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排序方式：

组织因子途径抑制物基因的改造及其在毕赤酵母中的表达: 目的实现TFPI全长蛋白在酵母中的分泌表达。方法通过RNA structure 4．2分析发现TFPI mRNA序列中存在可能影响蛋白翻译的茎环结构。利用PCR方法对相关序列进行同意突变完成基因优化。以pPIC9K为载体...; 梁旺孔德生蔡旭郭泓坤彭卓醇刘静马端; 关键词：组织因子途径抑制物毕赤酵母; 文献传递

重组TFPI缺失突变体TFPI_(1-161)在毕赤酵母中的高效表达及功能鉴定被引量：2: 2004年; 人组织因子途径抑制物 (TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI1 - 1 6 1 仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域 ,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒pGEM 3Zf( ) TFPI为模板 ,用PCR方法获得TFPI1 - 1 6 1 基因 ,构建表达质粒pPIC9K TFPI1 - 1 6 1 并转化毕赤酵母GS115。通过筛选多拷贝转化子及优化发酵培养条件 ,首次在毕赤酵母中高效表达了TFPI1 - 1 6 1 ,经纯化后最终产量高于酿酒酵母 2 0倍以上。由于糖基化程度不同 ,TFPI1 - 1 6 1 表达为TFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和TFPI1 - 1 6 1 (2 7kD)两种分子形式 ,其等电点分别为 4 8和 4 9。根据等电点差异 ,二者可通过阴离子交换层析得到分离 ,其活性无显著性差异。经分子筛和阴离子交换层析分离纯化后 ,从 4L发酵培养液中可分别获得 1 4gTFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和 1 8gTFPI1 - 1 6 1 (2 7kD) ,其比活性分别达 12 880u mg和 12 4 0 0u mg ,回收率达 5 5 %。经稀释的凝血酶原时间及发色底物法检测 ,重组TFPI1 - 1 6 1 具有良好的抗凝及抑制FXa活性的作用。为获得大量TFPI1 - 1 6 1 提供了一种廉价高效的蛋白表达纯化方式。; 白浩马端宋后燕莫炜顾银良孔德升郭泓珅; 关键词：组织因子途径抑制物 PICHIA PASTORIS

组织因子途径抑制物在不稳定斑块发生的作用被引量：2: 2007年; 动脉粥样硬化最严重的后果之一是血栓形成。已知组织因子是血栓形成的起始因子,组织因子途径抑制物-1是组织因子的生理抑制剂,组织因子途径抑制物-2能抑制细胞外基质降解。通过分子改造,研制出重组人源性长效组织因子途径抑制物(rhlTFPI),其不仅能对抗动脉粥样硬化并发的血栓形成,而且能抑制内膜的增生。探讨rhlTFPI与斑块的稳定性及组织因子途径抑制物-2与细胞外基质降解关系,具有重要的理论意义;有助于今后应用rhlTFPI和重组组织因子途径抑制物-2维持斑块稳定、防治动脉粥样硬化疾病。; 黄成磊罗心平马端; 关键词：动脉粥样硬化组织因子途径抑制物

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上海市重大科技攻关项目(034319205)