T细胞抑制NK细胞的可能分子机制之一;②抗原诱导的APC单独或通过T细胞均不能抑制NK细胞功能,提示T细胞对NK细胞的抑制是APC非依赖性的。抗原诱导后CD4+T细胞群体对NK细胞功能有显著抑制,而CD4-群体则无此特性。CD4+CD25+T细胞在无抗原参与情况下对NK细胞有显著性抑制作用。
- 袁军王庆红王小娟解志杰郑峻松王锡华罗高兴吴军
- 关键词：T细胞NK细胞抗原
- ConA刺激对CD^4＋CD25^＋调节性T细胞趋化特性及其表面趋化因子受体CCR4／CCR6表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:体外动态观察ConA激活的调节性T细胞表面趋化因子受体的表达变化及其趋化特性,为利用调节性T细胞诱导免疫耐受提供线索。方法:①流式细胞仪分选出CD4hiCD127loCD25hi-int细胞。②纯化的调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞分别用ConA(10μg/ml)刺激0、24和48小时后,用趋化因子CCL1、CCL5、CCL20、CCL22做趋化实验,观察各趋化因子作用下调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞的趋化特性。同时,流式细胞仪检测CCR4与CCR6的表达。结果:①分离得到的调节性T细胞纯度为97.4%,活细胞率为95%,得率:4.1%。②CCL1、CCL20、CCL22均可趋化调节性T细胞,且在ConA激活后趋化效率随时间而改变。CCL1与CCL22对调节性T细胞的趋化指数显著高于CD4+CD25-T细胞;CCL20对调节性T细胞和CD4+CD25-T细胞趋化指数都很高;CCL5对调节性T细胞趋化性则显著弱于CD4+CD25-T细胞。③ConA刺激后,调节性T细胞趋化因子受体CCR4、CCR6的表达均明显高于对照组细胞(CD4+CD25-细胞)。随着ConA刺激时间延长,两组细胞CCR4的表达均持续增强;两组细胞CCR6的表达均在刺激24小时后表达明显增强,48小时后CCR6的表达略有减弱,呈下降趋势。结论:①磁珠阴性分选结合流式细胞仪技术可分选出较高纯度及活率的调节性T细胞。②调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞相比,二者具有不同的趋化特性。CCL1对调节性T细胞的趋化作用较特异,CCL22趋化作用较强,CCL5趋化作用较弱。而CCL20对CD4+CD25-T细胞和调节性T细胞趋化作用都强。③ConA刺激后48小时内趋化因子CCL1、CCL20、CCL22对调节性T细胞的趋化作用随刺激时间而增强。④ConA刺激可以增强受体CCR4、CCR6表达。⑤提示趋化因子受体的表达与细胞活化状态有关,且不同受体表达变化趋势不同。
- 袁军王树辉杨永红安邦全李贵芳吴军解志杰
- 关键词：趋化因子趋化因子受体流式细胞仪
- ConA刺激对CD4^+CD25^+调节性T细胞趋化特性及其表面趋化因子受体CCR4/CCR6表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的体外动态观察ConA激活的调节性T细胞表面趋化因子受体的表达变化及其趋化特性,为利用调节性T细胞诱导免疫耐受提供线索。方法常规分离正常健康人外周血单个核细胞,免疫磁珠阴性分选CD4+T细胞;加FITC-An-tiCD4抗体,APC-AntiCD25抗体,PE-AntiCD127抗体上流式细胞仪分选出CD4hiCD127loCD25hi-int细胞。纯化的调节性T细胞与CD4+CD25-T分别用ConA(10μg/mL)刺激0、24、48h后,用趋化因子CCL1、CCL5、CCL20、CCL22做趋化实验,观察各趋化因子作用下调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞的趋化特性。同时,流式细胞仪检测CCR4与CCR6的表达。结果分离得到的调节性T细胞纯度为97.4%,活细胞率为95%,得率:4.1%。CCL1、CCL20、CCL22均可趋化调节性T细胞,且在ConA激活后趋化效率随时间而改变。CCL1与CCL22对调节性T细胞的趋化指数显著高于CD4+CD25-T细胞;CCL20对调节性T细胞和CD4+CD25-T细胞趋化指数都很高;CCL5对调节性T细胞趋化性则显著弱于CD4+CD25-T细胞。ConA刺激后,调节性T细胞趋化因子受体CCR4、CCR6的表达均明显高于对照组细胞(CD4+CD25-T细胞)。随着ConA刺激时间延长,两组细胞CCR4的表达均持续增强;调节性T细胞CCR6的表达在刺激24h后表达明显增强,48h后CCR6的表达略有减弱,呈下降趋势。对照组细胞CCR6的表达也呈现相似的趋势。结论1)磁珠阴性分选结合流式细胞仪技术可分选出较高纯度及活率的调节性T细胞。2)调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞相比,二者具有不同的趋化特性。CCL1对调节性T细胞的趋化作用较特异,CCL22趋化作用较强,CCL5趋化作用较弱.而CCL20对CD4+CD25-T细胞和调节性T细胞趋化作用都强。3)ConA刺激后48h内趋化因子CCL1,CCL20,CCL22对调节性T细胞的趋化作用随刺激时间而增强。4)ConA刺激可以增强受体CCR4、CCR6表达。提示趋化因子受体的表达与细胞活化状态有关,且不同受体表达变化趋势不同。
- 袁军王树辉杨永红安邦全李桂芳吴军解志杰
- 关键词：趋化因子趋化因子受体流式细胞仪
