中国博士后科学基金(2005037576)
- 作品数：10 被引量：31H指数：4
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- 限制性内切酶色谱指纹—高效毛细管电泳激光诱导荧光分离检测pBR322/BsuRI DNA片段方法学研究
- 1 引言近年来,分离大分子 DNA 倍受人们关注,毛细管电泳(Capillary Electrophoersis,CE)分离技术被广泛地应用[1-3],但在测定实际样品时,由于管壁表面对 DNA 有较强的吸附,为了提高分...
- 王荣贾正平谢华陈巧云贾海张强
- 高效毛细管电泳用于以聚环氧乙烷为筛分介质分离DNA的机理研究被引量：4
- 2010年
- 用毛细管电泳以聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质对pUC19DNA/Msp Ⅰ(HpaⅡ)Marker中的12条DNA片段进行了分离,并尝试用Ogston模型、爬行模型以及线性模型对分离机理进行研究,最终发现26～147bp的小片段,在低电场强度时能很好地符合Ogston模型理论,而190～501bp中等长度的DNA片段电泳迁移率与其尺寸间存在很好的负相关的线性关系,为此,提出一种新的线性模型来进行解释.此外,还探讨了PEO的浓度和电场强度对分离的影响.其结论可更好地从理论上指导对中小片段DNA的分离,对肿瘤基因突变点的分析和PCR扩增产物的分离分析具有重要的意义.
- 王荣贾正平董亚蕾陈兴国谢华马骏辛晓婷李文斌王娟张强张军莉
- 关键词：高效毛细管电泳无胶筛分DNA分子聚环氧乙烷
- 毛细管电泳法检测胃癌APC基因第十一外显子的杂合缺失
- 2011年
- 采用聚合酶链反应(PCR)扩增了胃癌及癌旁正常组织中APC基因易发生杂合缺失的第十一外显子的部分碱基序列,扩增样品分别经96℃变性和RsaⅠ酶切处理,以毛细管电泳(CE)-单链构象多态性(SS-CP)、CE-限制性片段长度多态性(RFLP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-SSCP对其杂合缺失情况进行检测。PAGE凝胶浓度为15%。CE检测条件:以3.0%聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质,1×TBE(pH 8.2)为电泳缓冲液,分离电压15 kV,温度15℃,结合激光诱导荧光(λex=488 nm,λem=520 nm)检测。不同方法的检出率由高到低分别为:CE-SSCP(30%)>PAGE-SSCP(25%)>CE-RFLP(20%)。并证实了APC基因易发生杂合缺失在胃癌组织中的突变率高于10%,且CE-SSCP方法较PAGE-SSCP和CE-RFLP的检出率高。CE-SSCP检测方法具有快速、灵敏度高等优点,可为建立简便可靠的胃癌临床早期诊断方法奠定基础。
- 谢希晖王荣谢华贾正平张爱梅孟宪栋马骏
- 关键词：胃癌杂合缺失毛细管电泳单链构象多态性限制性片段长度多态性
- 毛细管电泳在神经递质测定中的应用被引量：4
- 2005年
- 目的:本文介绍了不同神经递质生理功能和临床意义,并主要综述了毛细管电泳在神经科学中的应用及测定神经递质的临床意义,为临床诊断和治疗多种脑神经疾病提供更为准确的依据。
- 王荣贾正平王维东马骏张强谢华
- 关键词：毛细管电泳神经递质脑神经疾病生理功能神经科学
- 肿瘤相关物毛细管电泳法检测的应用进展被引量：2
- 2008年
- 肿瘤相关物在肿瘤发生和增殖过程中起着重要的作用,它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质、恶性过程的特异性、整体瘤细胞荷载、肿瘤微弱转移的出现和预测肿瘤的复发。检测肿瘤相关物对肿瘤的诊断和治疗有重要的临床意义,该文对毛细管电泳及其相关联用技术在分析癌基因、抑癌基因及肿瘤生物标记物中的应用进行了总结和综述,引用文献42篇。
- 王荣贾正平贾海陈巧云谢华马骏李文斌
- 关键词：毛细管电泳
- 单链构象多态性毛细管电泳分析研究进展被引量：3
- 2006年
- 基因突变的检测在临床疾病诊断中起十分重要的作用.单链构象多态性(Single Strand Conform ationPolym orphism,SSCP)分析是检测突变最流行的方法之一.SSCP分析与毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)相结合的技术更是具有灵敏度高、花费低、简单、快速的优点.目前,这项技术已应用于人类原癌基因、抑癌基因以及其它致病基因的突变检测.主要综述了各种参数对CES-SCP分析的影响以及CES-SCP分析技术将来的发展方向.
- 陈巧云王荣贾正平贾海谢华
- 关键词：毛细管电泳单链构象多态性荧光标记
- 毛细管电泳-限制性片段长度多态性快速检测胃癌组织中P53基因点突变的方法被引量：13
- 2007年
- 为建立毛细管电泳快速高效检测小于70bp双链DNA的方法。对毛细管电泳过程中的各参数进行了考察,最终得到最佳分离体系(筛分介质浓度8%,添加剂甘露醇浓度8%,pH6.5,温度15℃,电场强度275V/cm),并将该体系用于临床59例胃癌患者肿瘤组织基因248位、249位密码子点突变情况的检测,30min之内同时检测了两个密码子位点的突变情况,实现了35bp和40bpDNA片段的基线分离,且分离度较高(1.642),初步建立了快速、高分辨诊断胃癌的方法。
- 陈巧云王荣贾正平王业秋刘圆圆谢华马骏
- 关键词：毛细管电泳限制性片段长度多态性基因突变
- 毛细管电泳-限制性：片段长度多态性分析检测胃癌H-ras基因点突变被引量：9
- 2009年
- 建立一种毛细管电泳快速高效检测限制性内切酶酶切产物的方法,使其更好地用于基因诊断.以甲基纤维素(Methyl cellulose,MC)为筛分介质,用pUC19 DNA/MspI(HpaⅡ)Marker标准DNA片段为实验对象,通过考察筛分介质的浓度、pH值、毛细管的温度和运行电压优化出分离小于600bp的双链DNA片段的最适条件,并将此方法应用于临床59例胃癌患者肿瘤组织H-ras基因12位密码子点突变情况的检测.MC是一种良好的筛分介质,运用其进行毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏。
- 刘圆圆王荣贾正平郭志强辛晓婷谢华马骏王娟李文斌
- 关键词：毛细管电泳甲基纤维素限制性片段长度多态性H-RAS基因突变
- 毛细管电泳法检测癌基因C-myc胃癌中基因点突变被引量：4
- 2011年
- 癌基因C-myc激活和突变在胃癌形成过程中起着重要作用。通过毛细管电泳(CE)方法检测50例胃癌患者中C-myc基因突变,建立一种准确、快速诊断早期胃癌的方法。本实验采用PCR扩增胃癌及癌旁正常组织中C-myc基因第二外显子易发突变的部位基因序列,扩增样品分别经96℃变性和EcoRⅤ酶切处理,以PAGE-SSCP,CE-SSCP,CE-RFLP分别对其突变情况进行检测。优化的CE检测条件:筛分介质PEO浓度3.0%,pH 8.2,电压15 kV,温度15℃;荧光检测:λex=488 nm,λem=520 nm。检测结果:C-myc基因总突变率为20.0%(10/50)。测序分析结果显示C-myc基因第二外显子第53密码子存在点突变,碱基A变为碱基T(GAT→GTT),碱基的改变使氨基酸由亮氨酸替代为谷氨酰胺。本研究数据证实C-myc基因突变与胃癌的形成紧密相关,CE检测C-myc突变基因可作为胃癌早期诊断的简便可靠的方法。
- 谢希晖王荣贾正平谢华张爱梅徐娟王晓莉王先华
- 关键词：胃癌突变毛细管电泳单链构象多态性限制性片段长度多态性
- 限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光法测定原核/真核质粒被引量：3
- 2007年
- 采用线性聚丙烯酰胺修饰石英毛细管的高效毛细管电泳无胶筛分技术,对原核/真核质粒用不同限制性内切酶酶切,运用限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光(REF-HPCE-LIF)检测法同时对内切酶酶切后多个和较长DNA片段进行了检测,电泳缓冲液为1×TBE(pH8.3),阴极电压进样(10kV,5s),分离电压13kV,25℃,激光诱导荧光检测器检测(λex=520nm)。结果表明,所建立的REF-HPCE-LIF方法可对原核/真核酶切后多个和较长DNA片段进行检测,获得了满意的限制性内切酶指纹图谱,能够检测片段大小相差不超过10bp。所建立的方法较琼脂糖电泳分辨率高,可应用在检测多个和较长DNA片段的突变,在诊断肿瘤方面有一定应用前景。
- 王荣贾正平阮金秀谢华陈巧云贾海张强徐娟敖燕
- 关键词：高效毛细管电泳限制性内切酶激光诱导荧光
