“十五”国家科技攻关计划(2004BA705B03)
- 作品数：4 被引量：45H指数：3
- 相关作者：胡忠义王洁翁心华张文宏乐军更多>>
- 相关机构：复旦大学同济大学附属肺科医院上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 噬菌体法同时检测四种一线抗结核药物耐药性被引量：39
- 2006年
- 目的探讨噬菌体检测技术(PhaB)同时快速检测四种一线抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值。方法应用PhaB同时测定139株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对链霉素(S)、异烟肼(H)、利福平(R)和乙胺丁醇(E)的耐药性,并与Bactec-960药敏结果比较,对两法检测结果不符的菌株进行最低抑菌浓度(MIC)测定。结果PhaB检测S、H、R、E药敏结果与Bactec-960药敏结果符合率分别为97.1%、99.3%、95.7%和95.0%。如以Bactec-960药敏结果为判断标准,则PhaB检测S的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值(PPV、NPV)及准确性分别为90.0%、99.1%、96.4%、98.2%和97.1%;检测H的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为97.9%、98.9%、97.9%、98.9%和95.0%;检测R的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为86.2%、97.3%、89.3%、96.4%和95.0%;检测E的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为81.0%、97.5%、85.0%、96.6%和95.0%。共有13株菌株19个药敏结果PhaB与Bactec-960检测结果不符。MIC检测结果有12株18个药敏结果支持PhaB结果,1株1个药敏结果支持Bactec-960结果。结论PhaB同时检测S、H、R、E药敏结果与Bactec-960结果有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法。
- 王洁崔振玲胡忠义张滢蓉乐军张文宏翁心华
- 关键词：分枝杆菌噬菌体微生物敏感性试验
- 三种方法检测结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性的比较被引量：3
- 2007年
- 目的探讨绝对浓度法、液体培养基最低抑菌浓度(MIC)法和噬菌体生物扩增(PhaB)法检测结核分枝杆菌(MTB)吡嗪酰胺(PZA)耐药性的临床应用价值。方法应用3种方法同时检测90株MTB临床分离株PZA耐药性,并比较检测结果的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度。结果90株MTB临床分离株用绝对浓度法、液体培养基MIC法和PhaB法3种方法分别测得21株、33株、22株敏感株和69株、57株、68株耐药株。若以绝对浓度法测定结果为判断标准,则PhaB法检测PZA耐药性的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度分别为94.2%、85.7%、95.6%、81.8%、92.2%;若以液体培养基MIC法测定结果为判断标准,则PhaB法检测的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度分别为98.2%、63.6%、82.4%、95.5%、85.6%;若以绝对浓度法和液体培养基MIC法测定结果为判断标准,则PhaB法检测的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度分别为96.4%、90.0%、96.4%、90.0%、94.7%。结论绝对浓度法尽管是目前国内常用的方法,但影响因素较多;液体培养基MIC法测定虽能提早报告药物敏感结果,但检测条件尚需优化;PhaB法检测快速、简便、安全,有一定的应用价值。
- 史可云王洁杨华张文宏翁心华胡忠义
- 关键词：抗药性吡嗪酰胺分枝杆菌噬菌体
- 结核分枝杆菌Rv3369基因的表达和纯化被引量：1
- 2006年
- 在大肠杆菌中高效表达结核分枝杆菌Rv3369蛋白,获得纯化的重组蛋白rRv3369。通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增Rv3369基因;以质粒pET28a为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3);以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,通过SDS-PAGE鉴定rRv3369在大肠杆菌中的表达,确定rRv3369在大肠杆菌中的表达形式;采用Ni-NTA His.Bind Resin来纯化重组蛋白。重组质粒pET28a-Rv3369中目的基因测序结果与报道序列相同。分子量约19.5kDa,表达量约占菌体总蛋白的18%,纯化后的重组蛋白样品经SDS-PAGE和激光密度扫描分析表明其纯度为90%以上,每100mL培养菌可获得1.56mg左右的重组蛋白。用亲和层析法纯化的重组蛋白纯度较好。
- 吕冲姜昕顾晓玲王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌基因表达
- 噬菌体法与比例法在结核分枝杆菌药敏检测的比较研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨噬菌体检测技术(PhaB)同时快速检测4种一线抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值。方法应用PhaB同时测定53株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药性,并与比例法的药敏结果比较,对2种方法检测结果不符的菌株进行Bactec-960药敏测定。结果PhaB检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与比例法药敏结果符合率分别为94.3%、90.6%、96.2%和88.7%。共有7株菌株16个药敏结果PhaB与比例法检测结果不符。Bactec-960检测结果有5株12个药敏结果支持PhaB结果,2株4个药敏结果支持比例法结果。结论PhaB同时检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与比例法检测结果有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法。
- 戴俊华吴蓉康向东胡忠义王洁
- 关键词：分枝杆菌结核比例法药物敏感试验
