国家重点基础研究发展计划(2011CB512109)
- 作品数：7 被引量：34H指数：3
- 相关作者：李俊发韩松李淑娟杨璇尹艳玲更多>>
- 相关机构：首都医科大学首都医科大学附属北京朝阳医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- cPKCγ参与低氧预适应对小鼠脑缺血皮质内CRMP2水解和磷酸化的调节被引量：3
- 2012年
- 目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)在低氧预适应(HPC)调节小鼠脑缺血皮质内脑衰反应蛋白-2(CRMP2)水解和磷酸化中作用。方法利用雄性BALB/c小鼠(18～22 g)HPC和大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,借助蛋白印迹、免疫共沉淀和免疫组化等生物化学技术,观察cPKCγ激活对小鼠缺血脑皮质内CRMP2蛋白水解程度(BDP)和磷酸化水平(p-CRMP2)、cPKCγ-CRMP2相互作用和皮质缺血半影区内p-CRMP2阳性细胞数的影响。结果 HPC显著提高缺血脑皮质半影区内p-CRMP2水平,降低BDP产物形成(P<0.05),而侧脑室注射cPKCγ抑制剂Go6983(6nmol/L)可明显解除HPC对半影区内CRMP2蛋白水解和磷酸化的调节作用(P<0.05);免疫共沉淀结果提示,cPKCγ激活程度参与HPC对缺血脑皮质半影区内cPKCγ-CRMP2相互作用的调节;同时,cPKCγ激活与HPC提高脑缺血半影区内p-CRMP2阳性细胞数有关(P<0.05)。结论 cPKCγ参与HPC对小鼠缺血脑皮质内CRMP2水解与磷酸化的调节。
- 刘燕燕杨璇韩松苏吉儿罗宏李俊发
- 关键词：大脑中动脉阻塞
- miR-378负性调节caspase-3蛋白表达减轻氧-糖剥夺致小鼠N2A细胞缺血损伤被引量：1
- 2013年
- 目的探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研究。方法离体培养N2A细胞,采用3 h OGD/24 h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细胞生存率,蛋白印迹(Western blot)检测caspase-3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测miR-378和caspase-3 mRNA表达,荧光素酶报告基因验证miR-378对caspase-3 mRNA 3'非翻译区(UTR)的直接调控作用。结果 miR-378在N2A细胞内表达水平,随着3 h OGD复糖复氧时间的增加,而显著降低(P<0.05,n=5);在3 h OGD/24 h复糖复氧致N2A细胞缺血损伤中,上调或下调miR-378的表达水平可显著提高或降低N2A细胞生存率(P<0.05,n=6);而在非OGD条件下,miR-378表达水平改变对N2A细胞生存率则无明显影响;同样,在3 h OGD/24 h复糖复氧条件下,miR-378表达水平的改变可显著影响caspase-3蛋白表达(P<0.05,n=3)而非caspase-3 mRNA表达水平;共转染pri-miR-378可显著抑制含caspase-3 mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因的表达(P<0.05,n=6)。结论 miR-378可通过负性调节caspase-3蛋白表达水平,来减轻OGD致N2A细胞缺血损伤,所获实验结果有助于从miRNAs水平为缺血性脑卒中提供潜在的治疗靶点。
- 钟洁李洁霏郭颖韩松尹艳玲李淑娟李俊发
- 关键词：缺血性损伤N2A细胞
- 脑内源性cPKC gamma水平影响缺血性卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤被引量：3
- 2013年
- 目的探讨脑内源性经典型蛋白激酶C（cPKC）γ表达水平对脑中动脉阻塞（MCAO）／再灌注（R）致缺血性脑卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤程度的影响。方法利用cPKCγ基因野生型（WT）、杂合型（HET）和敲除型（KO）小鼠，建立小鼠1hMCAO／R24h和7d缺血性脑卒中模型，借助Westernblot蛋白印迹、2，3，5-氯化三苯基四唑（TTC）染色、神经行为学测试等技术方法，检测脑内源性cPKCγ蛋白表达水平、脑梗死体积和神经功能损伤情况。结果MCAO／R1h／24h和7d可使WT、HET和KO小鼠脑出现明显的梗死灶和神经功能损伤；具有双拷贝基因的wT小鼠脑内cPKCγ／蛋白表达量存在个体差异的同时，只有单拷贝基因的HET小鼠脑内cPKCγ蛋白表达水平约为wT型小鼠的30％～100％，而非简单的50％；脑内源性cPKCγ／蛋白表达量与卒中脑梗死体积大小呈明显的负相关性，且神经功能损伤程度随着脑内cPKCγ／蛋白表达水平的增高而明显减轻。结论脑内源性cPKCγ／蛋白表达水平可影响缺血性卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤程度。
- 李洁霏章欣欣钟洁杨璇李筠韩松李俊发
- 关键词：脑梗死体积基因敲除小鼠
- 缺血/低氧相关疾病微小RNA-210研究进展被引量：5
- 2013年
- 缺血/低氧是临床许多疾病的病理生理过程之一,而miRNA-210以其在缺血/低氧状态下的稳定性和功能的多样性引起了人们广泛关注。本文分析了在缺血/低氧状态下miRNA-210对线粒体新陈代谢和血管生成的影响;并且进一步阐述了miRNA-210在心肌梗死、中风和肿瘤等缺血/低氧性损伤疾病中的作用。
- 史雨晨刘翠英李俊发
- 关键词：缺血血管发生
- H型高血压增加脑梗死的复发风险被引量：17
- 2012年
- 目的探讨H型高血压与脑梗死复发风险的相关性。方法前瞻性观察2004年1月至2008年1月于北京朝阳医院神经内科住院的急性脑梗死患者656例,随访1年记录卒中复发情况并分为复发组和非复发组。同时于急性发病3d内采用高效液相色谱法测定血清同型半胱氨酸(Hcy)水平,以Hcy≥10μmol/L作为高同型半胱氨酸血症(HHcy)的标准。高血压伴HHcy者为H型高血压组,单纯高血压或单纯HHcy为非H型高血压组。结果 (1)656例急性脑梗死患者中111例复发,1年复发率为16.9%。(2)复发组患者83.8%具有高血压病史,明显高于非复发组的70.6%;血清同型半胱氨酸水平[(22.39±9.45)μmol/L]亦明显高于非复发组[(16.94±9.85)μmol/L],两组比较均具有统计学差异(P<0.01);复发组H型高血压的比例为78.2%,明显高于非复发组的65.1%(P<0.01)。(3)多因素Logistic回归分析结果显示影响脑梗死复发的独立危险因素有H型高血压、高龄、高血压、HHcy和低高密度脂蛋白。结论 H型高血压是脑梗死复发的独立危险因素,应综合防治卒中复发。
- 张玉杰李淑娟陈冬辉胡文立关明
- 关键词：脑梗死高血压高半胱氨酸
- 蛋白激酶Cγ在低氧预适应脑保护中的作用及其缺血性卒中鼠脑半影区内相互作用蛋白鉴定被引量：4
- 2013年
- 目的验证经典型蛋白激酶C(conventional protein kinase C,cPKC)γ在低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)诱导缺血脑保护中作用,同时利用HPC和cPKCγ阻断剂,鉴定脑缺血半影区内参与cPKCγ脑保护的信号蛋白。方法将健康成年雄性BALB/c小鼠,按数字表法随机分为常氧假手术(Sham)、常氧缺血(Ischemia,I)、二甲基亚砜溶剂处理后缺血(DMSO+I)、HPC预处理后缺血(HPC+I),以及cPKCγ抑制剂和HPC预处理后缺血(HPC+Go6983+I)等5组。应用小鼠整体HPC和脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)致缺血性脑卒中模型,借助蛋白印迹检测cPKCγ膜转位(激活)水平,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triph-enyltetrazolium chloride,TTC)染色观察脑梗死体积。采用cPKCγ免疫共沉淀、双向凝胶电泳和质谱等技术鉴定脑缺血半影区内cPKCγ相互作用蛋白结果。结果与常氧缺血I组相比,HPC+I组缺血核心区和半影区内cPKCγ膜转位水平明显增高,而cPKCγ抑制剂Go6983预处理则明显降低HPC+Go6983+I组缺血核心、半影区和对侧脑皮层内cPKCγ的膜转位水平(P<0.05,每组n=6)。cPKCγ抑制剂Go6983明显减弱HPC降低缺血性卒中小鼠脑梗死体积的保护作用(P<0.05,每组n=6)同时。Go6983明显抑制HPC+I组小鼠脑缺血半影区内cPKCγ与部分蛋白的相互作用,包括铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD)、DJ-1、UMP-CMP激酶、腺苷酸激酶、泛素末端水解酶(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1,UCHL1)、白介素-16(interleukin-16,IL-16)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)。结论cPKCγ通过对缺血半影区内部分相互作用蛋白的调节,参与HPC对缺血性卒中小鼠脑的神经保护作用。
- 韩松张楠尹艳玲赵丽罗艳琳李俊发
- 关键词：低氧预适应蛋白组学
- cPKCγ在HPC抗N2a细胞OGD损伤中作用及其分子机制被引量：2
- 2013年
- 目的在离体细胞水平,探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)在低氧预适应(HPC)对抗小鼠成神经瘤细胞(N2a)氧糖剥夺(OGD)损伤中作用及其可能的细胞分子机制。方法建立N2a细胞HPC和OGD模型,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、原位末端标记(TUNEL)和蛋白印迹(Western blot)几种方法,分别检测N2a细胞损伤、坏死、凋亡和自噬水平。结果 OGD 2和4 h可使N2a细胞的生存率显著降低、死亡率明显增高(P<0.05,n=6);HPC(20 min)明显改善OGD 3 h对N2a细胞的损伤作用,而cPKCγ抑制剂Go6983(6 nmol/L)则显著解除HPC对OGD细胞的保护作用(P<0.05,n=16);OGD 3 h明显增加N2a细胞的凋亡数目(P<0.05,n=6),但HPC和Go6983+HPC均不能明显影响OGD细胞凋亡水平;OGD 3 h显著提高N2a细胞的自噬水平,Go6983和HPC+Go6983均可明显降低OGD细胞的自噬水平(P<0.05,n=6),而HPC则对OGD细胞的自噬水平无明显影响;HPC明显改善OGD 3 h致N2a细胞坏死的程度,而Go6983则可解除HPC的保护作用(P<0.05,n=16)。结论在离体细胞水平证实了cPKCγ在HPC改善N2a细胞OGD损伤中的作用,且这种作用主要与降低OGD细胞的坏死水平有关。
- 罗宏苏吉儿韩松李俊发
- 关键词：细胞坏死
