国家自然科学基金(30870968)
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 相关作者：李连宏毛俊陶雅军张晴晴王波更多>>
- 相关机构：大连医科大学泰山医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乳腺癌Notch1、MMP-9及COX-2蛋白表达与淋巴道转移和预后的相关性被引量：2
- 2010年
- 目的:通过检测Notch1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及环氧化酶-2(COX-2)在乳腺癌细胞中的表达情况探讨它们与乳腺癌淋巴结转移和预后的关系。方法:采用免疫组化SP法检测Notch1、MMP-9及COX-2蛋白在106例乳腺浸润性导管癌(有淋巴结转移者65例,无林巴结转移者41例)中的表达,并用多因素Cox比例风险模型评估患者的预后。结果:Notch1、MMP-9及COX-2的表达在有淋巴结转移组与无转移组之间的差异均有统计学意义(P<0.05),与乳腺癌淋巴结转移呈正相关;Notch1的表达随着乳腺癌病理分级的增高而增强;Notch1表达高者生存期短。结论:乳腺癌Notch1、MMP-9及COX-2蛋白表达与淋巴道转移有关,检测这几种蛋白将有助于判断乳腺癌的转移潜能及预后。
- 李传伟王学春龙跃洲崔圣莹范姝君王波李连宏
- 关键词：乳腺癌NOTCH1淋巴道转移基质金属蛋白酶-9环氧化酶-2
- Smoothened shRNA载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的构建并筛选Smoothened(SMO)基因的RNAi表达质粒,了解Hedgehog信号通路影响乳腺癌细胞增殖的作用机制。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导转染乳腺癌MCF-7细胞。转染后48 h,采用实时定量RT-PCR技术检测转染细胞中SMO基因mRNA的转录水平,筛选有效的SMO RNAi质粒,Western blot检测SMO蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,CCK-8法比较转染前后乳腺癌细胞增殖变化,实时定量RT-PCR检测SMO短发夹状RNA(shRNA)对cyclinD1 mRNA表达的影响。结果 4个SMO shRNA表达载体SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3和SMO shRNA-4经测序鉴定证明插入正确。转染48 h后,与MOCK组相比,SMO shRNA-1、SMOshRNA-3、SMO shRNA-4组SMO mRNA表达量均下降(P=0.015、0.002、0.000),其中转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞中SMO mRNA表达水平低于SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3组(P=0.007、0.000、0.046)。SMOshRNA-4干扰抑制效率为87%。Western blot可检测到SMO在MCF-7中的表达,干扰片段SMO shRNA-4的抑制效果较好。转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),转染SMO shRNA后cyclinD1 mRNA表达下降(P=0.000)。结论已成功构建并筛选出SMO基因的RNAi表达质粒,SMO shRNA对乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用,Hedgehog信号通路可通过活化cyclinD1诱导细胞恶性增殖。
- 陶雅军毛俊张晴晴李连宏
- 关键词：SMOOTHENEDSHRNA增殖CYCLIND1
- Hedgehog信号通路在乳腺癌CD_(44)^+ CD_(24)^-细胞中激活被引量：1
- 2011年
- 目的了解Hedgehog信号通路在乳腺癌发生发展中的作用。方法采用免疫磁珠法从无血清培养的乳腺癌悬浮细胞中分选CD44+CD24-细胞和非CD44+CD24-细胞,分别接种于NOD/SCID鼠乳腺脂肪垫内,观察成瘤情况。采用real-time RT-PCR技术检测Hedgehog信号通路分子SMO和GLI1在CD44+CD24-细胞和非CD44+CD24-细胞中的表达情况。结果分选出的CD44+CD24-细胞约占细胞总数的2.25%,SMO mRNA和GLI1 mRNA在CD44+CD24-细胞中的表达均高于其在非CD44+CD24-细胞中的表达(P均<0.05)。CD44+CD24-组乳腺癌发生率为100%(3/3),发生肺转移、淋巴结和肺转移、肝脏和淋巴结转移各1只;非CD44+CD24-细胞组乳腺癌发生率为50%(2/4),未见有转移发生。结论在乳腺癌CD44+CD24-细胞中Hedgehog信号通路分子表达增强,其与乳腺癌的浸润转移关系密切。
- 陶雅军毛俊张晴晴李连宏
- 关键词：HEDGEHOG信号通路乳腺肿瘤
- RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响被引量：12
- 2012年
- 目的探讨RNA干扰技术沉默Notch1基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成靶向Notch1基因的小分子干扰RNA质粒,在转染试剂Sofast介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,用RT-PCR和Western blot法检测转染前、后Notch1基因的表达,挑选干扰效率最强的一组表达载体;cck8比色法检测分析各组细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡比例;Western blot法检测转染各组MCF-7细胞Notch1、NF-κB及Caspase-3蛋白表达。结果 Notch1-shRNA能有效封闭Notch1基因的表达,Notch1基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Notch1-shRNA能明显抑制细胞增殖(P<0.05);转染48h后细胞凋亡比例增加(P<0.01)。NF-κB蛋白水平表达降低,Caspase-3蛋白表达水平增高。结论利用RNA干扰技术沉默Notch1基因的表达可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节相关凋亡蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡和增殖,靶向Notch1的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值。
- 毛俊牟秋菊李连宏陶雅军范姝君王波于晓棠
- 关键词：乳腺肿瘤NOTCH1RNA干扰凋亡
- 乳腺癌组织中EGF和ALDH1A1的表达及其临床意义被引量：3
- 2012年
- 目的研究表皮生长因子(EGF)与乙醛脱氢酶(ALDH1A1)在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的表达及意义,探讨EGF在乳腺癌干细胞演进过程中的作用。方法采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测24例正常乳腺组织和45例乳腺浸润性导管癌组织中EGF和ALDH1A1的表达情况。结果 RT-PCR结果显示,乳腺癌中EGF与ALDH1A1的mRNA水平高表达,在正常乳腺组织中低表达或不表达,两组比较P<0.01。免疫组化结果显示,EGF在正常乳腺与乳腺癌中的表达分别为20.8%和75.6%,ALDH1A1在正常乳腺与乳腺癌中的表达分别为16.7%与66.4%,乳腺癌中EGF与ALDH1A1蛋白水平表达明显高于正常组织(P<0.01)。EGF与ALDH1A1两者在乳腺癌中表达存在正相关(P<0.05)。EGF的表达与发病年龄、肿瘤大小、组织学分型、有无淋巴结转移、PR表达无相关性,与ER表达呈正相关(P<0.01);ALDH1A1的表达与发病年龄、肿瘤大小、有无淋巴结转移、ER、PR表达无相关性,与组织学分型呈正相关(P<0.05)。结论 EGF与ALDH1A1在乳腺癌组织中的表达高于正常乳腺组织,EGF与乳腺癌干细胞的发生发展关系密切。
- 毛俊张晴晴李连宏王波范姝君于晓棠
- 关键词：乳腺肿瘤表皮生长因子肿瘤干细胞
- 在乳腺癌干细胞中Hedgehog信号通路相关基因表达增强被引量：1
- 2011年
- 目的了解Hedgehog信号通路在乳腺癌发生发展中的作用。方法用免疫磁珠法从无血清培养的乳腺癌悬浮细胞中分选CD44+CD24-细胞和非CD44+CD24-细胞,用real-time RT-PCR法检测Hedgehog信号通路主要分子SHH、PTCH1、SMO和GLI1 mRNA在细胞中的表达,用免疫组织化学法检测上述因子在乳腺癌组织中的表达。结果分选出的CD44+CD24-细胞约占乳腺癌悬浮细胞总数的8.25%,分选出的CD44+CD24-细胞表达干细胞标志蛋白ALDHA1和Oct-4;SHH、PTCH1、SMO和GLI1 mRNA在CD44+CD24-细胞中的表达均高于其在非CD44+CD24-细胞中的表达(P<0.05);SMO和GLI1蛋白在三阴性乳腺癌的表达均高于非三阴性乳腺癌组织(P<0.05)。结论在乳腺癌干细胞CD44+CD24-细胞中Hedgehog信号通路被激活,抑制癌症干细胞中Hedgehog通路的活化可能会降低或阻止乳腺癌的复发及化疗耐受。
- 陶雅军毛俊张晴晴李连宏
- 关键词：HEDGEHOG信号通路乳腺癌
