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两株棉铃虫胚胎新细胞系的建立及其对杆状病毒侵染的反应被引量：6: 2010年; 昆虫细胞系的建立在病毒学和昆虫学等领域的研究和应用中发挥着重要的作用。本研究由棉铃虫Helicoverpa armigera胚胎组织建立了两株细胞系,分别命名为QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5,在含10%胎牛血清的TNM-FH培养基中已传代60余代。两株细胞系均以圆形和短梭形细胞为主。DAF鉴定结果表明,两株细胞系均来源于棉铃虫胚胎,其扩增谱带与其他几种昆虫细胞系明显不同;QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5的第30代细胞群体倍增时间分别为63.7h和66.9h。两株细胞系均能被棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)感染,4d的感染率分别为86.6%和56.5%,对甘蓝夜蛾Mamestra brassicae核型多角体病毒(MbNPV)7d的感染率均为15%左右,但对苜蓿银纹夜蛾Autographacalifornica核型多角体病毒(AcMNPV)侵染的反应不同。DAPI染色和基因组DNA电泳结果表明,AcMNPV可诱导QB-Ha-E-5细胞发生凋亡,极少数细胞内可形成多角体,但不能诱导QB-Ha-E-1细胞发生凋亡,其感染率为55.3%;两株细胞系均可被1.25μg/mL的放线菌素D诱导发生凋亡。两株细胞系具有相同的遗传背景,但对AcMNPV侵染的反应不同,可作为昆虫病毒和细胞之间相互关系以及细胞凋亡机制研究的理想材料。; 郑桂玲李长友周洪旭李淑文李国勋薛明; 关键词：棉铃虫胚胎细胞系杆状病毒侵染

昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4和Sf-9的无血清培养及其特性研究被引量：1: 2009年; 本研究对目前应用最多的两种昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4和Sf-9在无血清培养基Sf-900Ⅲ中进行驯化和培养,现已稳定传至45代以上。比较了两种细胞在Sf-900Ⅲ和有血清培养基TNM-FH中的细胞形态、生长速率、病毒产量和重组蛋白表达水平。结果表明,在Sf-900Ⅲ中Sf-9细胞比TNM-FH培养的略大,BTI-Tn-5B1-4的圆形细胞增多,BTI-Tn-5B1-4和Sf-9在Sf-900Ⅲ中生长速度快,群体倍增时间分别为18.5h和21.7h,而在TNM-FH中,BTI-Tn5B1-4和Sf-9的群体倍增时间分别为21.9h和25.4h;在两种培养基中BTI-Tn-5B1-4和Sf-9细胞的病毒感染率、多角体产量和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的表达水平均无明显差异,而碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)在Sf-900Ⅲ中的表达水平明显高于TNM-FH中的水平。; 李银花郑桂玲李长友马明李国勋; 关键词：昆虫细胞无血清培养蛋白表达

条件培养基对昆虫细胞BTI-Tn5B1-4及克隆株特性的影响被引量：2: 2010年; 研究了条件培养基对细胞BTI-Tn5B1-4及其克隆株特性的影响。用含20%条件培养基以2×105cells/ml浓度测定细胞生长曲线,并与新鲜培养基作比较。结果显示,含条件培养基的细胞培养中的最大浓度比对照培养基的浓度高,同时细胞群体倍增时间比对照培养基中缩短3～5小时。当用野生型病毒AcMNPV感染时,两种培养基中细胞敏感性均在93%以上,OB产量差异不显著。重组蛋白半乳糖苷酶和碱性磷酸酶表达量测定比较,结果显示条件培养基中两种重组蛋白表达量均比对照培养基中高大约10%。; 崔英伟李长友李国勋; 关键词：条件培养基昆虫细胞

三株烟草天蛾新细胞系的生长特性及重组蛋白表达: 2010年; 从尚未涉及的昆虫种类中建立新的细胞系能为基础研究和生物技术应用提供重要资源。本实验通过细胞培养技术,建立了3株来源于鳞翅目昆虫烟草天蛾Manduca sexta卵组织的新细胞系,分别命名为QB-Ms1-8,QB-Ms2-2和QB-Ms2-7。这3株细胞已经培养在TNM-FH培养基中,28℃条件下传代培养了约50代,大部分细胞呈梭形,细胞群体倍增时间分别为51,31和49h。虽然这3株细胞系对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)不够敏感,侵染后96h感染率在33%～40%之间,但是QB-Ms2-2细胞与BTI-Tn5B1-4细胞比较,分泌型碱性磷酸酶(SEAP)活性表达更高。本研究从建立的3株烟草天蛾新细胞系中筛选出SEAP高表达的细胞系QB-Ms2-2,为进一步细胞克隆和筛选提供了新资源。; 姜磊李国勋李长友Robert R.GRANADOSGary W.BLISSARD; 关键词：烟草天蛾重组蛋白苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒

粉纹夜蛾细胞系QB-Tn9-4s的克隆以及克隆株生物学特性的研究: 2009年; 对粉纹夜蛾Trichoplusiani细胞系QB-Tn9-4s进行细胞克隆,获得了8个细胞克隆株,分别命名为QB-Tn-A、B、C、D、E、F、G和H。对基因组DNA进行RAPD-PCR鉴定,各细胞克隆株与原始细胞系具有相同的DNA扩增谱带。各细胞克隆株在形态和生物学特性方面表现出一定的差异。克隆株QB-Tn-A、B、C、D和E以梭形细胞为主,大约占细胞总数的60%～80%;F、G和H以棒状细胞为主,比例分别为44.5%、49.5%和80.0%。8个克隆株对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)均较敏感,感染率均在92%以上,平均每个细胞病毒多角体(OBs)产量在78～110个之间,其中克隆株QB-Tn-A多角体产量最高达110个,略高于BTI-Tn5B1-4和QB-Tn9-4s,明显高于Sf-9细胞;克隆株QB-Tn-E、H、A和C的出芽性病毒(BV)产量与原始细胞系(3.37×107TCID50/mL)接近,而其它4株均低于原始细胞系。; 马明李长友郑桂玲李银花李国勋; 关键词：粉纹夜蛾细胞克隆 ACMNPV

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国家自然科学基金(30771451)