国家自然科学基金(31270136)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 利用同框敲除技术研究Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的代谢产物
- 2016年
- 为了阐明Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的功能,利用同源双交换的方法对该基因进行同框敲除,采用异位表达的方法进行了相应的回补实验。通过高效液相色谱及液相色谱-质谱联用分析发现基因orf18的敲除会明显降低发酵产物中苯甲酸盐的含量,回补该基因能够在一定程度上恢复苯甲酸盐的产量,表明orf18在原宿主中极有可能参与苯甲酸盐的生物合成。
- 原海亮管仁艳何璟
- 关键词：链霉菌
- 链霉菌GEMSM4(6)中聚酮合酶和非核糖体多肽合成酶基因的筛选及克隆被引量：4
- 2015年
- 链霉菌GEMSM 4（6）的发酵产物具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌的活性,同时还对酵母及丝状真菌尤其是植物病原菌,具有较强的抑制作用。本研究利用简并性引物对该链霉菌基因组中可能存在的聚酮合酶（PKS）和非核糖体多肽合成酶（NRPS）基因进行PCR扩增及序列分析,找到了3个NRPS及15个PKS基因的片段,其中PKS基因与Streptomyces violaceusniger Tu 4113的PKS基因序列同源性最高,达到91%~99%;而NRPS基因与数据库中已知的NRPS基因序列同源性仅为60%~62%。为克隆NRPS生物合成基因簇,构建了链霉菌GEMSM 4（6）的基因组细菌人工染色体（BAC）文库,通过PCR筛选得到包含有这3个NRPS基因的克隆子,为后期的异源表达及基因组发掘分析提供基础。
- 李娜黄胜何璟
- 关键词：链霉菌聚酮合酶细菌人工染色体文库
- 链霉菌SH-62中肠菌素生物合成基因簇的克隆及异源表达被引量：2
- 2015年
- 通过生物信息学分析,在链霉菌SH-62的基因组中发现一个Ⅱ型聚酮合酶基因簇(ents),与已报道的来源于Streptomyces maritimus的肠菌素生物合成基因簇具有高度的相似性。通过构建和筛选链霉菌SH-62的基因组细菌人工染色体(BAC)文库,克隆得到完整的ents基因簇。将ents基因簇导入白色链霉菌中进行异源表达,HPLC和LC-MS分析结果表明该基因簇负责肠菌素的生物合成,从而证实了ents基因簇的生物学功能。
- 张怡鲁洲黄胜何璟
- 关键词：细菌人工染色体白色链霉菌异源表达
- 放线菌基因组大片段克隆载体及异源表达宿主改造的研究进展被引量：2
- 2013年
- 大规模基因组测序发现放线菌基因组内包含有极丰富的天然产物合成基因,是非常有价值的资源。放线菌基因组中负责天然产物合成的基因通常成簇存在。要想完整地克隆这些较大的基因簇并且进行功能研究,或者通过异源表达激活原本沉默的天然产物合成基因簇,需要大容量的载体系统和合适的异源宿主。本文重点介绍了放线菌中常用于基因组大片段克隆的载体及异源表达宿主改造的研究进展。
- 朱梦奕何璟
- 关键词：放线菌
- 利用基因组发掘技术指导链霉菌SH-62中活性天然产物的分离及鉴定
- 2016年
- 通过生物信息学分析,利用基因组发掘技术发现链霉菌SH-62基因组中至少含有37个次级代谢产物的生物合成基因簇,除了有4个基因簇分别与已知的肠道菌素、潮霉素A、尼日利亚菌素和格尔德霉素的生物合成基因簇具有高度同源性以外,其他基因簇的功能鲜见报道。在不同发酵培养基上培养链霉菌SH-62,利用高分辨率的LC-MS对发酵产物进行分析,发现链霉菌SH-62确实能够产生肠道菌素、潮霉素A和尼日利亚菌素,从而证明了基因组发掘策略确实能够指导代谢产物的分离及鉴定。
- 鲁洲周俊何璟
- 关键词：生物合成基因簇
