国家自然科学基金(30771549)
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
- 相关作者：杨利国薛立群王水莲韩丽梁爱心更多>>
- 相关机构：华中农业大学湖南农业大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 新型生长抑素原核表达质粒的构建及表达鉴定被引量：4
- 2008年
- 将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)融合基因插入平衡致死系统原核表达质粒pYA3493中,转化至缺失asd基因的减毒猪霍乱沙门氏菌C500,经酶切、测序筛选得到非抗性的目的克隆,命名为pYA-SS。应用SDS-PAGE和Western blotting技术分离并检测融合蛋白在宿主菌中的表达活性。结果表明,本试验构建的非抗性筛选生长抑素原核表达质粒可以在宿主菌C500中稳定、正确表达。此研究为开发新型、高效、安全的促生长疫苗提供了可靠的研究材料。
- 梁爱心冯细钢韩丽滑国华桑雷刘兴斌刘耘杨利国
- 关键词：生长抑素原核表达
- 抑制素pCIS基因免疫对黄牛卵泡发育和生殖激素的影响被引量：7
- 2009年
- 分别用0(C)、0.75(T1)、1.50(T2)、2.25(T3)和3.0(T4)mg.头-1的抑制素pCIS基因疫苗免疫58头黄牛,以探讨抑制素pCIS基因免疫对卵泡发育和生殖激素的影响。结果表明,抑制素pCIS基因免疫组的大卵泡(d≥10 mm)数显著高于对照组(P<0.01),中卵泡(7 mm≤d<10 mm)数和小卵泡(4 mm≤d<7 mm)数与对照组均没有显著差异(P>0.05)。T1组左右两侧成熟卵泡大小与对照组差异不显著(P>0.05),其它3组两侧成熟卵泡均显著大于对照组(P<0.05)。抑制素pCIS基因免疫黄牛的促卵泡素(FSH)平均含量高于对照组,且在加强免疫阶段差异显著(P<0.05);加强免疫后雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量均显著增加,且均与对照组差异显著(P<0.05)。这些结果表明,抑制素pCIS基因免疫可促进FSH分泌,进而影响黄牛卵泡发育和成熟。
- 王水莲薛立群陈小军杨利国
- 关键词：抑制素基因免疫卵泡发育生殖激素黄牛
- 含抑制素重组质粒的减毒猪霍乱沙门氏菌C500遗传稳定性研究被引量：4
- 2009年
- 为了分析研究含抑制素重组质粒pVAX-IS-asd(以下简写为pXAIS)的crp(cAMP受体蛋白)和asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因双缺失猪霍乱沙门氏菌C500菌株的遗传稳定性。方法:将现有的无抗性抑制素重组表达质粒pXAIS转化入crp和asd基因双缺失猪霍乱沙门氏菌C500菌株(简称"空质粒株")中,得"含质粒株"。将"含质粒株"细菌在无选择压力条件下传代培养50代,利用酶切鉴定方法,分析"含质粒株"细菌中抑制素pXAIS质粒的稳定性;利用PCR方法扩增菌株("含质粒株"和"空质粒株")保守序列中invA基因,分析各代细菌的invA基因稳定性;通过比较传代培养后各代细菌的生长图型,分析"含质粒株"细菌传代后的生长规律。结果表明,"含质粒株"细菌连续传代50次后,仍能检出pXAIS质粒和invA基因,而且生长规律与"空质粒株"没有明显差异。说明含pXAIS质粒的猪霍乱沙门氏菌crp和asd基因双缺失株具有良好的遗传稳定性。
- 甄艳红韩丽梁爱心王庆玲杨利国
- 关键词：减毒沙门氏菌基因重组基因免疫
- 双拷贝抑制素基因免疫对肉牛卵泡和黄体的影响被引量：9
- 2010年
- 【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组,每组肉牛分别注射0.75(T1)、1.5(T2)、2.25(T3)、3.0mg/头(T4)pcISI质粒、3.0mg/头pcMV-S空质粒(C1)和3mL/头生理盐水(C2),初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著(P<0.05);T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05);T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05)。无论左侧还是右侧,各剂量组成熟卵泡直径均高于对照组,除了T1外,其它3组两侧成熟卵泡均与对照组差异显著(P<0.05)。无论左侧还是右侧,4个剂量组黄体直径均高于对照组,且均与对照组差异显著(P<0.05);T3黄体最大,T1最小,且T3与T1差异显著(P<0.05)。加强免疫后10d(BM10)抑制素抗体与成熟卵泡大小相关显著(r=0.629,P<0.05),与黄体大小相关极显著(r=0.651,P<0.01)。【结论】双拷贝抑制素pcISI基因免疫可促进肉牛卵泡和黄体发育,2.25mg为最佳免疫剂量,抑制素抗体水平与卵泡和黄体发育有一定的相关性。
- 王水莲薛立群邓立新崔先利杨利国
- 关键词：抑制素基因免疫卵泡肉牛
- 影响生长抑素重组质粒pEGS／2SS转染HeLa细胞效果的因素研究被引量：4
- 2010年
- 旨在分析生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)转染效果的影响因素,探讨最佳转染条件,为进一步研究生长抑素基因疫苗的作用机制和作用效果奠定基础。以脂质体转染法将带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞,探讨质粒转染HeLa细胞最佳条件的4个参数:质粒DNA剂量、脂质体剂量、最佳转染时间和质粒提取方法,在荧光显微镜下观察细胞转染情况并计算转染率。结果:在六孔细胞培养板上,当DNA/脂质体剂量为1μg/6μg时,转染效率最高,在转染后72 h达到34.02%;当用Plasmid Maxi Kit试剂盒提取质粒,转染时间为48 h,转染效率最高,达到17.88%。重组质粒pEGS/2SS转染He-La细胞条件是:采用试剂盒(Plasmid Maxi Kit)提取的质粒,DNA和脂质体的剂量分别为1μg与6μg,转染时间48 h,此时的转染效率最高,达17.88%。
- 何晓红曹少先茆达干杨利国
- 关键词：脂质体HELA细胞
