国家自然科学基金(30970872)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：姜蓉王建伟左国伟陈地龙官涛更多>>
- 相关机构：重庆医科大学大理学院重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结缔组织生长因子全长及其缺失突变体重组腺病毒的构建和鉴定
- 2011年
- 目的:结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)含有4个不同功能结构域,构建表达带有3×Flag标签的全长基因及5个缺失突变体的重组腺病毒,以研究CTGF各结构域的功能和作用机制。方法:通过聚合酶链反应(Polymerasechain reaction,PCR)等克隆方法制备目标质粒DNA,然后通过腺病毒穿梭载体与骨架载体的重组、包装构建全长CTGF和缺失突变体重组腺病毒。用anti-Flag抗体作为一抗做Western blot检测目的基因表达情况。结果:通过腺病毒基因组DNA PCR确认有CTGF全长和缺失突变体的存在;Western blot法验证了CTGF全长和缺失突变体的表达。结论:成功构建了6个表达CTGF全长和缺失突变体的重组腺病毒,为进一步研究CTGF的结构域功能奠定了基础。
- 孙双双陈红唐敏施琼黎玉叶王建伟周兰何通川左国伟
- 关键词：结缔组织生长因子缺失突变体重组腺病毒
- 放射致小鼠骨髓造血细胞损伤与衰老模型的建立被引量：1
- 2012年
- 目的建立放射致小鼠骨髓细胞损伤与衰老模型。方法取50只小鼠,随机分为对照组和4.0、6.5、8.5和10.5 Gy不同剂量照射实验组,观察小鼠30 d存活率。另取20只小鼠,分别于6.5 Gy照射后第1、3、7和30天检测外周血血常规及骨髓单个核细胞(Mononuclear cells,MNCs)数的变化,观察骨髓造血细胞大小及形态并计数集落数量,流式细胞仪检测骨髓MNCs凋亡情况,采用衰老相关的β-半乳糖苷酶(Senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色法检测SA-β-gal活性,细胞免疫荧光法分析p16Ink4a蛋白的表达水平。结果小鼠30 d存活率对照组和4.0 Gy实验组均为100%,6.5 Gy实验组为80%,8.5及10.5 Gy实验组均为0。6.5 Gy一次性全身照射后第1、3、7、30 d,小鼠外周血白细胞、血小板、骨髓MNCs数、CFU数量均下降,以照射后第3天最明显,第7天开始恢复正常;照射后骨髓MNCs凋亡率与对照组[(7.32±1.87)%]相比,均明显升高(P<0.05),第3天最高[(35.71±0.30)%],随时间的延长凋亡率逐渐下降;SA-β-gal染色和细胞免疫荧光染色结果显示,照射后阳性细胞率与对照组比较,均明显升高(P<0.05),以第3天最高,随时间延长逐渐降低。结论以6.5 Gy照射,可建立小鼠的骨髓造血细胞损伤与衰老模型,为进一步筛选抗骨髓抑制的药物奠定了基础。
- 闫玲玲姜蓉李春莉左国伟高焕庆陈地龙龙轩王建伟
- 关键词：细胞损伤衰老
- 人参皂苷Rg1在造血干／祖细胞连续移植中对抗细胞衰老的作用研究被引量：8
- 2013年
- 目的:探讨人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1+HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。60Coγ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组:对照组、衰老模型组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组。荧光定量PCR检测受体鼠骨髓细胞Y染色体(Sry基因)表达,确定受体鼠重建造血细胞来源;观察受体鼠存活时间及外周血血象指标的恢复,确定受体鼠造血功能重建情况及Rg1促进造血恢复情况;造血祖细胞混合性集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学特点及Rg1体内调控Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。结果:雌性受体鼠重建造血细胞来源于雄性供体鼠;连续移植后受体鼠30 d存活率明显降低,外周血象恢复延缓,Sca-1+HSC/HPC出现细胞衰老特征:G0/G1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组受体鼠30 d存活率,WBC,HCT,PLT增高,Sca-1+HSC/HPC G0/G1期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高。Rg1延缓衰老组变化较Rg1治疗衰老组明显。结论:人参皂苷Rg1在HSC/HPC连续移植过程中具有延缓和治疗Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。Rg1延缓衰老作用优于Rg1治疗衰老作用。
- 周玥王建伟姜蓉姚欣杨斌蔡世忠刘俊刘典锋王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1造血干祖细胞抗衰老
- 人参总皂苷对K562细胞的增殖抑制及诱导分化作用被引量：2
- 2011年
- 目的:研究人参总皂苷TSPG对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖及分化的影响,探讨TSPG抗肿瘤作用。方法:取对数生长期K562细胞,分为阴性对照组、不同浓度TSPG组及阳性对照组进行体外培养,以噻唑蓝(MTT)比色法、台盼蓝活细胞计数法观察TSPG对K562细胞增殖的影响;用联苯胺染色及血红蛋白测定检测其诱导K562细胞向红系细胞分化情况;采用流式细胞术测定细胞凋亡。结果:MTT和台盼蓝计数显示TSPG浓度在200 mg/L-800mg/L范围内对K562细胞增殖有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性。联苯胺染色提示不同浓度TSPG作用K562细胞的阳性率与对照组比较无明显差异;血红蛋白测定结果显示不同浓度TSPG作用K562细胞的血红蛋白含量与对照组相比有显著差异(P<0.05),但不同浓度TSPG组间并无差异。流式细胞术检测结果显示TSPG400 mg/L组细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TSPG不仅能抑制K562细胞增殖,还可以诱导其分化,TSPG增殖抑制作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。
- 雷翠蓉姜蓉王红宁何轩左国伟陈地龙官涛王建伟
- 关键词：人参总皂苷K562细胞增殖抑制分化
- 人参皂苷Rg1对白消胺诱导细胞衰老的延缓作用
- 2012年
- 目的探讨人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对白消胺(Busulfan,BU)诱导的人胚肺成纤维细胞衰老的延缓作用。方法将人胚肺成纤维细胞(<24代)随机分为空白对照组(常规培养)、BU组(以120μmol/L BU处理复制细胞衰老模型)、BU+Rg1组(120μmol/L BU+10μmol/L Rg1)、Rg1预+BU组(10μmol/L Rg1预处理后加入120μmol/L BU)和Rg1预+BU+Rg1组(10μmol/L Rg1预处理后加入120μmol/L BU,再加入10μmol/L Rg1),通过倒置显微镜观察细胞形态的变化,细胞增殖试验检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期的分布;半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察细胞衰老情况。结果 BU组细胞胞体扁平、宽大、不规则,出现空泡,而Rg1处理各组细胞的衰老表型出现一定程度的改善,以Rg1预+BU+Rg1组效果最佳,但未完全恢复;BU组细胞增殖能力较空白对照组明显降低,Rg1处理组细胞增殖能力有所恢复,且随着时间的延长效果越明显,其中以Rg1预+BU+Rg1组最佳;Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组G2/M期比例较BU组显著降低(P<0.05),其中以Rg1预+BU+Rg1组降低最明显;Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组衰老细胞数较BU组显著降低(P<0.05)。结论 Rg1能有效对抗BU诱导的细胞早衰,其具体作用机制有待进一步深入研究。
- 王红宁闫玲玲李春莉官涛姜蓉左国伟陈地龙龙轩王建伟
- 关键词：人参皂苷人胚肺成纤维细胞细胞增殖能力细胞增殖情况
