国家教育部博士点基金(20121501110002)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：内蒙古大学长春医学高等专科学校更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
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- 人溶血磷脂酸受体2基因的克隆及其在293T细胞中表达
- 2013年
- 在以前的研究中我们发现溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)通过溶血磷脂酸受体2(Lysophosphatidic acid receptor 2,LPAR2)介导促进胃癌细胞迁移.为进一步研究LPAR2介导的信号转导机制与功能,本研究试图建立过表达的LPAR2转基因细胞模型.选用人胃癌SGC-7901细胞系的cDNA经RT-PCR法克隆得到LPAR2基因CDS区,并亚克隆到pMD19-T载体,通过测序确认后、经酶切、连接到表达载体pIRES2-EGFP,酶切和测序鉴定获得pIRES2-EGFP-LPAR2重组质粒;通过LipofectamineTM2000介导把表达载体质粒转染进293T细胞.Western Blot法检测结果说明人LPAR2蛋白在293T细胞中得到表达.
- 杨德志马爱民李铁威阿拉坦高勒
- 关键词：基因克隆基因表达
- 人溶血磷脂酸受体1基因的克隆、表达载体构建及瞬时转染293T细胞
- 2013年
- 从人胃癌细胞中提取RNA然后反转录成cDNA,进而PCR克隆LPAR1(Lysophosphatidic Acid Receptor1)基因,亚克隆到pCR2.1载体,通过测序、酶切、连接到表达载体pIRES2-EGFP,通过酶切、测序鉴定获得pIRES2-EGFP-LPAR1重组质粒;表达载体以Lipofectamine2000介导转染293T细胞。用Real-time PCR法检测外源基因在293T细胞中表达,并通过ELISA检测LPAR1的活性。结果表明,克隆到LPAR1基因并获得了pIRES2-EGFP-LPAR1表达载体,在293T细胞中确认到LPAR1基因的过量表达,并通过LPAR1/Gi信号通路抑制cAMP形成加以验证所克隆LPAR1活性。LPAR1过表达细胞模型的建立,不仅为下一步对该受体功能研究奠定了基础,还使利用LPA剂量依赖性的抑制cAMP的线性关系定量LPA的细胞学方法成为可能。
- 李铁威赵鹏飞马洁阿拉坦高勒
